植物組織培養(yǎng)開題范文

1、北京師范大學珠海分校開題報告姓名（小組成員）：學院（系、所）： 學科專業(yè)： 導師姓名：開題時間:姓名性別入學時間院系工程技術學院專業(yè)生物技術研究方向植物組織培養(yǎng)論文中文胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)題目英文Carrot callus cultivat ing論文工作計劃簡述（開題報告內(nèi)容）1、本論文課題國內(nèi)外概況和文獻綜述:應用細胞的全能性（totipote ncy）理論，即已經(jīng)分化的細胞仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能，可以將成熟胡蘿卜直根的部分組織培養(yǎng)成完整胡蘿卜植株。國 內(nèi)外研究者在探討胡蘿卜愈傷組織的成因時，發(fā)現(xiàn)影響胡蘿卜愈傷組織的發(fā)生頻率主要有基因型、外植體、培養(yǎng)基、激素等因素。胡蘿卜的基因型是影響

2、其離體培養(yǎng)再生能力的重要因素。對于不同品種的胡蘿卜種子，大多數(shù)研究者認為利用其剛萌發(fā)的無菌苗的下胚軸誘導愈傷組織，1-3出愈率較高 。同一基因型的不同外植體其愈傷組織的發(fā)生能力有明顯差異，這與不同外植體的分化程度和脫分化能力不同有關。近年來的研究表明，以胡蘿卜下胚軸為外1,3,4植體出愈率要高于子葉和貯藏根。此外，楊寧等（1999）選取胡蘿卜貯藏根的皮層、木質(zhì)部及韌皮部為外植體，發(fā)現(xiàn)從韌皮部誘導出的愈傷組織有較好的5生長效果。在胡蘿卜愈傷組織誘導和分化中，基本培養(yǎng)基成分對胚性愈傷組織的誘導率和質(zhì)量均有顯著影響，一般認為MS培養(yǎng)基對體細胞胚的發(fā)生更為有利。但也有1認為B5基礎培養(yǎng)基略優(yōu)于 MS基

3、礎培養(yǎng)基。不同的激素種類、濃度及其組合對愈傷組織的誘導率有顯著影響。已有的研究結果表明，在培養(yǎng)基中加入2,4-D,6-BA,BA,KT 等，會影響胚性愈傷組織的發(fā) 生。2,4-D的濃度從0.110.0 mg/L 不等，6-BA的濃度從0.24.5mg/L不等，2,3,6BA的濃度從0.51.0mg/L不等，KT的濃度從0.22.0mg/L不等 。此外還有研究結果表明，2,4-D/KT比值是影響愈傷組織形成的關鍵因素，隨著比值的增7大，愈傷組織誘導率有逐漸升高的趨勢。2、本論文課題的理論和實際應用意義:胡蘿卜(Daucus carrot ),屬于十字花科植物，是一種十分重要的蔬菜植物。由于其營養(yǎng)

4、價值高，及其適于生食、加工、烹調(diào)等多種用途，在世界范圍內(nèi)廣泛栽培。中國是農(nóng)業(yè)大國，胡蘿卜作為蔬菜作物在人們生活中起著重要的作 用因此，加快我國胡蘿卜育種研究以成為迫切需要。近些年來，隨著生物技術與分子生物學技術的快速發(fā)展，作為生物技術研究的理想材料，許多國家對胡蘿 卜體細胞雜交技術、遺傳轉(zhuǎn)化與再生技術、分子標記與基因克隆技術進行了廣泛深入的研究。我國科研工作者在胡蘿卜的生物技術與分子生物學研究上也取得了一定進展，特別是在組織培養(yǎng)、原生質(zhì)體融合、遺傳轉(zhuǎn)化及再生等方面。 但是在胡蘿卜細胞培養(yǎng)方面并不是太多。因此繼續(xù)深入研究還是很有必要的。此外，由于市面上的胡蘿卜價格比較便宜，材料易得，而且在組織培

5、養(yǎng)方面容易誘導發(fā)生，我們可以通過這個實驗熟悉植物組培。3、論文的基本內(nèi)容、結構框架以及要突破的難點:（1）材料及設備：6個培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、吸水紙、鑷子、解剖刀、無菌操作臺、胡蘿卜直根（長度至少200mm直徑不小于 40mn）、大約 20% （體積比）濃度的次氯酸鈣溶液1000ml、75%酉精、MS培 養(yǎng)基、 2,4-D、KT（2）實驗步驟設計：A. 培養(yǎng)基的配制： 取無菌水200ml 依次加入母液：大量元素25ml、微量元素2.5ml、鐵鹽2.5ml、有機元素2.5ml、重復6次，在6個培養(yǎng)瓶中加入生長素2,4-D、KT （用量如下表）實驗號基本培養(yǎng)基2,4-D (mg/L)KT (mg/L)

6、1MS002MS00.53MS104MS10.55MS21.56MS42.5誘導率=（形成愈傷組織的外植體數(shù) /接種外植體數(shù)）X 100% 在個瓶中稱取并加入瓊脂2g,蔗糖7.5g 放微波爐里融化 每瓶定容500ml 調(diào) PH(5.86.0) 包扎后高溫滅菌，待凝固后備用B. 外植體的清洗和消毒：用小刷在流動的自來水下洗刷胡蘿卜，除去表面的屑粒。用小刀給其削去表皮，并切成小段放入燒杯中。先用75%酒精對胡蘿卜直根消毒5min，用無菌吸水紙吸干，再用 10%的次氯酸鈣溶液消毒 10min，放入無 菌水中漂洗23次，用無菌吸水紙吸干待用。C. 接種：在無菌操作臺上操作，把消毒好的胡蘿卜直根放入無菌

7、培養(yǎng)皿中，用消毒好的小刀沿截面將其橫切成厚度1mm左右的小圓片，然后將小圓片的韌皮部和木質(zhì)部切去，留下形成層，再將形成層切成大約長5mm寬5mm高1mm的小長塊。將凝固的培養(yǎng)基融化后適量倒入6個培養(yǎng)皿，用鑷子將切好的胡蘿卜外植體接種在固體培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿5塊，按上表放入 6個培養(yǎng)皿中，表上編號。放于黑暗處 25C條件下進行暗培養(yǎng)。D. 培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)皿放在無菌箱里培養(yǎng)，培養(yǎng)期間定期更換培養(yǎng)基 ，避免營養(yǎng)不足影響效果。并且要定期消毒，嚴格控制溫度，定時光照，使實驗免受無關變量影響。注意觀察記錄外植體的變化，是否有污染或誘導出愈傷組織。(3) 實驗注意事項：A. 防火。實驗中要經(jīng)常用酒精消

8、毒、用酒精燈燒鑷子、刀具，注意安全。B. 無菌操作。超凈工作臺的消毒，在工作臺內(nèi)部所用儀器的消毒以及工作 臺面上的用品要有合理的布局。手要用酒精擦干凈；鑷子和刀經(jīng)常在火焰上燒； 錐形瓶、手不要放在盛材料的培養(yǎng)皿上方。C. 材料處理。材料不易切得過小，消毒時間不易過長。切取外植體時盡量 取胡蘿卜的形成層進行接種，形成層相對木質(zhì)部和韌皮部較容易誘導出愈傷組 織，而且要把胡蘿卜的消毒接觸部位切除干凈。D. 培養(yǎng)基配制。按實際配制含量準確吸取母液，PH的調(diào)節(jié)(PH計的正確操作)都是制備 MS培養(yǎng)基的重要操作。要先滅菌再凝固。(4) 實驗可能遇到的困難：A.實驗過程中所需要用到的實驗用具以及培養(yǎng)基沒有經(jīng)

9、過嚴格的滅菌，實 驗污染導致實驗失敗。B.培養(yǎng)基中植物生長激素的濃度不對，導致出愈率低。4、論文計劃及進度:理論日程（可參考）實驗事項時間分離胡蘿卜直根的新鮮外植體及接種進入培養(yǎng)基第1天愈傷組織的顯著增殖約14天約兩周后，觀察并計算胡蘿卜的誘導率實驗號基本培養(yǎng)基2,4-D(mg/L)KT ( mg/L)誘導率（%1MS002MS00.53MS104MS10.55MS21.56MS42.5期間作如下記錄簡表：記錄人：溫度：濕度：日光照時間記錄項目日期培養(yǎng)物數(shù)目肉眼觀測形態(tài)變化污染物數(shù)目所作處理備注5、主要參考文獻:1 張婭，曾君祉，周志勇，等.胡蘿卜組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立J.植物學通報，2005,22(增刊):7-42.2 鄭回勇，鄭金貴，等.胡蘿卜再生體系及高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立J.廣西農(nóng)業(yè)科學，2002(5):237-241.3 尹文兵，李麗娟，黃勤妮，李艷紅.胡蘿卜愈傷組織的誘導及細胞懸浮培養(yǎng)研究J.山西師范大學學報，2004(2):72-76.4 高金秋，于麗杰.胡蘿卜體細胞胚再生系統(tǒng)的建立J.北方園 藝,2009(8):73-77.楊寧，郭勇胡蘿卜細胞培養(yǎng)產(chǎn)生胡蘿卜素的研究J.廣西植 物,1999,19(1)