培養(yǎng)基使用標(biāo)準(zhǔn)

1、 1. 目的 規(guī)范本中心微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的使用和管理。 2. 適用范圍 本規(guī)程適用于培養(yǎng)基的儲(chǔ)存、融化和廢棄等。 3. 職責(zé) 3.1 檢驗(yàn)人員：按照本規(guī)程規(guī)范使用培養(yǎng)基、定期檢查培養(yǎng)基是否失效。 3.2 科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員規(guī)范使用培養(yǎng)基。 4. 使用程序 4.1 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存 4.1.1 除特殊說明和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，通常情況下基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）應(yīng)在 4 C 冰箱中保存不超過 3 個(gè)月，或在室溫（20 C）下保存不超過一個(gè)月1。 4.1.2 滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)置適當(dāng)條件下保存至規(guī)定的有效期，并對(duì)保存條件進(jìn)行確證 , 詳見表 1。 表 1 培 養(yǎng)基 28 C條件保存期限23

2、培養(yǎng)基種類 保存條件 保存時(shí)間 予土匚冷 K 甘 不密封 2 周 平板培養(yǎng)基 密圭寸 68 周 試管培養(yǎng)基 不密封 24 周 （棉塞） 密圭寸 810 周 試管培養(yǎng)基 不密封 8 周 （軟木塞或臘封） 密圭寸 1618 周 4.2 瓊脂培養(yǎng)基的融化 4.2.1 將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法 （如高壓鍋中的蒸汽，如 105 C） 使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重加熱時(shí)間，避免過度加熱。 4.2.2 培養(yǎng)基融化后放入 47 C2 C的恒溫水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱中保溫，直至使用。 4.2.3 融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般不應(yīng)超過 4h，不可二次融化。 4.3 培養(yǎng)基的脫氣

3、必要時(shí)，將培養(yǎng)基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱 15min，加熱時(shí)松開容器的蓋 子；加熱后蓋緊，并迅速冷卻至使用溫度。 4.4 添加成分的加入 Xx公司 作業(yè)指導(dǎo)書 編號(hào)：xxx/xx-xx-20 xx 培養(yǎng)基使用規(guī)程 版本/修改次：1/0 第 1 頁(yè) 共 2 頁(yè) 對(duì)熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至 47 C2C時(shí)再加入。滅菌的添加成分在加入 Xx公司 作業(yè)指導(dǎo)書 編號(hào)：xx/xx-xx-20 xx 培養(yǎng)基使用規(guī)程 版本/修改次：1/0 第 2 頁(yè) 共 2 頁(yè) 期等內(nèi)容。 4.5.4 對(duì)于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基。應(yīng)先對(duì)瓊脂表面進(jìn)行干燥：揭開平皿 蓋，將平板倒扣于烘箱/培養(yǎng)箱中（溫

4、度設(shè)為 25 C50 C）；或放在有對(duì)流風(fēng)的無(wú)菌凈化臺(tái) 中，直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商業(yè)化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按 照廠商提供的說明使用。 4.6 培養(yǎng) 4.6.1 培養(yǎng)時(shí)每垛最多堆放六個(gè)平板，平板間要留有空隙以保證空氣流通，使培養(yǎng)物的 溫度盡快與培養(yǎng)箱溫度達(dá)到一致。 4.6.2 在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基會(huì)損失水分。當(dāng)水分損失的里大于培養(yǎng)基總里的 15%時(shí)， 就會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)。造成培養(yǎng)基水分損失的因素較多，如培養(yǎng)基成分，平皿中培養(yǎng)基 總量和培養(yǎng)箱的類型等（如使用帶風(fēng)扇的培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱中的濕度偏低，平板在培養(yǎng)箱中 位置靠近培養(yǎng)箱內(nèi)壁等），操作時(shí)應(yīng)注意避免。 4.7 培養(yǎng)基的棄置 培養(yǎng)基廢棄前，實(shí)驗(yàn)室米用 121 C、15 分鐘蒸汽滅菌，或煮沸消毒 30 分鐘。 5 .參考文獻(xiàn) 5.1 SN/T1538.1-2005.培養(yǎng)基制備指南 第一部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則 S. 5.2 王宏明.微生物檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程與質(zhì)量控制及檢測(cè)數(shù)據(jù)分析處理實(shí)用手冊(cè) M 北 京：衛(wèi)生科技出版社，2007