高壓氧結(jié)合電針治療帕金森病大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

1、高壓氧結(jié)合電針治療帕金森病大鼠的實(shí)驗(yàn)研究            【關(guān)鍵詞】  高壓氧    電針    帕金森病    大鼠    實(shí)驗(yàn)研究    觀察高壓氧(hyperbaric oxygen， HBO)結(jié)合電針刺激對(duì)帕金森病大鼠紋狀體內(nèi)多巴胺含量的影響及對(duì)行為學(xué)的治

2、療作用。用6-羥基多巴胺毀損單側(cè)黑質(zhì)建立大鼠向健側(cè)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的帕金森病動(dòng)物模型;將造模成功的大鼠隨機(jī)分為HBO治療組、電針治療組、HBO結(jié)合電針組、模型未治療組;通過(guò)高效液相電化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠紋狀體內(nèi)多巴胺含量，評(píng)價(jià)各組實(shí)驗(yàn)大鼠的旋轉(zhuǎn)行為學(xué)治療效果。HBO組、電針組實(shí)驗(yàn)大鼠行為學(xué)改善的療效及腦紋狀體內(nèi)多巴胺含量的增加，與模型未治療組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HBO結(jié)合電針組與模型未治療組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HBO結(jié)合電針療法可有效提高帕金森病大鼠紋狀體內(nèi)多巴胺的含量，對(duì)其病變產(chǎn)生的側(cè)向旋轉(zhuǎn)行為有顯著的治療作用。為臨床治療帕金森病提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

3、帕金森病是中老年人常見的一種以震顫、肌肉強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)弛緩為臨床特征的中樞神經(jīng)退行性疾病。其最主要發(fā)病機(jī)制之一是黑質(zhì)紋狀體多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)水平低下，紋狀體多巴胺含量顯著減少，從而使錐體外系的運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)功能失調(diào)。本研究旨在探討高壓氧(HBO)結(jié)合電針對(duì)帕金森病大鼠紋狀體多巴胺含量的影響，以及對(duì)模型鼠旋轉(zhuǎn)行為學(xué)的治療效果，為臨床治療提供依據(jù)。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)Sprague Dawley(SD)大鼠共32只，雄性，體質(zhì)量210240 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。按數(shù)字表法隨機(jī)分成HBO治療組、電針治療組、HBO結(jié)合電針組和模型未治療組。每組8只大鼠。1.2儀器與試劑6-羥基多巴(美

4、國(guó)Sigma公司)、阿樸嗎啡(青海制藥廠有限公司)、KOPF立體定向儀(德國(guó)KOPF公司)、微量注射控制器(美國(guó)WPI公司)、Biofuge Stratos型低溫高速離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司)、Agilentl 100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)、N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)、G-6805II型電針治療儀(上海華誼醫(yī)療儀器廠)、FAJD2023高壓氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物艙(煙臺(tái)冰輪高壓氧艙有限公司)。1.3帕金森病大鼠模型制備1.3.16-羥基多巴溶液配制避光稱取10 mg 6-羥基多巴，加入5 ml生理鹽水，溶解，混勻后分裝，-70低溫冰箱中密封避光保存?zhèn)溆谩?

5、.3.2阿樸嗎啡溶液配制避光稱取20 mg阿樸嗎啡，溶入100 ml生理鹽水內(nèi)，混勻，室溫下避光保存。1.3.3動(dòng)物模型制備成年SD大鼠，按1 ml/100 g體質(zhì)量腹腔注射水合氯醛麻醉，麻醉后在KOPF立體定位儀上固定。以前囟為坐標(biāo)原點(diǎn)，參照大鼠腦立體定向圖譜，確定右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束坐標(biāo)位置：第1位點(diǎn)為前囟后1.8 mm，右側(cè)2.5 mm，進(jìn)針深度7.5 mm。第2位點(diǎn)為前囟后1.8 mm，右側(cè)2.5 mm，進(jìn)針深度8.0 mm。所采用的坐標(biāo)系統(tǒng)為：門齒鉤平面比外耳道連線(耳桿尖中心連線)低2.4 mm。根據(jù)前后囟參數(shù)確定針尖位置。挑開硬腦膜，微量注射器吸取8 l 6-羥基多巴，注射器針尖斜面的

6、1/2降至硬膜下，此時(shí)深度定為0。緩慢進(jìn)針達(dá)到7.5 mm處，微量注射控制儀調(diào)節(jié)進(jìn)藥速度，緩慢注入4 l 6-羥基多巴(0.5 l/min，約10 min)，留針6 min。再次進(jìn)針至8.0 mm處，同樣緩慢進(jìn)藥，留針6 min后，緩慢拔針， 消毒縫合切口，編號(hào)，記錄時(shí)間和一般狀況，將大鼠放入籠中喂養(yǎng)。1.3.4阿樸嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)術(shù)后觀察大鼠的自主行為，1周后在同一安靜環(huán)境下進(jìn)行試驗(yàn)。按照1 mg/kg體質(zhì)量的劑量將阿樸嗎啡注射于大鼠項(xiàng)部皮下。計(jì)數(shù)30 min內(nèi)旋轉(zhuǎn)次數(shù)，再計(jì)算每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)，7 r/min為成功模型。1.3.5模型大鼠行為學(xué)觀察成功模型大鼠表現(xiàn)為少動(dòng)、動(dòng)作遲緩、尾僵直、豎毛，部

7、分出現(xiàn)頭、身體向健側(cè)偏斜，納食少，體質(zhì)量增加緩慢，大鼠向損傷對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)，以旋轉(zhuǎn)側(cè)后肢為支撐點(diǎn)，原地轉(zhuǎn)動(dòng)，首尾相接。1.3.6紋狀體多巴胺含量檢測(cè)14 d治療結(jié)束后，各組大鼠斷頭，迅速無(wú)菌摘除注射6-羥多巴胺側(cè)紋狀體，-70冰箱中保存。測(cè)定時(shí)，取出組織，按每100 mg樣本加入1 ml預(yù)冷的高氯酸(0.1 mol/L，含0.02% EDTA)溶液，冰浴超聲粉碎，并低溫高速15 000 g離心15 min。取上清液待測(cè)。用Agilent 1100型高效液相色譜儀、N2000色譜工作站檢測(cè)多巴胺的含量。色譜柱：Hypersil SiO2,4.0 mm×300 mm，粒徑10 m。流速為1.0

8、 ml/min，進(jìn)樣量10 l。檢測(cè)條件：工作電壓0.7 V，靈敏度20 nA。多巴胺出峰時(shí)間(2.95±0.02) min。1.4治療方法帕金森病大鼠的HBO治療壓力為0.15 MPa。純氧洗艙，調(diào)節(jié)升壓速率1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果見表1。表1各組治療前后經(jīng)阿樸嗎啡誘發(fā)的大鼠旋轉(zhuǎn)行為學(xué)變化表2治療后各組大鼠腦紋狀體內(nèi)DA含量比較3討論帕金森病是中老年人常見的一種帶有部位選擇性、老化性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的變性疾病，主要病變?cè)诖竽X的黑質(zhì)和紋狀體，主要病理改變?yōu)楹谫|(zhì)紋狀

9、體系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性變性、壞死、脫失以及膠質(zhì)細(xì)胞增生、路易氏小體形成，導(dǎo)致腦部多巴胺缺乏，引起一系列病理生理改變，以靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌肉強(qiáng)直和姿勢(shì)步態(tài)異常等為臨床特征。HBO醫(yī)學(xué)作為一種現(xiàn)代物理治療方法，有其獨(dú)特的治療機(jī)制。HBO醫(yī)學(xué)的研究和臨床實(shí)踐已表明，HBO通過(guò)提高血氧含量、血氧分壓及彌散能力，改善腦血管舒縮功能，增加缺血區(qū)和椎-基底動(dòng)脈供血量，促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的建立，從而改善或修復(fù)受損腦組織和腦功能。有研究報(bào)道，帕金森病患者的全腦血流量均有下降，在HBO下，氧彌散滲入缺氧暗區(qū)的能力增強(qiáng)，使腦組織含氧量增加，改善腦組織的缺氧狀態(tài)，使受損的多巴胺神經(jīng)元功能恢復(fù)。同時(shí)HBO還可興奮交

10、感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)，使腎上腺素-多巴胺分泌增加，臨床癥狀得以改善。HBO還可使線粒體ATP酶活性增強(qiáng)，加速電子傳遞過(guò)程，使ATP產(chǎn)生增加，恢復(fù)大腦神經(jīng)元的能量供應(yīng)。通過(guò)抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，HBO可以提高黑質(zhì)-紋狀體內(nèi)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶及超氧化物歧化酶活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化水平，加快自由基清除速度，從而增強(qiáng)多巴胺能神經(jīng)元功能對(duì)6-羥基多巴胺的耐受能力，促進(jìn)其神經(jīng)功能恢復(fù)。同樣，HBO也可改善膽堿能系統(tǒng)的功能，提高學(xué)習(xí)記憶的能力等。帕金森病屬中醫(yī)“痙證”范疇。內(nèi)經(jīng)稱震顫為“掉”和“振掉”，而隨意運(yùn)動(dòng)障礙被稱為拘攣。靈樞?邪客篇指出：“邪氣惡血，固不得住留，住留則傷筋絡(luò)骨節(jié)，機(jī)關(guān)不得曲伸，故拘攣也”

11、。中醫(yī)認(rèn)為，本病病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，本為肝腎不足、氣血兩虧、心虛神弱等;標(biāo)為痰濕阻絡(luò)、風(fēng)陽(yáng)內(nèi)動(dòng)、肝郁血瘀等，是風(fēng)邪作祟所致，認(rèn)為“風(fēng)氣內(nèi)動(dòng)”是本病的發(fā)病關(guān)鍵。百會(huì)穴是益氣補(bǔ)虛、醒腦開竅的要穴，具有平肝息風(fēng)、醒腦開竅之效，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的病證均有顯著療效。風(fēng)府穴為督脈要穴，也是太陽(yáng)、陽(yáng)維與督脈之交會(huì)穴，主治癲狂、癇證、癔病、中風(fēng)不語(yǔ)、悲恐驚悸、半身不遂、眩暈、頸項(xiàng)強(qiáng)痛等癥。針刺百會(huì)穴，配合督脈經(jīng)的風(fēng)府穴，可達(dá)到息風(fēng)止痙、疏經(jīng)活絡(luò)、激發(fā)經(jīng)氣、通調(diào)腦絡(luò)、滋養(yǎng)腦髓、定痙止顫之治療目的。本研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與帕金森病模型組大鼠相比，HBO組和百會(huì)、風(fēng)府穴電針治療組大鼠的紋狀體多巴胺含量都有明顯增高，行為學(xué)明顯改善;

12、HBO結(jié)合電針組大鼠的紋狀體多巴胺含量和行為學(xué)有顯著增高改善，說(shuō)明3種治療方案都有著提高多巴胺含量改善行為學(xué)的作用，能有效促進(jìn)帕金森病模型大鼠腦內(nèi)多巴胺的合成、釋放，補(bǔ)充黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)多巴胺含量的不足，提高多巴胺能神經(jīng)元的活性，緩解帕金森病的癥狀，且HBO結(jié)合電針的療效會(huì)更為顯著。    【參考文獻(xiàn)】  1吳江. 神經(jīng)病學(xué). 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2005： 245-246.2包新民，舒斯云. 大鼠立體定位圖譜. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 1999： 60-68.3華興邦. 大白鼠穴位圖譜的研究. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)， 1991， 12(1)：

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