蟲(chóng)抗菌肽對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞殺傷作用及篩選概要

1、蟲(chóng)抗菌肽對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞殺傷作用及篩選*【摘要】H的篩選對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞Daudi有抑制或殺傷作用的昆蟲(chóng)抗菌 肽。方法 針刺感染大腸埃希菌以誘導(dǎo)昆蟲(chóng)（家蠅幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)、蛹）產(chǎn)生抗菌 肽，再經(jīng)研磨、離心、層析等步驟提取其血淋巴中抗菌肽。將所提取的抗菌肽 作用于腫瘤細(xì)胞Daudi,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)其作用效果。結(jié)果3種抗菌肽對(duì)腫 瘤細(xì)胞Daudi均有殺傷力，家蠅成蟲(chóng)的熒光吸收率為97. 86%,幼蟲(chóng)為85. 45%o 以家蠅成蟲(chóng)的效果更為明顯。結(jié)論家蠅成蟲(chóng)抗菌肽可作為潛在的抗人淋巴腫瘤 藥物開(kāi)發(fā)。【關(guān)鍵詞】昆蟲(chóng)抗菌肽人淋巴瘤細(xì)胞Effect of antimicrobial peptides extrac

2、ted from insects on tumor cell DaudiLI Po, YU Juan, ZHAO Rui jun.Department of Parasitology, Shanxi Medical University（Taiyuan 030001, China）Abstract： Objective To investigate of antimicrobial peptide of insect against tumor cell DaudiMethods The peptides from the insect were induced by bacteria inf

3、ection with a needle puncture and isolated and purified by grinding, centrifugalization and chromatography. Results The results demonstrated that the peptides could kill the tumor cell Daudi Conclusion The effect of the peptides could make it possible to develop a new kind of anti-tumor drug.Key wor

4、ds： insect:antibacterial peptides； tumor cell Daudi抗菌肽是一類(lèi)免疫效應(yīng)因子，在機(jī)體的先天免疫中起著重要的作用，是生 物體產(chǎn)生的一種具有抗菌活性的多肽（1） O 口前，從昆蟲(chóng)以及其他動(dòng)物中分離 純化到2000多種，其中從昆蟲(chóng)中就發(fā)現(xiàn)了 200多種（2） o抗菌肽有著獨(dú)特的 抗菌、抗腫瘤作用機(jī)制，且對(duì)正常人體細(xì)胞毒、副作用較?。?）,不會(huì)誘導(dǎo)病 原體產(chǎn)生耐藥株，藥效極高，是迄今為止極為少見(jiàn)的一類(lèi)抗菌、抗腫瘤物質(zhì)。各種抗菌肽山于結(jié)構(gòu)不同，所抑制、殺傷病原體的類(lèi)型也不同。本研究旨在篩 選對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞Udi有抑制其至殺滅作用的昆蟲(chóng)抗菌肽。1 材料與方

5、法1. 1 材料 （1）昆蟲(chóng)：家蠅（Musca domestics）幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)（山西 省疾病預(yù)防控制中心多代培養(yǎng)的純種品系）。（2）菌株：大腸埃希菌 （Escherichia coli 8099）（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病研究所）。（3）腫瘤細(xì) 胞：人淋巴瘤細(xì)胞株（Daudi）（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物所）。（4）主要試劑： 苯甲基磺酰氟（PMSF）（美國(guó)Sigma公司）；陽(yáng)離子交換纖維素CM-52（英國(guó) Whatman生物試劑有限公司）。1.2 方法 （1）抗菌物質(zhì)的誘導(dǎo)：參照文獻(xiàn)（4）。（2）抗菌物質(zhì)的提取 及鑒定：血淋巴中抗菌肽提取參照文獻(xiàn)（5）。陽(yáng)離子柱層析參照文獻(xiàn)（6）。 聚丙烯酰胺凝

6、膠電泳參照文獻(xiàn)（7）。（3）抑菌活力測(cè)定：測(cè)定抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì) 胞Daudi的殺傷作用參照文獻(xiàn)（8, 9）。2 結(jié)果2.1 提取物蛋白條帶提取物含20kD以下蛋白條帶：家蠅幼蟲(chóng)7條，家蠅蛹4條，家蠅成蟲(chóng)5條。2.2 抑菌活力（圖1, 2） 所提抗菌肽濃度為家蠅幼蟲(chóng)6.51g/L,家蠅蛹 6. 37g/L,家蠅成蟲(chóng)6. 51g/L,淡色庫(kù)蚊6. 56g/Lo抑菌圈顯示所提取的抗菌肽 均有一定的抑菌作用。注：a：對(duì)照組熒光吸收率；b：腫瘤細(xì)胞熒光吸收率；Ml：抗菌肽組腫瘤 細(xì)胞熒光吸收率中除去自然死亡對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效殺滅率。圖1家蠅幼蟲(chóng)抗菌肽作用于Daudi細(xì)胞（略）注：a：對(duì)照組熒光吸收率；b：腫

7、瘤細(xì)胞熒光吸收率；Ml：抗菌肽組腫瘤 細(xì)胞熒光吸收率中除去自然死亡對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效殺滅率。圖2家蠅成蟲(chóng)抗菌肽作用于Daudi細(xì)胞（略）2.3 3種昆蟲(chóng)抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞Daudi的作用（圖3） 結(jié)果表明：各種 家蠅蟲(chóng)態(tài)的抗菌肽對(duì)Daudi細(xì)胞的作用結(jié)果。與對(duì)照40. 71%的熒光吸收率相 比，所有抗菌肽對(duì)該腫瘤細(xì)胞均有殺傷作用，家蠅的成蟲(chóng)中提取吸收率為97. 86%幼蟲(chóng)為85. 45%家蠅蛹為53. 42%。注：a:對(duì)照組熒光吸收率；b:腫瘤細(xì)胞熒光吸收率；Ml:抗菌肽組腫瘤細(xì)胞 熒光吸收率中除去自然死亡對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效殺滅率。圖3 家蠅蛹抗菌肽作用于Daudi細(xì)胞（略）3 討論近年來(lái)，人們對(duì)抗

8、菌肽的研究越來(lái)越重視。許多學(xué)者致力于探討抗菌肽的 藥用開(kāi)發(fā)價(jià)值，努力使之成為繼青霉素等抗生素之后的乂一類(lèi)重要的新型抗 菌、抗腫瘤藥物。國(guó)外許多實(shí)驗(yàn)室和制藥公司均在研究和篩選開(kāi)發(fā)這一類(lèi)新的 抗腫瘤、抗菌、抗病毒制劑，已合成許多已知序列的抗菌肽(10-12) o國(guó)內(nèi) 也在積極篩選抗腫瘤及各種病原體的特效抗菌肽(13)。抗菌肽種類(lèi)很多，每一種昆蟲(chóng)就可能含有多種抗菌肽。各種抗菌肽中由于 其結(jié)構(gòu)不同，所抗病原體的種類(lèi)也不同(11) O通過(guò)對(duì)昆蟲(chóng)以不同的刺激誘 導(dǎo)，使之產(chǎn)生不同種類(lèi)的抗菌肽，然后提取、篩選，有可能找到對(duì)特異病原體 的殺傷藥物。本試驗(yàn)擬通過(guò)對(duì)兒種昆蟲(chóng)感染大腸埃希菌，誘導(dǎo)其產(chǎn)生一定種類(lèi) 的抗菌

9、肽，從中篩選對(duì)腫瘤細(xì)胞Daudi有特異性的抑制或殺傷藥物，代替L1前 臨床腫瘤化療藥物。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了家蠅體內(nèi)的抗菌物質(zhì)不僅抗菌，還有抗腫瘤細(xì)胞Daudi的作 用。盡管所用昆蟲(chóng)家蠅各蟲(chóng)態(tài)的數(shù)量不同，但所含抗菌肽濃度基本一致，對(duì)實(shí) 驗(yàn)有一定說(shuō)服力。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了昆蟲(chóng)體中含有的抗菌肽可用來(lái)抑制或殺傷腫瘤 細(xì)胞Daudi；在受試的兒組昆蟲(chóng)抗菌肽中，家蠅成蟲(chóng)的抗菌肽效果最好。【參考文獻(xiàn)】(1) 黃自然，廖富頻，鄭青，等昆蟲(chóng)抗菌肽在醫(yī)藥上的應(yīng)用J 天 然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2001, 13 (2) : 79-83.(2) 安春菊，盛長(zhǎng)忠，李德森，等.一類(lèi)潛在的新藥一抗菌肽J.中國(guó) 新藥雜志，2003, 12 (

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