模型與實驗儀器耗材

1、ELISA法檢測大鼠血清中 FSH LH E2、T水平1.1實驗藥品試劑生理鹽水，批號：20130116,康寧藥業(yè)；無水乙醇，批號：32061，恒興化學(xué)試劑制造； 水合氯醛，批號：30037517，國藥集團化學(xué)試劑；FSHELISA試劑盒，俊泰生物技術(shù)，批號： E11122904LHELISA試劑盒，俊泰生物技術(shù)，批號：E11100806E2ELISA試劑盒，俊泰生物技術(shù)，批號：E11100804TELISA試劑盒，俊泰生物技術(shù)，批號：E11100802 1.2實驗儀器EP管，型號：1.5ml，美國Axygen公司；玻璃勻漿器，型號：1ml，科瑞生物技術(shù)；移液器，型號：0.1- 2.5 卩 L

2、, 0.5- 10 卩 L,20-200 L,100- 1000 L, 美國Thermo公司；電子天平，型號：PL203梅特勒一一托利多儀器；高壓蒸汽滅菌鍋，型號：YXQ-LS-75G諾基儀器；全自動干燥箱，型號：DHG-9640C公司；超低溫冰箱，型號：T11-86-340-LA，天地精儀科技；低溫高速離心機，型號：CR21®,日本日立公司；多功能酶標(biāo)儀，型號：spectraMAXM5美谷分子儀器；Real-TimePCR WesternBolt檢測TGF-p 1受體蛋白表達(dá)水平 1.實驗藥品試劑PCR所用實驗用品：生理鹽水，批號：20130116,康寧藥業(yè)；無水乙醇，批號：320

3、61，恒興化學(xué)試劑制造；水合氯醛，批號：30037517，國藥集團化學(xué)試劑；DEPC科瑞生物技術(shù)；TRIzol，批號：15596-026，美國 Lifetechnologies 公司； 氯仿，批號：100068608,國藥集團化學(xué)試劑；異丙醇，批號：32064,恒興化學(xué)試劑制造；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，批號：RR047A寶生物工程（）（TaKaRa公司）；SYBRPremixExTaqf，批號：RR420A 寶生物工程（）（TaKaRa 公 司）；Westernbolt所用實驗用品：生理鹽水，批號：20130116,康寧藥業(yè)；無水乙醇，批號：32061，恒興化學(xué)試劑制造；水合氯醛，批號：30037517

4、，國藥集團化學(xué)試劑；脫脂奶粉，科瑞生物技術(shù)；Tween-20，科瑞生物技術(shù)；考馬斯亮藍(lán)快速染色液，科瑞生物技術(shù)；麗春紅染液，科瑞生物技術(shù)；氯化鈉，批號：1266-2006，恒興化學(xué)試劑制造Glycine，科瑞生物技術(shù)；TrisBase，科瑞生物技術(shù)；SDS科瑞生物技術(shù)；二甲苯，批號：10023428,國藥集團化學(xué)試劑；HCl，批號：81013,中國平煤神馬集團東大化工；SDS-PAG凝膠配制試劑盒，批號：P0012A碧云天生物技術(shù)；TEMED批號：ST728,碧云天生物技術(shù)；Western 一抗二抗去除液（強堿性），批號：P0025,碧云天生物 技術(shù)；WesternBlot超敏發(fā)光液，批號：P

5、1010,普利萊基因技術(shù)；RIPA裂解液，批號：P0013碧云天生物技術(shù)；PMSF批號：329-98-6，中生瑞泰科技；BCA式劑盒，批號：P0010S碧云天生物技術(shù)；Prestainedproteinloadingbuffer，批號：26617，美國 Thermo公司；PrestainedproteinMWmarker，批號：26616,美國 Thermo公司；5X Load in gbuffer，科瑞生物技術(shù)；硝酸纖維素膜，批號：T328591,美國Lifetechnologies 公司； 一抗：GAPD抗體；TGF-B 1抗體美國millipore 公司）二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠

6、抗羊二抗（科瑞生物技術(shù)）； 大鼠B -actin引物、TGF-p 1引物。英濰捷基（）貿(mào)易合成并 經(jīng)質(zhì)量檢測。引物序列見表1。表1引物序列目的基因引物序列度B -actinForward : 5' -CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-171bpReverse : 5' -ATGGAGCCACCGATCCACA-TGF-B 1 Forward : 5' -CAGACTCATGATGACAGAGG-381bpReverse : 5' -GAGATGTACAGGATCTTC3CC-1.3實驗儀器PCF所需儀器EP管，型號：1.5ml，美國Axygen

7、公司；玻璃勻漿器，型號：1ml,科瑞生物技術(shù)；移液器，型號：0.1- 2.5 卩 L, 0.5- 10 卩 L,20-200 L,100- 1000 L, 美國Thermo公司；去酶PCR管，型號：0.2ml，美國Axygen公司；八聯(lián)管、蓋，型號：0.2ml，美國Axygen公司；電子天平，型號：PL203梅特勒一一托利多儀器；高壓蒸汽滅菌鍋，型號：YXQ-LS-75G諾基儀器； 全自動干燥箱，型號：DHG-9640C公司； 超低溫冰箱，型號：T11-86-340-LA，天地精儀科技； 低溫高速離心機，型號：CR21CS,日本日立公司； 核酸蛋白分析儀，型號：DU80C型，美國Beckmar

8、公司； RealTime-PCR儀，型號：CFX96 美國 Bio-Rad 公司； 梯度PCF儀，型號：T100,美國Bio-Rad公司；Westernbolt實驗儀器純水機，型號：E30131,英國 ELGALABWAT公司;制冰機，型號：SD4Q市廣紳電器制造；電子天平，型號：PL2Q3梅特勒一一托利多儀器； 高壓蒸汽滅菌鍋，型號：YXQ-LS-75G諾基儀器； 全自動干燥箱，型號：DHG-964QC公司； 全自動洗板機，型號：1575,美國BIO-RAD公司； 超低溫冰箱，型號：T11-86-34Q-LA，天地精儀科技； 臺式高速離心機，型號：TG-16V，湘智離心機儀器； 手掌型離心機

9、，型號：LX-2QQ,海門其林貝爾儀器制造； 低溫高速離心機，型號：CR21®,日本日立公司； 轉(zhuǎn)移脫色搖床，型號：TS-8型，海門其林貝爾儀器制造； 滾軸式混合器，型號：SRT-2Q2海門其林貝爾儀器制造； 數(shù)顯恒溫水浴鍋，型號：HH-2,澳華儀器； 旋渦混合器，型號：QL-9Q1，海門其林貝爾儀器制造； 多功能酶標(biāo)儀，型號：spectraMAXM5美谷分子儀器； 電腦型倒置熒光顯微鏡，型號：DFM-6QC蔡康光學(xué)儀器; 激光共聚焦熒光顯微鏡，日本 Olmpus公司； 蛋白電泳儀，美國 Bio-Rad公司； 凝膠圖像成像分析儀，美國 Bio-Rad公司；1.4westernbolt

10、實驗用到的溶液配制方法10%SDS-PAG分離膠(2塊膠)：蒸餾水2.7ml , 10%±硫銨0.1ml , 1MTris(pH8.8)3.8ml ,10%SDS0.1m, 30%Acr-Bis(29:1)3.3ml,TEMED0.004ml5%SDS-PAG濃縮膠(2塊膠):蒸餾水2.1ml , 10%±硫銨0.03ml , 1MTris(pH6.8)0.38ml, 10%SDS0.03mJ 30%Acr-Bis(29:1)0.5ml,TEMED0.003ml10 倍電泳緩沖液：SDS10g TrisBase30g , Glycine141.1g，蒸 餾水定容至1000m

11、l，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，置冰?C保存?zhèn)溆茫?用時稀釋10倍。轉(zhuǎn)膜液：Glycine14.4g , TrisBase3.03g，蒸餾水定容至 800ml, 充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓帽?C保存?zhèn)溆?，使用時加入200ml甲醇, 使其終濃度為20%TBS TrisBase3g , NaCI8g,蒸餾水定容至 800ml，充分?jǐn)嚢柚?完全溶解，置冰箱4C保存?zhèn)溆?，使用時用HCI調(diào)pH值至7.4，以蒸 餾水定容至1000ml。TBST TBS力口 0.1%體積 Tween-20。PBS緩沖液：NaHPG.42g, KCl0.2g , KHPQ0.27g , NaCl8g，力口 入蒸餾水800ml充分?jǐn)?/p>

12、拌至完全溶解，用 HCI調(diào)pH值至7.4，用蒸 餾水定容至1000ml，高壓蒸汽滅菌，置冰箱4 C保存?zhèn)溆?。Real-TimePCR、WesternBolt檢測Samd蛋白表達(dá)水平及其磷酸化水平1.實驗藥品試劑PCR所用實驗用品：生理鹽水，批號：20130116,康寧藥業(yè)；無水乙醇，批號：32061，恒興化學(xué)試劑制造；水合氯醛，批號：30037517，國藥集團化學(xué)試劑；DEPC科瑞生物技術(shù)；TRIzol，批號：15596-026，美國 Lifetechnologies 公司；氯仿，批號：100068608,國藥集團化學(xué)試劑；異丙醇，批號：32064,恒興化學(xué)試劑制造；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，批號：RR0

13、47A寶生物工程（）（TaKaRa公司）；SYBRPremixExTaqf，批號：RR420A 寶生物工程（）（TaKaRa 公Westernbolt所用實驗用品:生理鹽水，批號：20130116,康寧藥業(yè)；無水乙醇，批號：32061，恒興化學(xué)試劑制造；水合氯醛，批號：30037517，國藥集團化學(xué)試劑；脫脂奶粉，科瑞生物技術(shù)；Tween-20，科瑞生物技術(shù)；考馬斯亮藍(lán)快速染色液，科瑞生物技術(shù)；麗春紅染液，科瑞生物技術(shù)；氯化鈉，批號：1266-2006，恒興化學(xué)試劑制造Glycine，科瑞生物技術(shù)；TrisBase，科瑞生物技術(shù)；SDS科瑞生物技術(shù)；二甲苯，批號：10023428,國藥集團化學(xué)

14、試劑；HCl，批號：81013,中國平煤神馬集團東大化工；SDS-PAG礙膠配制試劑盒，批號：P0012A碧云天生物技術(shù)；TEMED批號：ST728,碧云天生物技術(shù)；Western 一抗二抗去除液（強堿性），批號：P0025,碧云天生物 技術(shù)；WesternBlot超敏發(fā)光液，批號：P1010,普利萊基因技術(shù)；RIPA裂解液，批號：P0013碧云天生物技術(shù)；PMSF批號：329-98-6，中生瑞泰科技；BCA式劑盒，批號：P0010S碧云天生物技術(shù)；Prestainedproteinloadingbuffer，批號：26617，美國 Thermo公司；PrestainedproteinMWma

15、rker，批號：26616,美國 Thermo公司； 5X Load in gbuffer，科瑞生物技術(shù)；硝酸纖維素膜，批號：T328591,美國Lifetechnologies 公司； 一抗：GAPD抗體；p-Samd抗體（美國 millipore 公司）二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠抗羊二抗（科瑞生物技術(shù)）； 大鼠B -actin引物、Same引物。英濰捷基（）貿(mào)易合成并經(jīng)質(zhì) 量檢測。引物序列見表2。表2引物序列目的基因引物序列產(chǎn)物長度B -actinForward :5'-CATCCGTAAAGACCTCTATGCC3AAC-171bpReverse :5'-ATGGA

16、GCCACCGATCCACA-SamdForward :5'-CACTGGTTCCGAAAGGGACTC-153bpReverse :5'-CTGAAGCAAAAATCGCCACCT-1.3實驗儀器PCF所需儀器EP管，型號：1.5ml，美國Axygen公司；玻璃勻漿器，型號：1ml,科瑞生物技術(shù)；移液器，型號：0.1- 2.5 卩 L, 0.5- 10 卩 L,20-200 L,100- 1000 L, 美國Thermo公司；去酶PCR管，型號：0.2ml，美國Axygen公司；八聯(lián)管、蓋，型號：0.2ml，美國Axygen公司；電子天平，型號：PL203梅特勒一一托利多儀器

17、；高壓蒸汽滅菌鍋，型號：YXQ-LS-75G諾基儀器；全自動干燥箱，型號：DHG-9640C公司；超低溫冰箱，型號：T11-86-340-LA，天地精儀科技；低溫高速離心機，型號：CR21®,日本日立公司；核酸蛋白分析儀，型號：DU800型，美國Beckman公司；RealTime-PCR儀，型號：CFX96 美國 Bio-Rad 公司；梯度PCF儀，型號：T100,美國Bio-Rad公司；Westernbolt實驗儀器純水機，型號：E30131,英國 ELGALABWAT公司;制冰機，型號：SD40市廣紳電器制造；電子天平，型號：PL203梅特勒一一托利多儀器； 高壓蒸汽滅菌鍋，型

18、號：YXQ-LS-75G諾基儀器； 全自動干燥箱，型號：DHG-9640C公司； 全自動洗板機，型號：1575,美國BIO-RAD公司； 超低溫冰箱，型號：T11-86-340-LA，天地精儀科技； 臺式高速離心機，型號：TG-16W/湘智離心機儀器； 手掌型離心機，型號：LX-200，海門其林貝爾儀器制造； 低溫高速離心機，型號：CR21®,日本日立公司； 轉(zhuǎn)移脫色搖床，型號：TS-8型，海門其林貝爾儀器制造； 滾軸式混合器，型號：SRT-202海門其林貝爾儀器制造； 數(shù)顯恒溫水浴鍋，型號：HH-2,澳華儀器；旋渦混合器，型號：QL-901，海門其林貝爾儀器制造； 多功能酶標(biāo)儀，型

19、號：spectraMAXM5美谷分子儀器； 電腦型倒置熒光顯微鏡，型號：DFM-60C蔡康光學(xué)儀器； 激光共聚焦熒光顯微鏡，日本 Olmpus公司； 蛋白電泳儀，美國 Bio-Rad公司；凝膠圖像成像分析儀，美國 Bio-Rad公司；1.4westernbolt實驗用到的溶液配制方法10%SDS-PAG分離膠(2 塊膠)：蒸餾水 2.7ml , 10%±硫銨 0.1ml , 1MTris(pH8.8)3.8ml ,10%SDS0.1m, 30%Acr-Bis(29:1)3.3ml,TEMED0.004ml5%SDS-PAG濃縮膠(2塊膠):蒸餾水2.1ml , 10%±硫銨

20、0.03ml , 1MTris(pH6.8)0.38ml, 10%SDS0.03mJ 30%Acr-Bis(29:1)0.5ml,TEMED0.003ml10 倍電泳緩沖液：SDS10g TrisBase30g , Glycine141.1g，蒸 餾水定容至1000ml，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓帽?C保存?zhèn)溆?，?用時稀釋10倍。轉(zhuǎn)膜液：Glycine14.4g , TrisBase3.03g，蒸餾水定容至 800ml,充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，置冰?C保存?zhèn)溆?，使用時加入200ml甲醇, 使其終濃度為20%TBS TrisBase3g，NaCI8g,蒸餾水定容至 800ml，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓?/p>

21、置冰箱4C保存?zhèn)溆茫褂脮r用HCI調(diào)pH值至7.4，以蒸 餾水定容至1000ml。TBST TBS力口 0.1%體積 Tween-20。PBS緩沖液：NaHPG.42g, KCl0.2g , KHPQ0.27g , NaCl8g，力口入蒸餾水800ml充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，?HCI調(diào)pH值至7.4，用蒸 餾水定容至1000ml，高壓蒸汽滅菌，置冰箱4 C保存?zhèn)溆谩?.多囊卵巢綜合征動物模型選擇多囊卵巢綜合征(polycysticovarysyndromePCOS)是婦科常見的 生殖功能障礙性疾病，主要表現(xiàn)為卵巢的雄激素過多所造成的閉經(jīng)、 多毛、肥胖及無排卵，其發(fā)生率占生育年齡婦女的5%-10%。目前多 囊卵巢綜合征動物模型主要有芳香酶抑制劑造模法、雄激素造模法、 雌激素造模法、孕激素聯(lián)合 HC