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文檔簡介

1、質粒提取試劑盒說明書質粒是能夠自主復制的小型環(huán)狀DNA分子，多存在于細菌及酵母菌 等生物中，是基因工程中最常用的運載體，擔負著將目的基因轉移到 宿主細胞中的重要使命。基因表達載體的構建（也就是目的基因與運載體結合）是基因工程的 核心步驟，用作運載體的質粒更是掌上明珠。我們需要從細菌中分離 出質粒以備后用。如果分離不好的嘛.提取出的目的基因就只能眼巴巴地望著彼岸的受體細胞吹涼風。知道厲害了吧如何提取質粒呢？嘶獻上,頭腦颶一下熱身之后,看一看質粒提取的具體操作。分離質粒的方法有很多，但都離不開三個主要步驟。搖菌培養(yǎng)即培養(yǎng)細菌使質粒擴增1 將鑒定測序正確的克隆菌液涂在LB固體平板（種培養(yǎng)基，使質 粒

2、擴增L2.置于37°C恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)12-17h ,待長出菌落。3滅菌15ml離心管內加入5ml含抗生素的LB液體培養(yǎng)基，編號標 記。4. 制瞰單克隆菌團放置液體培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)基放置1個菌落。5. 37°C , ISOrpm ,振蕩培養(yǎng)過夜。現(xiàn)在,團團質粒豐富細菌準備就緒任人宰割啦。分割線收獲細菌并裂解21.離心擴增好的菌液，按說明書將菌液重懸，轉入1.5ml離心管中。2用質粒小量抽提試劑盒，按說明書要求提取質粒。3細菌高速離心lmin,徹底去除上清。4加入250ulRB溶液，振蕩器充分懸浮細菌。5加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次，使細菌裂解，室溫，放 置 2mino6加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次，使之充分中和，室溫, 放置2min。7室溫，1500rpm ,高速離心15mino8、將吸附柱放入收集管內，離

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