甘草中總黃酮的提取及含量測定

1、甘草中總黃酮的提取及含量測定刖言甘草是我國傳統(tǒng)常用中草藥之一，也是我國重要的植物資源？。甘草黃酮類成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤、增強一 t5血管功 能、增強免疫力等作用。因此，開展甘草的深加工，使甘草資源得以充分利用， 增加資源的附加值，前景十分可觀。為此，筆者以甘草為對象，研究了甘草黃酮 的乙醇回流提取工藝，單因素試驗確定各因素對提取工藝的影響，正交試驗確定甘草黃酮提取的最佳工藝條件。1材料與方法1.1材料甘草，市售；試劑：亞硝酸鈉、碳酸鈉、石油醚、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、無水乙醇、尸?。粌x器：燒杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流裝置、濾紙、 HH-4數 顯恒溫水

2、浴鍋、分析天平、AB104 . N電子天平、布氏漏斗、SHZ C型循環(huán)水 多用真空泵、分光光度計。1.2方法1.2.1標準曲線的繪制稱取蘆丁對照品10 mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10 ml，使之成 為濃度為1 mg/ml的蘆丁標準品溶液，作為貯備液備用。量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分別加水至3 ml，力卩5%亞硝酸鈉溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸鋁溶液0.5 m1，搖勻、放置6 min后加5%的氫氧化鈉溶液2.5 ml，混勻、放置15 min后蒸餾水定容至10 ml用紫外分光光度計在500 nm處測吸光度，以對照品濃度為橫坐標

3、，吸光度為縱 坐標做標準曲線。歡度 Concaitration S 颶/mlS1蘆丁標準曲線Fig. I Rutin standard curve1.2.2材料處理取甘草根莖粉（粉碎過40-60目篩）3 g置于燒杯中，按甘草粉末：乙醇（1:30）力卩 入90ml濃度為70%的乙醇混合均勻.1.2.3試驗設計（按每組自己做的時候用的方法的具體過程寫）第五組：1.配置蘆丁標液：2. 配置標準曲線所需不同濃度溶液3. 測吸光度，以對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標做標準曲線。4. 處理樣品5. 測出樣品吸光度，按照標準曲線，得出樣品總黃酮含量1.2.4甘草黃酮含量測定收集濾液并測量濾液體積，取樣按繪

4、制標準曲線的方法測定其吸光度值，根據公式計算每克甘草中黃酮的含量。(有稀釋的寫清稀釋了多少倍等)2結果與分析測出樣品吸光度為0.146.對比出標準曲線得出濃度為0.0213mg/ml此濃度為10ml樣品處理液的濃度。J則3ml參比原液中物質的量為 0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg則參比原液的濃度為 0.000213/0.003=0.071 mg/ml則樣品原液的濃度為0.071*5=3.55 mg/ml提取原液有20ml，則樣品中甘草黃酮含量為 3.55*20/3=23.67mg/g3結論經過預試驗確定影響提取含量的主要因素為乙醇濃度、時間、溫度、料液比。因此先進行單因

5、素試驗，根據單因素試驗的結果，以乙醇濃度、時間、溫度、料 液比為因素、進行(3 )正交試驗，根據正交試驗結果確定最佳工藝。根據其他幾組同學的實驗結果做出如下分析乙醇農度 Ethanol cencoitration圖2乙醇濃度與提取含的關系乙醇濃度對提取含量的影響。由圖2可知，乙醇濃度的最優(yōu)水平為75 % ,而在兩側的濃度范圍內提取含量都是隨之下降的。乙醇濃度越大，極性越小，增大極性小的黃酮類溶出，從而在一定乙醇濃度范圍內，提取含量呈上升趨勢；當 乙醇濃度超過一定范圍，即極性過大，減少了黃酮糖苷類等的溶出，從而提取含 量呈下降趨勢。因而在設計正交試驗時，將其濃度選在75%左右。JKJi Tanp

6、erature II P圖3溫度與提取含的關系溫度對提取含量的影響。由圖3可知，當溫度低于85C時，隨著溫度的升高, 從熱動力學方面增加了黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當溫度高于 85 C時，可能黃酮類發(fā)生水解、裂解或者黃酮類之間發(fā)生了一系列反應，從而 使提取含量呈下降趨勢。因而在設計正交試驗時，溫度選擇在85 C左右。時間Tioeff h4時間與提取含量的關系時間對提取含量的影響。由圖4可知，當時間少于3h時，由于時間的增大有 助于黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當時間超過 3h時，提取含量反 而略微降低。理論上講在3. 5 h提取含量應趨于一個平衡值，或者比3 h稍有上 升趨

7、勢，然后再趨于一個平衡值。這可能是由于加熱時間過長，造成黃酮糖苷類 的水解，導致黃酮檢出量減少，從而提取含量呈下降趨勢。因此，在正交試驗設 計時，時間應選擇在3 h左右。卻液比 SolldAiquid ratioS5料液比與提取含的關系料液比對提取含量的影響。由圖5可知，當料液比小于1 : 30時，隨著料液 比的增大提取含量呈上升趨勢；當料液比高于 1 : 30時，隨著料液比的增大反而 呈下降趨勢。料液比影響溶劑的極性，從而影響了不同極性黃酮類的溶解性； 同時能耗也隨著料液比的增大而增大，導致在后續(xù)試驗萃取過程中萃取劑用量也 隨之增加。因此在設計正交試驗時，將料液比選擇在1 : 30左右。提取

8、含量囑Extractionamount試驗號 Experiment no.30®42343639413833Z2.22.222.2.2X/ / 1/ / J Y/ IT X/ 657585856575758565 zlv xfx f% /k f% / 12331223 1YJ- XJy 1/ J/ X7 XJ / 75859575859575ffi951/ Jr 2020203030304040-40 - w * fl fl 4申 4 電 H* 1 1* Ji .1 11 ztx f zfv fx /I. /Is /V z(x /( 11122233312345678 90J00.0

9、5006Q 射極差H正交試驗結果Table 1 Analysis of the orthogonal test results因素險torA料液比D乙醇濃(w/w) B溫度記C時間h 度 SoKd/Liquid Tempesature Time Ethanol ratiooorijCCTitration根據單因素試驗結果，設計k(3 )正交試驗。試驗結果見表1。由表1可以看 出提取甘草黃酮的最優(yōu)方案為A。B C D ,即料液比為1: 20，度為85 C，提 取時間為4 h，乙醇濃度為75 %。由極差分析可知，各因素主次順序為 DBAC , 即乙醇濃度對甘草黃酮的提取含量影響最大，溫度對甘草黃酮提取含量影響次 之，影響最小的因素是提取時間。而3h時的甘草黃酮提取含量與4h時的相差不 大，而減少時間可以降低能耗，因而為了降低成本，選提取時間為3h。綜上所述，甘草黃酮的最佳提取工藝條件為 A B C D:，即乙醇濃度75 %，溫度85 C ， 時間3 h，料液比1 : 20。4總結(1)單因素試驗表明，各因素對黃酮提取率的影響順序為：乙醇濃度