薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法

1、碘：適用于不飽和或者芳香族化合物配制方法：在100ml 廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒?；蛘咴谄恐?，加入10g碘粒，30g硅膠高錳酸鉀適用于含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛配制方法：1.5g KMnO 4 + 10g K 2CO 3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL水.使用期3 個(gè)月磷鉬酸 (PMA)廣譜配制方法：10 g of磷鉬酸+100 mL乙醇紫外燈適用于含共軛基團(tuán)的化合物，芳香化合物硫酸鈰生物堿配制方法： 10% 硫酸鈰 (IV)+15% 硫酸的水溶液氯化鐵苯酚類(lèi)化合物配制方法： 1% FeCl 3 + 50%乙醇水溶液 .桑色素 (羥基黃酮 )廣譜 , 有

2、熒光活性配制方法： 0.1%桑色素 +甲醇茚三酮適用于氨基酸配制方法： 1.5g茚三酮 + 100mL of正丁醇 + 3.0mL醋酸二硝基苯肼 (DNP)適用于醛和酮配制方法： 12g二硝基苯肼 + 60mL濃硫酸 + 80mL水 + 200mL乙醇香草醛 (香蘭素 )廣譜配制方法： 15g香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 濃硫酸溴甲酚綠適用于羧酸， pKa 酸納的濃硫酸溶液 .與多種生物堿呈不同顏色 .(11) 碘碘化鉀 (Wagner) 試劑 :檢查生物堿 .1 克碘及 10 克碘化鉀 ,溶于 50 毫升水中 ,加熱 ,加 2 毫升醋酸 ,再用水稀釋至100 毫升 .可作紙層板

3、顯色劑,液可作沉淀試劑.酚類(lèi) ,鞣質(zhì)(12) 三氯化鐵 :檢查酚類(lèi)及 ? 酸.噴灑劑 :15% 三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許 .? 酸呈紅色斑點(diǎn) ,酚類(lèi)稱(chēng)藍(lán)色或綠色斑點(diǎn).(13) 鐵氰化鉀 -三氯化鉀 :檢查酚類(lèi) ,芳香胺類(lèi)及還原性物質(zhì) .噴灑劑 : 1% 鐵氰化鉀水溶液,2% 三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.噴灑后處理 : 噴灑后酚性物質(zhì)呈藍(lán)色斑點(diǎn).再?lài)?2N 鹽酸 ,能使顏色加深 , 紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液.(14) 4- 胺基安替比林 -鐵氰化鉀 (Emerson 反應(yīng) ): 檢查酚類(lèi) .噴灑劑 : I . 2%4- 氨基安替比林乙醇溶液;II. 8% 鐵氰化鉀水溶液 .

4、或用方法 :0.9%4- 氨基安替比林和5.4% 鐵氰化鉀水溶液先噴灑 I,再?lài)姙?II, 即顯色 , 或再放入密閉缸中, 缸內(nèi)放25% 氫氧化銨,即產(chǎn)生橙色至深紅色.(15)對(duì)氨基苯磺酸,重氮鹽 (Pauly試劑 ):檢查酚類(lèi),芳香胺類(lèi)及能偶合的雜環(huán)化合物.噴灑劑: 4.5克對(duì)氨基苯磺酸,加熱溶于45 毫升12N鹽酸中 ,用水稀釋至500 毫升 ,取 10毫升稀釋液用冰冷卻,加 10毫升冷4.5% 亞硝酸鈉水溶液,0放15分鐘 (此試劑于0可保存3天),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.一般重氮化試劑,也可用聯(lián)苯胺 ,對(duì)硝基苯胺等 .(16) 對(duì)甲苯磺酸 : 檢查甾體 ,黃酮 ,鞣質(zhì) .噴灑劑

5、: 20% 對(duì)甲苯磺酸氯仿溶液.噴灑后處理 : 100 加熱數(shù)分鐘 ,紫外線分析燈下檢查熒光斑點(diǎn).含氧雜環(huán)及蒽醌類(lèi)*(17) 三氯化鋁 : 檢查黃酮體 .噴灑 1% 三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃色熒光(18) 堿式醋酸鉛 : 檢查黃酮體 .噴灑劑 : 飽和堿式醋酸鉛 ( 或飽和醋酸鉛 )水溶液 .于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點(diǎn).(19) 醋酸鎂 : 檢查蒽醌甙 ,甙元及黃酮體噴灑劑 : 0.5% 醋酸鎂甲醇溶液方法 : 90 加熱 5 分鐘 , 呈紅色至紫色斑點(diǎn) .(20) 氫氧化鉀 : 檢查香豆素 ,蒽醌甙及甙元噴灑劑 : 510% 氫氧化鉀的甲醇溶液 .于日光及紫外線熒光

6、分析燈下檢示斑點(diǎn).萜類(lèi) ,甾體(21)三氯化銻 (Carr-Price試劑 ): 檢查甾體 ,萜類(lèi) ,皂類(lèi) .噴灑劑 : 25 克三氯化銻溶于75 克氯仿中 (亦可以用氯仿或四氯化碳的飽和溶液噴灑后處理 : 100 加熱 5 分鐘 ,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光.).(22)五氯化銻 : 檢查甾體 ,萜類(lèi) ,皂甙 .噴灑劑 : 五氯化銻 -氯仿或四氯化碳(1:4), 用前新鮮配制 .噴灑后處理 : 120 加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn),并于紫外線熒光分析燈下檢示.(23) 香蘭醛 - 硫酸 : 檢查高級(jí)醇類(lèi) , 酚類(lèi) ,甾體 ,萜類(lèi) ,芳香油 .噴灑劑 : 1 克香蘭素溶于100 毫升濃硫酸 ,或 0.5

7、克香蘭醛溶于100 毫升硫酸 -乙醇 (4:1) 中.噴灑后處理 : 室溫或 120 加熱觀察顯色斑點(diǎn).(24) 4- 二甲氨基苯甲醛,醋酸 ,磷酸 (E.P. 試劑 ): 檢查 ? Azulene及 ?前體Proazulene.噴灑劑 : 0.25 克 4- 二甲氨基苯甲醛,溶于 50 毫升醋酸5 克 85 磷酸和20 毫升水的混合液中(棕色瓶中保存數(shù)月)?:烴室溫即成藍(lán)紫色斑點(diǎn),前體于 80 加熱 10 分鐘出現(xiàn)藍(lán)紫色斑點(diǎn).(25) 氯胺 T 三氯醋酸 : 檢查強(qiáng)心甙 .噴灑劑 : I. 3% 氯仿 T 水溶液新鮮制備.II. 25% 三氯醋酸乙醇溶液 ( 能保存數(shù)天 ).10 毫升I 加

8、40 毫升II,用前混合.噴灑后處理: 110 加熱7 分鐘 ,紫外線熒光分析燈下檢示呈藍(lán)色或黃色熒光.(26) 亞硝酸基鐵氰化鈉 - 氫氧化鈉 (Legal 試劑 ): 檢查不飽和內(nèi)酯 ; 甲基酮或活性次甲基 , 常用于強(qiáng)心甙噴灑劑 : 1 克亞硝基鐵氰化鈉溶于 100 毫升 2N 氫氧化鈉 -乙醇 (1:1) 的水溶液 .顯紅色或紫色斑點(diǎn).(27) 3,5- 二硝基苯甲酸 (Legal 試劑 ): 檢查強(qiáng)心甙 , ,-不飽和內(nèi)酯 .噴灑劑 : 1 克 3,5- 二硝基苯甲酸溶于50 毫升甲醇 ,加入 1N 氫氧化鉀50 毫升 .強(qiáng)心甙呈紫紅色斑點(diǎn).糖類(lèi)(28)鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.

9、噴灑劑: 0.93克苯氨 ,1.66克鄰苯二甲酸溶于100 毫升水飽和的正丁醇中.噴灑后處理: 105加熱10 分鐘.(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質(zhì)。溶液 I ：4（ T.T.C. ）甲醇溶液；溶液II：1N氫氧化鈉。噴灑液： I， II，臨用前等體積混合。噴灑后處理：100 加熱510 分鐘，得紅色斑點(diǎn)。（30 ） Keller-Kiliani試劑：檢查去氧糖，常用于強(qiáng)心甙。試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5 毫升混合均勻.試樣 1 毫克加試液2 毫克溶解后 ,沿試官管壁滴入濃硫酸2 毫升

10、 ,接觸面即顯棕色,漸變淺綠 ,藍(lán)色 . 最后冰醋酸層全部燃呈藍(lán)色.(31) 1,3- 二羥基萘 -磷酸 : 檢查糖類(lèi) .噴灑液 : 0.2%1,3- 二羥基萘 (Naphthoresorcinol)乙醇溶液100 毫升 ,與 10 毫升 85% 磷酸混合 .(32)費(fèi)林溶液 (Fehling):檢查還原糖 .溶液 I: 69.3 克結(jié)晶硫酸銅溶于1000 毫升水中 .上述二溶液如不清可濾過(guò).臨用前等體積混合.氨基酸(33) 茚三酮 : 檢查氨基酸及氨基糖 .噴灑劑 : 0.3 克茚三酮溶于100 毫升正丁醇 ,加入 3 毫升醋酸 ;或 0.2 克茚三酮溶于100 毫升乙醇 (或丙酮中 ).噴

11、灑后處理 : 110 加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn).(34) 吲哚醌 : 檢查氨基酸和一些肽 .噴灑劑 : 0.2% 吲哚醌 (Isatin) 丙酮溶液 , 含 4%醋酸 ; 或用100 毫升1% 吲哚醌丙酮溶液加10 毫升醋酸.噴灑后處理 : 100110 加熱 10 分鐘 .(35) 1,2- 萘醌 -4- 硫磺酸 (Folin 試劑 ): 檢查氨基酸 .噴灑劑 : 新鮮制備 0.02 克 1,2- 萘醌 -4-磺酸鈉 ,溶于 100 毫升 5% 碳酸鈉中 .噴灑后處理 : 室溫放于 , 不同氨基酸出現(xiàn)不同顏色.有機(jī)酸(36) 酸堿指示劑 : 檢查有機(jī)酸 .噴灑劑 : 0.05% 溴酚藍(lán) (或溴甲酚綠 , 或溴麝香草酚藍(lán))的乙醇溶液 .(37) 氧化還原顯色劑 : 檢查有機(jī)酸 .噴灑劑 : I. 0.075% 溴甲酚綠及0.025% 溴酚藍(lán)的無(wú)水乙醇液.II. 0.5% 高錳酸鉀及 1% 碳酸鈉 .10H2O 的蒸餾水液 . 臨用前 , 取 I 和 II 按 1:1 混合后噴酒 .噴酒后處理 : 穩(wěn)定時(shí)