免疫學(xué)檢驗(yàn)2019考試重點(diǎn)總結(jié)

1、免疫學(xué)檢驗(yàn) 1 1 .T.T 細(xì)胞：T T 細(xì)胞是在胸腺中發(fā)育成熟的淋巴細(xì)胞。 2 2 .B.B 淋巴細(xì)胞：B B 淋巴細(xì)胞是在骨髓內(nèi)發(fā)育成熟的細(xì)胞。 3 3 .最常見的主要輔佐細(xì)胞有單核吞噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。 4 4 .抗原的特性：免疫原性和免疫反應(yīng)性。 5 5 .影響抗原免疫性的因素 抗原因素：1 1.異質(zhì)性指抗原與機(jī)體成分結(jié)構(gòu)的差異程度，是作為 抗原的必要條件。2,2,抗原分子的理化性質(zhì)，如分子量大小，化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，通常環(huán)狀分子蛋白質(zhì)較直鏈分子蛋白質(zhì)免疫原性強(qiáng)，還有分子構(gòu)像與易接近性，以及物理狀態(tài)。 (2)(2)機(jī)體因素：( (宿主因素)1)1.遺傳因素 2 2.年齡、性別與健康狀態(tài)

2、3 3.抗原劑量及進(jìn)入機(jī)體的途徑，進(jìn)入機(jī)體途徑以皮內(nèi)注射免疫原性最佳，皮下注射次之，肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射再次，口服免疫原性最差。 6 6 .抗原表位：又稱抗原決定簇，指存在于抗原分子表面的，能與 TCR/BCTCR/BC越抗體特異性結(jié)合，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)。 7 7 .不完全抗原：僅有免疫反應(yīng)性而無免疫原性的物質(zhì)，又稱半抗原, 多為一些簡單的小分子物質(zhì)、藥物等。 8 8 .根據(jù)抗原刺激 B B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體時(shí)是否需要 T T 細(xì)胞輔助分類分為：胸腺依賴性抗原和胸腺非依賴性抗原。 M2-tm4E與IT的區(qū)別 ii,能 干1依 mA T圖利用U綿內(nèi)點(diǎn)心 息舌需 理胤輔助 必需 桓

3、心小隨 多用事白域均成 無快.擊*帕 產(chǎn)號就弊的史中 IMkG等 免痕記比 可產(chǎn)生 不產(chǎn)生 我瓶而答 悴造免疫部刑制免境 體雁亮度 9 9 .超抗原：是指能直接非特異性激活某些 T T 細(xì)胞亞型或 B B 細(xì)胞亞型的物質(zhì)。 超抗原可分為 T T 細(xì)胞超抗原和 B B 細(xì)胞超抗原，T T 細(xì)胞超抗原如金黃色葡萄球菌腸毒素 A A E E 等；B B 細(xì)胞超抗原如金黃色葡萄球菌 A A 蛋白和人類免疫缺陷病毒。 1010 .免疫球蛋白的生物學(xué)功能 (1)(1)免疫球蛋白 V V 區(qū)的功能：識別弁特異性結(jié)合抗原，在體內(nèi)可直接發(fā)揮中和作用(中和病毒、毒素)，以阻止病原入侵；但不能直接溶解或殺傷帶有特異

4、抗原的靶細(xì)胞，要借助 C C 區(qū)的作用，才能清楚病原微生物或者導(dǎo)致病理損傷。 (2)(2)免疫球蛋白 C C 區(qū)的功能：1.1.激活補(bǔ)體 2 2 .與細(xì)胞 FcFc 受體結(jié)合發(fā)揮多種生物學(xué)作用： 調(diào)理作用 抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 ADCCS)ADCCS)介導(dǎo) I I 型超敏反應(yīng) 3 3 .穿過胎盤和粘膜 3.13.1 IgGIgG 為單體分子，是血清和細(xì)胞外液中含量最高的 IgIg, ,約占血 清總 IgIg 的 75%75%- -80%80% IgMIgM 為五聚體，是血清中分子量最大的 Ig,Ig,又稱巨球蛋白。也是個(gè)體發(fā)育過程中最早合成和分泌的 Ig,Ig,不能通過胎盤，若臍帶血或

5、新生兒血清中其水平升高提示有胎兒有宮內(nèi)感染，體液免疫應(yīng) 答中，其水平升高提示有近期感染。天然的血型抗體為 IgMIgM；IgMIgM 也參與IIII、IIIIII 型超敏反應(yīng)。一般不能通過血管壁，主要存在于血液中，IgMIgM 缺乏易導(dǎo)致敗血癥，其激活補(bǔ)體和免疫調(diào)理作用較 IgGIgG 強(qiáng)，在菌血癥和敗血癥的抗感染中發(fā)揮重要作用。 IgEIgE 的臨床意義：IgEIgE 主要由呼吸道和消化道黏膜固有層的漿細(xì)胞產(chǎn)生，對肥大細(xì)胞及嗜堿粒細(xì)胞具有高度親和性，為親細(xì)胞性抗 體；其 FcFc 段能與肥大細(xì)胞及嗜堿粒細(xì)胞上的高親和力 IgEFIgEF 沒體 結(jié)合。介導(dǎo) I I 型超敏反應(yīng)。止匕外，IgEI

6、gE 可能與機(jī)體抗寄生蟲免疫有關(guān)。在特異性過敏反應(yīng)和寄生蟲早期感染患者血清中，特異性 IgEIgE 水平可升高。 .抗原抗體的結(jié)合力：（1 1）庫倫引力；（2 2）范德華引力（引力最?。粴滏I結(jié)合力；（4 4）疏水作用（提供的作用力最大）。 帶現(xiàn)象：在等價(jià)帶前后分別為抗體過?；蚩乖^剩，形成的沉淀 物質(zhì)少或無，這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象。出現(xiàn)抗體過剩是為前帶，出現(xiàn)抗原過剩時(shí)為后帶。 意義：只有當(dāng)抗原抗體比例合適時(shí)，才易出現(xiàn)可見反映。 .影響抗原抗體反應(yīng)的因素： 反應(yīng)物自身因素 (1)(1)抗原：抗原的理化性狀、抗原表位的種類和數(shù)目都可影響抗原抗體反應(yīng)的結(jié)果。如顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象；可

7、溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成沉淀現(xiàn)象；粗糙型細(xì)菌在生理鹽水中易出現(xiàn)自凝等現(xiàn)象。 (2)(2)抗體：抗體的來源；抗體的特異性和親和力。 反應(yīng)條件 (1)(1)電解質(zhì)；(2)PH:(2)PH:抗原抗體反應(yīng)一般以 6 68 8 為宜，過高或過低都會(huì)影響抗原抗體的理化性質(zhì)，從而導(dǎo)致不發(fā)生發(fā)應(yīng)或者出現(xiàn)非特異性凝集；(3)(3)溫度：最適為 3737C C；(4)(4)抗原抗體比例：抗原抗體在比例最合適時(shí)才易出現(xiàn)可見反應(yīng)。 .凝膠層析又稱凝膠排阻層析、分子篩層析等。它是以各種多 孔凝膠為固定相，利用物質(zhì)的相對分子量不同而達(dá)到分離的一種層析技術(shù)。 .親和層析是通過將具有親和力的兩個(gè)分子中一個(gè)固定在不溶 性載

8、體上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個(gè)分子 進(jìn)行分離純化。純化抗原先用鹽析法，再用親和層析法。 由于親和吸附的特異性很高，親和層析一次純化即可得到很純的物質(zhì)。 .電滲:在電場作用下液體對于固體支持物的相對移動(dòng)。 產(chǎn)生原因：固體支持物為多孔物質(zhì)，且?guī)в锌山怆x的化學(xué)基團(tuán)， 因此常吸附溶液中的正或負(fù)離子，使溶液相對帶負(fù)電或正電。如通常濾紙表面可有一些竣基， 瓊脂可有一些硫酸基， 而玻璃表面可有 SiSi- -OHOH 基團(tuán)等，這些基團(tuán)電離后使支持介質(zhì)表面帶電，吸附一些帶相反電荷的離子，在電場的作用下向電極方向移動(dòng)，形成介質(zhì)表面溶液的流動(dòng)，這種現(xiàn)象就是電滲。由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同事存在，所

9、以帶電顆粒的移動(dòng)同時(shí)受電泳和電滲的影響，如果電滲方向和待分離分子的電泳方向相同，則加快電泳速度；反之減緩。在選擇支持物時(shí)應(yīng)盡量避免選用高電滲作用的物質(zhì)。 .多克隆抗體：是用免疫原免疫動(dòng)物獲得的抗體，又稱抗血清或免疫血清。由于天然抗原分子中常含有多種不同的抗原決定簇，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，可以使體內(nèi)多個(gè) B B 細(xì)胞克隆被激活，產(chǎn)生針對多種抗原決定簇的免疫球蛋白，獲得的抗血清是含有多種抗體的混合物，因此稱為多克隆抗體，也稱為第一代抗體。 .免疫佐劑：同抗原一起或預(yù)先注射到機(jī)體內(nèi)，能增強(qiáng)機(jī)體對該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的非特異性免疫增強(qiáng)性物質(zhì)，稱為免疫佐劑。 目的:為了提高抗原的免疫原性，從而

10、增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫的水平，獲得高效價(jià)抗體。 弗氏完全佐劑：石蠟油+羊毛脂+卡介苗；弗氏不完全佐劑：石蠟油+羊毛脂 .單克隆抗體：是利用 B B 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)獲得的，由同一細(xì)胞（單個(gè)雜交瘤細(xì)胞）合成和分泌，在理化性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、遺傳標(biāo)記和生物學(xué)特性均完全相同的抗體，也叫第二代抗體。優(yōu) 點(diǎn)：結(jié)構(gòu)均一，純度高，特異性強(qiáng)，效價(jià)高，交叉反應(yīng)少或無， 利于實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化，可大量生產(chǎn)供應(yīng)，制備成本低；缺點(diǎn)：其鼠 源性對人具有較強(qiáng)的免疫原性， 反復(fù)用于人體后可誘導(dǎo)產(chǎn)生人抗鼠的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致集體組織的免疫病理損傷，甚至導(dǎo)致機(jī)體組 織的免疫病理損傷。 .飼養(yǎng)細(xì)胞：在體外培養(yǎng)條件下，單個(gè)或少數(shù)分散的細(xì)胞不易

11、順利生長繁殖。當(dāng)加入一定量其他活細(xì)胞后，?？纱龠M(jìn)原有少數(shù)細(xì)胞的繁殖，這種加入的細(xì)胞稱為飼養(yǎng)細(xì)胞。常用小鼠腹腔細(xì)胞或大鼠和豚鼠的腹腔細(xì)胞，其中的巨噬細(xì)胞還有清除死亡細(xì)胞的作用。此外，還可用小鼠的脾細(xì)胞或胸腺細(xì)胞或大鼠和豚鼠的腹腔細(xì)胞。在制備 McAbMcAb 的過程中，許多環(huán)節(jié)需要加飼養(yǎng)細(xì)胞，如在雜交瘤細(xì)胞篩選、克隆化和擴(kuò)大培養(yǎng)過程中。 .沉淀反應(yīng)：指可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在合適的條件下形成肉眼可見沉淀物的現(xiàn)象。 .凝膠沉淀實(shí)驗(yàn)可溶性抗原、抗體在含電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴(kuò)散形成濃度梯度，擴(kuò)散過程中二者相遇而發(fā)生特異性結(jié)合，在比 例適當(dāng)處出現(xiàn)可見的沉淀線或沉淀環(huán)。常用的凝膠有瓊脂、瓊脂 糖、

12、聚丙烯酰胺等。 .對流免疫電泳：是將雙向免疫擴(kuò)散和電泳結(jié)合，在直流電場中加速定向擴(kuò)散的雙向免疫擴(kuò)散技術(shù)。 原理：在 PH8.6PH8.6 的瓊脂凝膠中，抗原蛋白等電點(diǎn)（4545）較低，帶較多的負(fù)電荷，且分子較小，向正極的泳動(dòng)速度大于向負(fù)極的電滲，抗原泳向正極；抗原蛋白等電點(diǎn)較高，帶較少的負(fù)電荷， 且分子較大，向正極的泳動(dòng)速度小于向負(fù)極的電滲，抗體泳向負(fù) 極。 .免疫電泳：是將蛋白質(zhì)區(qū)帶電泳和雙向免疫擴(kuò)散結(jié)合的免疫化學(xué)分析技術(shù)。 原理：由于不同的抗原蛋白質(zhì)分子所帶電荷、分子量及分子構(gòu)型 有差異，在瓊脂凝膠中進(jìn)行電泳時(shí)，遷移速率和方向不同。先利用區(qū)帶電泳將樣品中不同的抗原蛋白質(zhì)分子在瓊脂凝膠內(nèi)分離

13、成若干區(qū)帶， 然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)抗血清，與已分離的抗原在瓊脂凝膠內(nèi)作雙向免疫擴(kuò)散，各種抗原與抗體 特異結(jié)合，在二者比例合適處形成弧形沉淀線。根據(jù)沉淀弧的數(shù) 量、形態(tài)和位置，與已知標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體生成的沉淀弧比較，分析樣品中所含抗原成分及性質(zhì)。 .免疫濁度測定的基本原理：是抗原、抗體在特殊緩沖液中反應(yīng)而又比例合適（抗體過量）時(shí)，形成的小分子可溶性免疫復(fù)合物（v19Sv19S）在增濁劑（破壞膠體的聚合劑和電解質(zhì)）的作用下， 迅速形成免疫復(fù)合物微粒（19S19S）, ,使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。在抗體過量且固定的條件下，形成的免疫復(fù)合物量隨抗原量增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增強(qiáng)，即待測抗原量

14、與反應(yīng)后溶液的濁度呈正相關(guān)。 .偽濁度形成的原因： （1 1）標(biāo)本：混濁、高血脂、長期保存或反復(fù)凍融、處理不當(dāng)。 （2 2）試劑：抗體效價(jià)低于 1:201:20 會(huì)增加偽濁度；抗血清滅活 處理；抗血清含有交叉反應(yīng)性抗體；試劑污染和變質(zhì) PEGPEG 濃度過高引起血清中雜蛋白的非特異性共沉。 （3 3）器材：不夠清潔、塵埃污染等，尤其是比色杯。 （4 4）其他：緩沖液的離子類型與強(qiáng)度、PHPH 及反應(yīng)溫度等。 減少或消除偽濁度的方法標(biāo)本新鮮，必要時(shí)離心或稀釋標(biāo) 本后測定；避免加熱滅活抗血清和標(biāo)本；容器清潔；設(shè)置試齊心樣品和抗血清對照等。 .凝集現(xiàn)象的影響因素：電解質(zhì)、PHPH、溫度、抗體與抗原的

15、比 例。 1-6-1捱一反應(yīng)和沉淀反應(yīng)的駕各 不可點(diǎn)曉集反應(yīng)航淀反應(yīng) 一抗明性或粒性五俞白怕抗原致敬顆粒工曲血藤而桎*耳空透明皎灰的波 反應(yīng)時(shí)間幾分鐘至十幾分鐘觸小時(shí)至秋天 稀釋對象稀釋抗體稀樣抗原 觀察現(xiàn)象量集塊液體變清沉淀物 .抗球蛋白試驗(yàn)又稱 CoombsCoombs 試驗(yàn)，用于檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體。 方法：直接 CoombssCoombss 實(shí)驗(yàn)：用于檢測已粘附在紅細(xì)胞標(biāo)本的 不完全抗體 間接 CoombssCoombss 實(shí)驗(yàn)：用于檢測在血清中游離的不完全抗 體 .協(xié)同凝集試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁中含有的 A A 蛋白（SPASPA 具有與IgGIgG（IgG3IgG3 除外）的

16、 FcFc 段結(jié)合而不影響 FabFab 段活性的特性， 利用金黃色葡萄球菌與 IgGIgG 抗體的連接作用制成致敏載體所進(jìn)行的凝集試驗(yàn)即為協(xié)同凝集試驗(yàn)。 .免疫溶血反應(yīng)：是紅細(xì)胞-抗體復(fù)合物激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解的反應(yīng)。參與的成分有綿羊紅細(xì)胞、抗紅細(xì)胞抗體、補(bǔ)體。 .血清總補(bǔ)體活性（CH50CH50 陜驗(yàn)原理：綿羊紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合成的復(fù)合物可活化補(bǔ)體經(jīng)典途徑，使補(bǔ)體 C1C1- -C9C9 相繼在紅細(xì)胞 表面發(fā)生級聯(lián)反應(yīng)而形成跨膜小孔，細(xì)胞外水分滲入，導(dǎo)致紅細(xì) 胞脹裂而發(fā)生溶血。當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí)，溶血程度與補(bǔ)體活性呈正相關(guān)。以溶血百分率為縱坐標(biāo)，血清量為橫坐標(biāo)繪制補(bǔ)體介導(dǎo)的溶血

17、反應(yīng)曲線，曲線呈“SS形。以 50%50%溶血作為終點(diǎn)要比 100%100%更敏感，因此該方法稱為補(bǔ)體 50%50%容血（CH50CH50）實(shí)驗(yàn)。 .補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)分屬三個(gè)系統(tǒng)：1 1、反應(yīng)系統(tǒng)，包括已知抗原（或抗體）與待測抗體（或抗原）；2 2、補(bǔ)體系統(tǒng)、3 3 指示系統(tǒng)，包括綿羊紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體，試驗(yàn)時(shí)常將二者預(yù)先混合，結(jié)合成致敏綿羊紅細(xì)胞。 直接補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的原理：若反應(yīng)系統(tǒng)中抗原與抗體特異結(jié)合，形成的抗原-抗體復(fù)合物能將同時(shí)加入的補(bǔ)體激活，消耗掉補(bǔ)體。當(dāng)再加入指示系統(tǒng)時(shí)，反應(yīng)液中已無游離 ut,ut,不出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽性，待檢標(biāo)本中含有已知抗原（或抗體）相應(yīng)抗體（或抗原）。反之

18、，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性。 .ELISA.ELISA 的基本原理是：抗原或抗體吸附固相載體的表面，并保持其免疫活性；抗原或抗體與酶結(jié)合形成酶標(biāo)抗原或抗 體，任然保持其免疫活性和酶催化活性，測定時(shí)，待測的抗體 或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體按一定的步驟與固相抗原或抗體反應(yīng)； 加入酶的底物，酶催化底物生成有色產(chǎn)物，有色產(chǎn)物的量與樣品中待測抗體或抗原的量呈一定比例，通過定性或定量 測定有色產(chǎn)物量，即可確定樣品中待測物質(zhì)含量。 雙抗體夾心法：是檢測抗原最常見的方法，其步驟是：將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)；加入待測樣品使之與固相抗體反應(yīng)，樣品中的抗原與 固相抗體結(jié)合，形成固相

19、抗原抗體復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合物質(zhì)；加入酶標(biāo)抗體，固相免疫復(fù)合物的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，徹底 洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體；加入底物，固相載體上的酶催化底物生成有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度，對待測抗原定性或定量。該法只適用于二價(jià)或二價(jià)以上的較大分子抗原，不能用于半 抗原等小分子的測定。 .捕獲法測 IgMIgM 抗體：捕獲法用于檢測特異性的 IgMoIgMo 血清中針對抗體某種抗原的特異性 IgMIgM 和 IgGIgG 常同時(shí)存在，IgGIgG 的存在將干擾 IgMIgM 抗體的測定。因此，測定 IgMIgM 抗體需采用捕獲法，先將血清中所有的 IgMIgM（特異性和非特異性 IgMIgM）捕獲固

20、定在固相上，去除 IgGIgG 后，再測定特異性 IgMoIgMo具操作步驟：抗 H H 鏈（或抗- -IgMIgM 抗體）包被在固相上，形成固相抗- -以鏈（或抗- -IgMIgM 抗體），洗滌除去未結(jié)合的抗體。加入稀釋待測樣品，樣品中所有的 IgMIgM 與抗-心連結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合的物質(zhì)。加入特異性抗 原，它只與固相上特異性的 IgMIgM 結(jié)合。洗滌除去未結(jié)合的抗原。 加入針對特異性抗原的酶標(biāo)抗體，使之與之結(jié)合在固相上的 抗原結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物顯色，若有 顏色顯示，則表示待測樣品中有特異性的 IgMIgM 抗體存在。 .熒光的猝滅：熒光的猝滅是指熒光物質(zhì)的熒光輻射

21、能力在收到激發(fā)光較長時(shí)間的照射后會(huì)發(fā)生減弱的現(xiàn)象。 .間接染色法：以熒光色素標(biāo)記抗球蛋白抗體鑒定未知抗原或抗體。染色分兩步，首先是未標(biāo)記抗體（即第一抗體）與抗原反應(yīng)，然后是標(biāo)記的抗球蛋白抗體（即第二抗體）與第一抗體反應(yīng)。第一抗體是第二抗體的抗原。方法為第一步用已知第一抗體與未知抗原反應(yīng)，或用未知第一抗體與已知抗原反應(yīng)，一定時(shí)間后洗 脫掉未結(jié)合的第一抗體；第二步加上標(biāo)記的第二抗體，如果第一抗體與抗原發(fā)生了特異性結(jié)合，第二抗體就會(huì)和抗原抗體復(fù)合物中抗體發(fā)生結(jié)合，從而達(dá)到檢測未知抗原或抗體的目的。 又稱雙抗體法，用一種個(gè)熒光標(biāo)記的抗球蛋白抗體，能檢查多種 昂抗原抗體的復(fù)合物，敏感性較高，但非特異性干

22、擾因素也相對較多 .時(shí)間分辨熒光免疫測定基本原理：以鐲系元素鋪（EuEu）螯 合劑作熒光標(biāo)記物，利用其長壽命的特點(diǎn)，熒光測量時(shí)間，待 短壽命的自然本底熒光完全衰退后再行測定，所得信號完全為 長壽命鐲系螯合物的熒光，從而有效地消除非特異性本底熒光的干擾。 特點(diǎn)：TRFIATRFIA（時(shí)間分辨熒光免疫測定）具有較高的靈敏性和特異性：熒光衰變期長；激發(fā)光和發(fā)射光之間有很大的位移；激發(fā)光波范圍較寬，發(fā)射光波范圍較窄。熒光標(biāo)記的相對比活性高。 *UM臾JftJtJRHtr與磔射完總分物的It帔 電座取射分析 獨(dú)H盟噸5rM 標(biāo)記劫 抗體 心 太記州用， 過汽 的量 反應(yīng)力或 位維結(jié)合反應(yīng)參數(shù)與特漏 競爭

23、性結(jié)合.反應(yīng)霞敦與柞到 抗原讓成正比 國向#克 斡怏 校情 B.F舟牌方法 國相尻體等 第二抗體等 特卸也 A 般島 崗 牧高 .外周血的單個(gè)核細(xì)胞（PBMCPBMC 包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。 密度梯度離心法：利用 PBMCPBMC 在比重上與外周血中其他細(xì)胞的差 異進(jìn)行等密度梯度離心。細(xì)胞體積越大，細(xì)胞在一定的離心場中的離心速度越高。由于粒細(xì)胞和紅細(xì)胞比重大于單個(gè)核細(xì)胞，同 事紅細(xì)胞在高分子聚蔗糖的作用下發(fā)生凝聚而體積增大，因此紅 細(xì)胞稱將速度快魚 PBMC,PBMC,使 PBMCPBMC 與其他細(xì)胞在液相中分層而達(dá)到分離的目的。 .淋巴細(xì)胞活力測定常用臺盼藍(lán)染色法，原理：臺盼藍(lán)是一種陰離子

24、染料，活細(xì)胞由于膜完整染料不能通過，故不著色，但死細(xì)胞細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞著色呈藍(lán)色。 計(jì)數(shù) 200200 個(gè)細(xì)胞，通?；钚月蕬?yīng)在 95%95%以上。 .T.T 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)就是利用特異性或非特異性的刺激因 子，刺激 T T 淋巴細(xì)胞使其分化，觀察細(xì)胞增殖的程度，反映 T T 淋巴細(xì)胞群的免疫應(yīng)答功能。 方法: :H H- -TdRTdR 摻入法 MTTMTT 比色法 .B.B 淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)檢測：（1 1）血清中免疫球蛋白含量測定； （2 2）特異性抗體產(chǎn)生能力的測定；血清中血型抗體測定 抗體生成細(xì)胞的測定：反向溶血空斑形成試驗(yàn)是體外檢測抗體形 成細(xì)

25、胞的方法。溶血空斑數(shù)代表抗體形成的細(xì)胞數(shù)。 .細(xì)胞因子：是由活化免疫細(xì)胞和某些基質(zhì)細(xì)胞分泌的，能介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)的小分子多肽。 細(xì)胞因子的檢測方法分為三大類： 生物學(xué)測定法是檢測細(xì)胞因子某種特定的生物學(xué)活性，而無生物活性的細(xì)胞因子前體分子、降解產(chǎn)物、聚合物以及與蛋白質(zhì)或可溶性受體結(jié)合的細(xì)胞因子均不能用此法檢出； 免疫學(xué)測定法是用免疫學(xué)檢測技術(shù)，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)和免疫印跡等，將細(xì)胞因子作為蛋白質(zhì)抗原，用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行測定；此法所測定的是細(xì)胞因子的蛋白含量，與其生物活 性并不一定成正比；分子生物學(xué)測定法是采用分子生物學(xué)技術(shù)，檢測細(xì)胞因子相應(yīng)的 D

26、NADNA、RNARNA 反映的是細(xì)胞因子基因及其表達(dá)情況。雖然這三種方法所反映的是細(xì)胞因子的不同方面，測定結(jié)果也不一定平行，但它們卻是相互關(guān)聯(lián)、互為補(bǔ)充的，在實(shí)際工作中常需要這些方法的綜合分析。 .單克隆 IgIg 血癥：也稱 M M 蛋白，是由于單株漿細(xì)胞異常增生，產(chǎn)生大量的分子結(jié)構(gòu)相同的 Ig,Ig,屬同質(zhì)性 Ig,Ig,這些 IgIg 的獨(dú)特型完全相同。 其理化性質(zhì)十分均一，常呈現(xiàn)某一類 IgIg 的顯著 增高，大多在 30g/L,30g/L,此類異常增高的 IgIg 多無免疫活性。 .HLA.HLA 血清學(xué)分型法為微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)或稱為補(bǔ)體依賴的 細(xì)胞毒試驗(yàn)。能夠用此方法檢測的抗原

27、有 HLAHLA- -A A、- -B B、- -C C、- -DRDR - -DQDQ。HLAHLA 血清分型法的原理及應(yīng)用：（原理）該方法的原理是帶 有特異 HLAHLA 抗原的淋巴細(xì)胞在體外與已知型別的一系列標(biāo)準(zhǔn)抗 HLAHLA 血清結(jié)合后，在補(bǔ)體參與下，引起淋巴細(xì)胞溶解死亡。死亡 細(xì)胞的胞膜失去屏障作用而使染料（臺盼藍(lán)或伊紅）透入細(xì)胞內(nèi)，在倒置顯微鏡下觀察，死細(xì)胞呈藍(lán)色或粉紅色，未致敏的活細(xì)胞則不著色。（應(yīng)用） 根據(jù)淋巴細(xì)胞的存活與否可以判定其表面是否有與標(biāo)準(zhǔn)分型血清中抗體相對應(yīng)的抗原。 .超敏反應(yīng)： 是指集體收到同一抗原再次刺激后產(chǎn)生的一種以生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主要表現(xiàn)的異常

28、或病理性免疫應(yīng)答。 變應(yīng)原是指能夠選擇性誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性 IgEIgE 抗體，引起速發(fā) 型變態(tài)反應(yīng)的抗原物質(zhì)。 引起 I I 型超敏反應(yīng)的變應(yīng)原：空氣中的變應(yīng)原： 花粉、 塵蜻、 動(dòng)物皮屑、真菌抱子等食物變應(yīng)原藥物變應(yīng)原異種動(dòng)物免疫學(xué)清等 引起 n n 型超敏反應(yīng)：輸血反應(yīng)、新生兒溶血病等。 新生兒溶血： 多由母子間 RhRh 血型不合引起， 母親的血型為 RhRh- -, ,由于輸血、流產(chǎn)、分娩等原因接受了 Rh+Rh+紅細(xì)胞表面 RhRh 抗原刺 激后，可以產(chǎn)生 RhRh 抗體。此類血型為 IgGIgG 類，可通過胎盤。當(dāng)體內(nèi)產(chǎn)生有抗 RhRh 抗體的母親再次妊娠時(shí)， 母體內(nèi)的抗 RhR

29、h 抗體便可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，如胎兒血型仍為 Rh+,Rh+,則抗 RhRh 抗體 與其紅細(xì)胞結(jié)合，激活補(bǔ)體，導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞溶解，引起流產(chǎn)或發(fā)生新生兒溶血癥。母子間 ABOABO 血型不合引起的新生兒溶血癥也不少見，但癥狀較輕。對 RhRh- -的產(chǎn)婦，可于產(chǎn)后 72h72h 內(nèi)注射抗 RhRh（或抗 RhDRhD）免疫球蛋白，及時(shí)清除進(jìn)入母體內(nèi)的 Rh+Rh+紅細(xì)胞， 可有效預(yù)防再次妊娠時(shí)發(fā)生新生兒溶血癥。 .血清?。撼醮巫⑸浯罅慨惙N抗毒素 1 1- -2 2 周后，可出現(xiàn)發(fā)熱皮癥、淋巴結(jié)腫大、關(guān)節(jié)腫痛和一過性蛋白尿等癥狀。具發(fā)生機(jī)制：一次性注射大量異種抗毒素血清后，機(jī)體產(chǎn)生抗異種血清抗體，由于注入的異種血清尚未完全清除，兩者在抗原量多于抗體