微生物實驗室操作作業(yè)規(guī)程樣本(共18頁)

1、微生物實驗室操作作業(yè)規(guī)程微生物實驗室操作規(guī)程【SOP 】 細菌室工作守則（微生物室 SOP 之一） 細菌室消毒隔離措施（微生物室 SOP 之二） 微生物實驗室安全與防護（微生物室 SOP 之三） 細菌室內(nèi)質(zhì)控制度（微生物室 SOP 之四） 細菌室操作技術(shù)規(guī)范（微生物室 SOP 之五） 無菌間規(guī)章制度（微生物室 SOP 之六） 菌（毒種）管理辦法（微生物室 SOP 之七） 細菌室儀器維護保養(yǎng)及質(zhì)控措施 （微生物室 SOP 之八） 標準菌株保存及使用（微生物室 SOP 之九） 細菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定（微生物室 SOP 之十） 標本采集及保存要求 （微生物室 SOP 之十一） 室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序（微生

2、物室 SOP 之十二） 標本拒收標準（微生物室 SOP 之十三） 溫度失控處理措施 （微生物室 SOP 之十四） 超凈工作臺作業(yè)指導（微生物室 SOP 之十五） 標本的接種和移種法（微生物室 SOP 之十六）細菌室工作守則（微生物室SOP 之一）。，并做好實驗前的各項準備工作。，不準吸煙、吃東西及用手觸摸面部。盡量減少室內(nèi)活動，以免引起風動，無關(guān)人員禁入。，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠離操作臺。、編號及試驗記錄。未發(fā)出報告前，請勿丟棄標本。，接種環(huán)用完后應(yīng)立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)。，應(yīng)立即用過氧乙酸消毒或浸于 3%來蘇兒溶液中 5-10分，再用肥皂洗手并沖洗干凈；如誤入

3、口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用 1:1000 高錳酸鉀溶液或 3%雙氧水漱口，根據(jù)實際情況服用有關(guān)藥物。，如污染了實驗臺或地面，應(yīng)用 3%來蘇兒覆蓋其上半小時，然后清洗；如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。，應(yīng)沉著處理，切勿慌張，立即關(guān)閉電閘，積極滅火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠離火源，妥善保存。、酒精燈等是否關(guān)閉，觀察記錄培養(yǎng)箱、冰箱溫度及工作情況，用有消毒液的抹布將操作臺擦拭干凈，并將試劑、用具等放回原處，清理臺面，未污染的廢棄物扔進污物桶，有菌廢棄物應(yīng)送高壓滅菌后處理。，并用肥皂和清水洗凈。，經(jīng)常清潔，注意防塵和防潮。細菌室消毒隔離措施（微生物室SOP 之二），上班前、下班后

4、開紫外燈（最少半小時）進行空氣消毒。，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠離操作臺。、蓋片、平皿、試管等用消毒液浸泡，經(jīng)煮沸后清洗或丟棄。，所有用于試驗的反應(yīng)板、吸頭等用消毒液浸泡（至少 24 小時以上）后清洗或丟棄。（細菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標本陽性或陰性均用消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均應(yīng)徹底消毒。、持物鉗、鑷子等的消毒液要定期更換。，不要立即用水沖洗，應(yīng)先用紙巾、布等敷料加上消毒液（如 5%石炭酸、3%來蘇兒等）消毒 30 分鐘以上，然后再清洗。如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。，應(yīng)立即用肥皂洗手并沖洗干凈，再外用消毒

5、藥水，如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用 1:1000 高錳酸鉀溶液或 3%雙氧水漱口，必要時根據(jù)實際情況服用有關(guān)藥物。微生物實驗室安全與防護（微生物室 SOP 之三）1在工作區(qū)內(nèi)禁止飲食，吸煙和存放食物及使用化妝品。2實驗室里應(yīng)保持整潔，不存放與工作無關(guān)的雜物。3工作臺每天至少用消毒劑清潔一次，在溢滲傳染物后要立即消毒、清洗；進入無菌室必須穿工作服，戴口罩、帽子。4在各種操作進程中均應(yīng)盡量避免或減少氣溶膠產(chǎn)生。5實驗工作區(qū)禁止無關(guān)人員出入，尤其要嚴禁兒童進入。6工作人員在處理傳染性物質(zhì)或動物之后，以及在離開實驗室時要洗手。7凡發(fā)生溢漏事故或接觸傳染性物質(zhì)后，均應(yīng)立即報告實驗室監(jiān)督員或?qū)嶒炇抑魅?，?/p>

6、做好書面記錄及采取相應(yīng)措施。8結(jié)核桿菌的培養(yǎng)及標本涂片務(wù)必在生物安全柜里操作。9. 有涉及感染性材料的操作應(yīng)在生物安全柜中進行，如結(jié)核桿菌培養(yǎng)、感染性組織等。10. 工作人員在進入實驗室工作區(qū)前，應(yīng)在專用的更衣室（或緩沖間）穿著背開式工作服或其它防護服。工作完畢后必須脫下工作服，不得穿工作服離開實驗室?？稍俅问褂玫墓ぷ鞣仨毾认竞笄逑础?1. 工作時必須戴手套（兩副為宜）。一次性手套必須先消毒后丟棄。12. 在實驗室中必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水，且易于取用。可配備應(yīng)急藥品。細菌室內(nèi)質(zhì)控制度（微生物室SOP 之四）1、每位工作人員必須加強質(zhì)控意識，以質(zhì)量控制工作為核心，認真做好

7、各項質(zhì)控試驗和記錄。2、加強質(zhì)量控制和專業(yè)理論知識的學習，規(guī)范操作，正確分析處理結(jié)果。3、一旦發(fā)現(xiàn)失控，及時采取相應(yīng)措施，糾正失控結(jié)果。4、每天觀察培養(yǎng)箱、冰箱的溫度，并做好記錄。5、無菌間每周監(jiān)測一次，紫外線消毒滅菌情況，并做好記錄。6、每月對高壓蒸汽滅菌器、干熱鼓風干燥箱進行一次滅菌效果監(jiān)測。生物檢驗室操作技術(shù)規(guī)范（微生物室 SOP 之五）1、微生物檢驗室工作人員均應(yīng)具備細菌傳染、消毒、滅菌知識。2、微生物檢驗專業(yè)人員不斷更新知識，了解微生物檢驗新進展。3、每次發(fā)出的微生物報告應(yīng)認真復審，分析報告、評價報告。4、工作人員加強有菌觀念，無菌操作。5、當工作環(huán)境被細菌污染，必須立即消毒處理，報

8、告主管人員，采取必要措施。6、工作人員被細菌培養(yǎng)物污染應(yīng)消毒處理，必要時給予藥物治療，并向主管負責人報告，采取特殊措施。無菌間規(guī)章制度（微生物室 SOP 之六）1、每一個工作人員必須樹立無菌觀念，嚴格進行無菌操作。在無菌室內(nèi)必須戴帽子、口罩，進行無菌操作。2、每天用紫外線消毒，每月檢查一次紫外燈的無菌效果。3、無菌室內(nèi)各種廢棄物品必須消毒。4、實驗完畢后，用含氯制劑 1000mg/L 消毒桌面、地面。菌（毒種）管理辦法（微生物室 SOP 之七）1. 菌種保管應(yīng)有專人負責，保存于冰箱中，房門專人加鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴格交接手續(xù)。2、菌種應(yīng)有嚴格的登記，包括形態(tài)，分離日期，鑒定

9、日期，簽發(fā)者，主要鑒定性能（包括形態(tài)、染色、抗原結(jié)構(gòu)、動物致病力等），并注明使用、轉(zhuǎn)移、銷毀情況及原因。3、各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應(yīng)及時更換。4、菌種保存范圍及向外單位轉(zhuǎn)移，應(yīng)按國家衛(wèi)生部規(guī)定執(zhí)行。5、所有存在菌種應(yīng)具備清單。細菌室儀器維護保養(yǎng)及質(zhì)控措施（微生物室 SOP 之八）我室主要儀器為 BacT/Alert 120、BACTEC9050 血培養(yǎng)儀和 Vitek32、BD 鳳凰全自動細菌鑒定和藥敏分析儀，為了使儀器能夠高質(zhì)量的運行，使儀器報告的結(jié)果準確可靠，特制定以下儀器維護、保養(yǎng)和質(zhì)控措施。一、BacT/Ale

10、rt 120 、BACTEC9050 血培養(yǎng)儀的維護、保養(yǎng)和質(zhì)控措施，儀器培養(yǎng)箱溫度的報告里外是否一致。，包括清潔外殼、瓶孔、濾網(wǎng)等。二、Vitek32、BD 鳳凰全自動細菌鑒定和藥敏分析儀的維護、保養(yǎng)和質(zhì)控措施。，質(zhì)控合格后才能用于臨床檢測。，包括清潔外殼、卡片架、濾網(wǎng)等。標準菌株保存及使用（微生物室 SOP 之九）概述：標準菌株是細菌室室內(nèi)質(zhì)控工作必不可少的、重要的生物資源，我室的標準菌株主要來自省臨檢中心的發(fā)放和從衛(wèi)生部臨檢中心以及國家菌種保存中心購買所得，為了讓標準菌株能夠得到合理的應(yīng)用，特制定以下規(guī)定。，包括菌種的菌名、編號、購買時間、保存地點、記錄人等，包括標準品的名稱、編號、使用

11、時間等。，應(yīng)大量增殖，然后分裝在含 10-15%甘油的胰蛋白胨肉湯中，20以下保存。，如超過三次將不在視為標準菌株使用。，不得再次凍存。細菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定（微生物室 SOP 之十） 概述鑒于細菌室工作瑣碎煩雜且千頭萬緒，為了使細菌室的工作能夠保質(zhì)保量地順利完成，特將細菌室暫定為兩個崗位，以明確工作范圍、增強責任心、便于日常工作的完成。當然由于細菌室不同崗位工作量的隨機性較大，故我室要求大家發(fā)揚既分工，又協(xié)作的精神，共同完成細菌室工作。 崗位職責各崗位工作人員要求嚴格按照作業(yè)指導書進行操作，高質(zhì)量的完成本崗位工作，如遇到問題須提出經(jīng)討論解決。 崗位分工崗位：完成細菌培養(yǎng)標本（號菌培養(yǎng)除外）的結(jié)果

12、觀察處理及報告發(fā)放。崗位：完成儀器的維護、保養(yǎng)和質(zhì)控工作等。 環(huán)境條件室內(nèi)溫度、濕度，每天一次，上午記錄。 恒溫設(shè)備 孵箱、普通冰箱，每天一次，上午記錄。 分析儀器常規(guī)每日保養(yǎng)一次，發(fā)現(xiàn)問題隨時詳細記錄；質(zhì)控按要求測試完畢后，及時手工記錄。 標本與結(jié)果不合格標本記錄、危急值報告記錄、結(jié)果記錄。 崗位記錄（附表：細菌室崗位記錄表） 其它記錄，如交班記錄等。溫度 1828，濕度 2080。標本采集及保存要求（微生物室 SOP 之十一）1 總則：用于細菌培養(yǎng)的標本在收集時應(yīng)注意嚴格無菌操作和及時送檢，檢測后標本應(yīng)妥善保存。 下呼吸道分泌物（痰液）令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道

13、咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時送檢。 尿液（中段尿）護理人員協(xié)助采取中段尿約 3ml 入無菌試管中，及時送檢。 糞便：取有粘液、膿血部分的糞便置玻璃大便專用管中，如為稀水便，可直接收集于玻璃管中，及時送檢。 眼、耳、鼻、喉拭子：將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌試管內(nèi),及時送檢。 膿液：用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌試管中，及時送檢。 血液： 凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時采血，應(yīng)

14、 在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標本。當然在病人發(fā)熱或寒顫時采集也可。 成人每次采血 510ml，小兒采血 23ml； 嚴格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，輕輕搖勻， 從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時要及時送檢。 穿刺液：胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液：嚴格無菌抽取后，注入含肝素抗凝的無菌試管中，輕輕顛倒試管 10 余次，使肝素與穿刺液混勻達到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)及時送檢。 膽汁：由?？漆t(yī)生以無菌方法取引流液 10ml 注入無菌試管。 腦脊液：以無菌方法取腦脊液 35ml，置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無菌

15、注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，及時送檢。 生殖器官標本：陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時，采集的標本應(yīng)床旁接種并及時放入孵箱培養(yǎng)。 燒傷標本：以無菌棉拭子直接采取多個部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌試管中. 支原體（解脲、人型）培養(yǎng)+藥敏的標本采集、熱抵抗力差，標本采集后應(yīng)盡快接種支原體運送培養(yǎng)基送檢。 男性：用細的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi) 。細菌室標本原則上要求及時送檢、及時處理，不得保存。室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序（微生物室 SOP 之十二）一、BacT/Alert 120 血培養(yǎng)儀室內(nèi)質(zhì)控處理程序1當 BacT/Alert 120血

16、培養(yǎng)儀質(zhì)控失敗時，儀器會提示你對該瓶孔進行定標，通常定標都能通過，只要定標過了，儀器就能正常工作。如儀器定標不能通過，就要請廠家工程師對儀器進行檢測，并對儀器的有關(guān)參數(shù)進行調(diào)整，直到儀器合格后才能進行日常工作并填寫失控報告。2每批新購買的試劑必須進行室內(nèi)質(zhì)控，當質(zhì)控結(jié)果不能符合要求時，應(yīng)通知組長協(xié)助處理，進行失控原因分析。 失控的原因分析 自身原因 質(zhì)控菌株、卡片、無菌鹽水等出現(xiàn)質(zhì)量問題。 質(zhì)控菌株不符合所檢測卡片的要求。 上卡操作中出現(xiàn)問題，如菌液濃度不準等 儀器工作是否正常。 室溫是否符合分析要求。 失控的處理 操作不規(guī)范時應(yīng)嚴格按作業(yè)指導書重新檢測一次。仍失控進行下一步。 檢查質(zhì)控菌株及

17、卡片是否在有效期內(nèi)，質(zhì)量如何？無菌鹽水是否被污染以及標準菌株是否符合卡片的要求等。在保證質(zhì)控菌株、卡片、無菌鹽水等符合要求的情況下仍失控則進行下一步。 做可能影響檢測的儀器相應(yīng)部分保養(yǎng)，仍失控進行下一步。 請儀器工程師分析，寫失控報告。直到質(zhì)控在控后重新檢測。標本拒收標準（微生物室 SOP 之十三）、鑒定、計數(shù)、藥敏操作：若送檢標本不是運送培養(yǎng)基送檢則為不合格標本。：穿刺液標本如發(fā)現(xiàn)嚴重凝固則拒收。：如標本為非無菌管采集則拒收。：如標本為非無菌管采集則拒收。：挑取痰標本直接涂片鏡檢，WBC10/LP，上皮細胞25/LP 不適合做細菌培養(yǎng)。：如標本為非無菌管采集則拒收。：如標本為非無菌管采集則拒

18、收。：如為淋球菌培養(yǎng)沒有直接接種到淋球菌培養(yǎng)基上則拒收。、及時接種、及時培養(yǎng)，不能保存。除非特殊情況可置于冰箱保存，對分離怕冷的細菌時，應(yīng)注意標本的保暖。溫度失控處理措施（微生物室 SOP 之十四）、冰箱的溫度于溫度記錄本上，如發(fā)現(xiàn)普通培養(yǎng)箱的溫度超過37（不包括 37）或低于 34（不包括 34）；真菌培養(yǎng)箱溫度超過 31（不包括31）或低于 25（不包括 25）；冷藏冰箱的溫度超過 8（不包括 8）或低于 2（不包括 2）；冷 凍冰箱的溫度超過10（不包括10）或 低于30（不包括30），應(yīng)立即追溯其失控的時間和原因。 如失控的原因可以馬上糾正（如冰箱斷電、冰箱門未關(guān)好、溫控調(diào)節(jié)器未正確控

19、制、冰箱嚴重結(jié)霜、溫度計損壞等），則由本室人員馬上糾正并填寫失控報告。 如冰箱、培養(yǎng)箱本身出現(xiàn)機械故障，本室人員應(yīng)馬上通知維修部或維修商，同時根據(jù)排除故障時間的長短是否會對其中的物品質(zhì)量造成影響而采取相應(yīng)的措施（ 如把里面的物品轉(zhuǎn)移到能滿足需要條件的環(huán)境中），并填寫失控報告單。，檢查培養(yǎng)物的生長情況。. 如果培養(yǎng)基的菌落生長良好，則按常規(guī)程序進行檢驗。如果培養(yǎng)基的菌落生長受抑制，則取標本重新接種，如標本確實無法再次接種，則應(yīng)與臨床醫(yī)生聯(lián)系、解釋并請醫(yī)生重新采集標本送檢。如有細菌生長，則應(yīng)補做藥敏試驗，并填寫遲發(fā)報告單記錄表，并寫明原因。，并在溫度記錄本上用紅筆記錄失控的溫度度數(shù)，故障處理后應(yīng)利

20、用培養(yǎng)箱、冰箱的溫度調(diào)節(jié)器，把溫度調(diào)回到規(guī)定范圍的中值，并把專業(yè)人員的檢查的結(jié)果記錄在儀器檔案袋中。另外還需填寫內(nèi)部質(zhì)量控制失控報告單，當溫度再次是失控時，再次記錄溫度的讀數(shù)，并且上報負責人。超凈工作臺作業(yè)指導（微生物室 SOP 之十五）1. 目的 規(guī)范凈化工作臺操作與維護工作，確保儀器正常運作。2. 適用范圍：本實驗方法適用于微生物檢驗中凈化工作臺操作與維護管理。3. 檢驗人員職責：負責此儀器操作和維護管理4. 操作及維護規(guī)程 操作規(guī)程 使用工作臺時，應(yīng)提前 50 分鐘開機，同時開啟紫外殺菌燈，處理操作區(qū)內(nèi)表面積累的微生物，30 分鐘后關(guān)閉殺菌燈（此時日光燈即開啟），啟動風機。 對新安裝的或長期未使用的工作臺，使用前必需對工作臺和周圍環(huán)鏡先用超靜真空吸塵器或用不產(chǎn)生纖維的工具進行清潔工作，再 采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進行滅菌處理。 操作區(qū)內(nèi)不允許存放不必要的物品，保持工作區(qū)的潔凈氣流流型不受干擾。 操作區(qū)內(nèi)盡量避免作用明顯擾亂氣流流型的動作。 操作區(qū)的使用溫度不可以超過 60。 維護規(guī)程及維護方法 根據(jù)環(huán)境的潔凈程度，可定期（一般 23 個月）將粗濾布（滌綸無紡布）拆下清洗或給予更換。 定期（一般為一周）對環(huán)境周圍進行滅菌工作，同時經(jīng)常用紗布沾酒精或丙酮等有機溶劑將紫外線殺菌燈表面擦干凈，保持表面清潔，否則會影響殺菌效果。 當加大風機電壓已不能使風速達到 。 更換過濾器