凈血寧口服液中人參總皂甙含量測(cè)定的研究

1、    凈血寧口服液中人參總皂甙含量測(cè)定的研究        凈血寧口服液是一種保健調(diào)脂藥品。本品以絞股藍(lán)、黃芪、白術(shù)、淫羊藿、決明子、澤瀉、丹參等為原料，經(jīng)水提、酒沉濃縮而成。具有益氣消痰、健脾補(bǔ)腎，祛濕化瘀的功效，適用于高血脂癥。絞股藍(lán)系君藥，其主要成分為人參皂甙，能與香草醛、高氯酸溶液反應(yīng)顯色，據(jù)此，我們建立了測(cè)定凈血寧口服液中人參總皂甙含量的方法。本法穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，切實(shí)可行，現(xiàn)介紹于下。1儀器與試劑分光光度計(jì)(751G上海分析儀器廠)；所用試劑；均為分析純樣品：永安

2、藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；對(duì)照品：絞股藍(lán)含有70余種皂甙1，它們均具有與人參皂甙相似的四環(huán)三萜基本結(jié)構(gòu)，其中5種與人參皂甙Rb1、Rb2、Rb3、Rd及F2相同，因此，選定以人參皂甙Rb1為對(duì)照品，測(cè)定制劑中總皂甙含量，作為控制制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。人參皂甙Rb1對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。2提取條件的選定選擇提取條件時(shí)，以經(jīng)水飽和的正丁醇為溶劑，對(duì)不同提取次數(shù)和溶劑體積進(jìn)行比較。(見(jiàn)表1、2)說(shuō)明提取3次，相對(duì)提取率已達(dá)94%；提取3次含量為0.556%提取5次含量為0.564%，結(jié)果相近。所以本文擇定提取3次，提取溶劑體積為50ml。表1提取率試驗(yàn)(n=2)提次次數(shù)12345每次提取率(

3、%)73.013.17.83.82.2累計(jì)提取率(%)73.086.193.997.799.9表2不同體積溶液提取的比較(n=3)溶劑體積(ml)255075含量(%)0.5120.5560.5483呈色條件及測(cè)定波長(zhǎng)的選擇絞股藍(lán)皂甙與香草醛、高氯酸(或硫酸)混合可產(chǎn)生紫色反應(yīng)。曾用香草醛與77%硫酸混合進(jìn)行顯色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品在500600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)最大吸收。后改用香草醛與高氯酸混合顯色，對(duì)照品溶液與供試品溶液在550±10nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有最大吸收。由于供試品所含皂甙成分復(fù)雜，影響因素較多，且吸收峰較為平緩，所以最大吸收波長(zhǎng)有一定范圍，與單一成分的對(duì)照品溶液吸收波長(zhǎng)有些距離。根

4、據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)資料及標(biāo)準(zhǔn)，所以選擇550nm波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。 4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取人參皂甙Rb1對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml中含1.2mg的溶液，搖勻，精密量取0、50、100、150、200、250l，置水浴上蒸干，分別各加新鮮配制的5香草醛冰醋酸溶液02ml和高氯酸08ml，搖勻，置60水浴中加熱15min。取出，迅速移入冰水中冷卻2min，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，立即在550nm波長(zhǎng)處分別用分光光度計(jì)測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算回歸方程，Y2033X00244，r09998，表明皂甙在003480695mg范圍內(nèi)呈良好

5、的線性關(guān)系。5重現(xiàn)性試驗(yàn)取制劑按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定5次（同一批號(hào)），結(jié)果（見(jiàn)表3），表明該法重現(xiàn)性較好，RSD3。表3重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果（n5）實(shí)驗(yàn)號(hào)吸收度RSD（）1068320692306752240665506556顯色穩(wěn)定性試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，呈色后在不同時(shí)間內(nèi)測(cè)定，以考察顯色穩(wěn)定性（見(jiàn)表4）。試驗(yàn)表明隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，吸收度呈緩慢下降。因此，正文規(guī)定顯色后放入冰水中冷卻2min，加冰醋酸后，立即進(jìn)行測(cè)定，以減少誤差。 表4顯色穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)間（min）02510152030456090120吸收度028802860282027802730269026202550242022802177空白

6、試驗(yàn)除以02ml的正丁醇代替樣品外，其他按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，試劑空白吸收度均為003（n5）。由于試劑空白吸收度較小，可用冰醋酸溶液代替試劑空白，所以正文不規(guī)定用試劑空白校正。 8回收率測(cè)定采用加樣品回收法測(cè)定回收率，精密稱取不同量的Rb1對(duì)照品，加入已知含量的樣品中，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定（見(jiàn)表5）。試驗(yàn)表明本法回收率較高，方法可行。表5回收率測(cè)定（n5）實(shí)驗(yàn)號(hào)樣品中總皂甙量（mg）添加人參皂甙Rb1量（mg）測(cè)定總皂甙量（mg）回收率（）平均回收率（）RSD（）13061374389642306214519995328428955694197930428440567997552675588359189樣品測(cè)定精密量取本品10ml，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇溶液提取3次（20、15、10ml），合并正丁醇溶液。用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10ml。棄去水層，正丁醇溶液置水浴上蒸干。殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取200l，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法項(xiàng)下的方法，自“置水浴上蒸干”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂甙Rb1的含量（見(jiàn)表6）。表65批樣品的含量測(cè)定批號(hào)總皂甙含量（n3）（）RSD（）9806010