微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)_ppt課件

1、微生物微生物的類(lèi)群的類(lèi)群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類(lèi)等如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類(lèi)等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的一切生微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的一切生物物無(wú)細(xì)胞構(gòu)造無(wú)細(xì)胞構(gòu)造真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞原核細(xì)胞課題課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培育微生物的實(shí)驗(yàn)室培育1.提供營(yíng)養(yǎng)和條件提供營(yíng)養(yǎng)和條件2.防止污染防止污染一.培育基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.根本成分：根本成分：思索：微生物思索：微生物“吃什么？吃什么？碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽碳源碳源

2、無(wú)機(jī)碳源：無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2CO2、CO32-CO32-、HCO3-HCO3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無(wú)機(jī)氮源：無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4NH4、NO3-NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含CHONCHON的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁衍的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一.培育基： 微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.根本成分： 碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽2.特殊營(yíng)養(yǎng)：特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、

3、堿基等維生素、堿基等牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：4.種類(lèi)：種類(lèi)：固體培育基固體培育基液體培育基液體培育基有無(wú)有無(wú) 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分別分別 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 消費(fèi)消費(fèi)化學(xué)成分：化學(xué)成分：物理性質(zhì)：物理性質(zhì)：天然培育基天然培育基 合成培育基合成培育基標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類(lèi)型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計(jì)數(shù)等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類(lèi)、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分

4、不明確工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類(lèi)的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)物質(zhì) 培養(yǎng)、分離出特定的微生物牛肉膏蛋白胨培育基 是一種運(yùn)用最廣泛和最普通的細(xì)菌根底培育基。1000ml牛肉膏蛋白胨培育基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？5. 配制原那么目的明確：目的明確：營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的適宜的pH值：值：有機(jī)碳源有機(jī)碳源異養(yǎng)型：異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類(lèi)、培育目的選擇原料根據(jù)微生物的種類(lèi)、培育目的選擇原料自養(yǎng)型：自養(yǎng)型：不加碳源不加碳源參與緩沖

5、劑參與緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸細(xì)菌偏堿，真菌偏酸CO2碳源碳源消費(fèi) 科研巴氏消毒法巴氏消毒法耐高溫需堅(jiān)持枯燥耐高溫需堅(jiān)持枯燥的的 物品，物品，160170 12小時(shí)小時(shí)接種環(huán)、接種針等接種環(huán)、接種針等 金屬器具金屬器具7075、30min 80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫暖理化方法較為溫暖理化方法殺死部分有害菌體殺死部分有害菌體不包括芽孢、孢子不包括芽孢、孢子劇烈的理化方法，劇烈的理化方法，殺死一切微生物殺死一切微生物煮沸消毒法煮沸消毒法化學(xué)藥劑化學(xué)藥劑紫外線紫外線灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌培育基，培

6、育基，100KPa、121、1530min二.無(wú)菌技術(shù)： 防止外來(lái)雜菌的污染防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：請(qǐng)他判別以下資料或器具能否需求消毒或滅菌。假設(shè)需求，請(qǐng)選擇適宜的方法。1 培育細(xì)菌用的培育基與培育皿2 玻棒、試管、燒瓶和吸管3 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手練習(xí):說(shuō)出無(wú)菌技術(shù)及相應(yīng)的詳細(xì)方法任務(wù)臺(tái)操作者的手、穿著培育基培育皿玻棒、試管接種環(huán)牛奶無(wú)菌水飲用水紗布涂布器2.無(wú)菌范圍：無(wú)菌范圍： 實(shí)驗(yàn)操作空間消毒實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、穿著消毒操作者的手、穿著消毒實(shí)驗(yàn)器具滅菌實(shí)驗(yàn)器具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程二.無(wú)菌技術(shù)： 防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作酒精燈旁操作超

7、凈任務(wù)臺(tái)單個(gè)單個(gè)或少數(shù)菌體或少數(shù)菌體2.特征：特征：大小、外形、光澤度、大小、外形、光澤度、顏色、透明度等。顏色、透明度等。3.功能：功能：1.定義：定義：三三.菌落菌落鑒定菌種的重要根據(jù)鑒定菌種的重要根據(jù)固體培育基上固體培育基上大量繁衍大量繁衍子細(xì)胞群體子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培育基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培育：制備牛肉膏蛋白胨固體培育基制備牛肉膏蛋白胨固體培育基1.計(jì)算：計(jì)算： 培育基用量培育基用量依配方計(jì)算各成分的用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱(chēng)量：稱(chēng)量：3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用稱(chēng)量紙稱(chēng)取牛肉

8、膏黏稠，用稱(chēng)量紙稱(chēng)取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱(chēng)量紙牛肉膏、稱(chēng)量紙 、少量水加熱溶、少量水加熱溶解解取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、NaCl 瓊脂瓊脂 補(bǔ)水定容補(bǔ)水定容4.調(diào)調(diào)pH、分裝、封口：、分裝、封口：5.滅菌：滅菌：6.倒平板：倒平板：培育基、培育皿培育基、培育皿分散成單個(gè)細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,構(gòu)成單個(gè)菌落構(gòu)成單個(gè)菌落約約50防止皿蓋上的水珠落入培育基，呵斥污染防止皿蓋上的水珠落入培育基，呵斥污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基防止瓶口的微生物污染培育基四.大腸桿菌的純化培育：制備牛肉膏蛋白胨固體培育基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：平板劃

9、線法：平板劃線法：菌種菌種劃劃3個(gè)平板個(gè)平板1個(gè)不劃線個(gè)不劃線1.接種：接種：接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培育基防止劃破培育基反復(fù)實(shí)驗(yàn)反復(fù)實(shí)驗(yàn)空白對(duì)照空白對(duì)照為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作終了時(shí)，依然需求灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上能夠存在的微生物污染培育物環(huán)上能夠存在的微生物污染培育物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而經(jīng)過(guò)劃線次數(shù)的添加，使每次劃線時(shí)菌而經(jīng)過(guò)劃線次數(shù)的添加，使每次劃線時(shí)菌種

10、的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細(xì)菌及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。污染環(huán)境和感染操作者。6支試管，分別參與9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：菌液微量 移液器稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：涂布平板：不超越不超越0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個(gè)平板個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍平板劃線法：平板劃線

11、法：四.大腸桿菌的純化培育：制備牛肉膏蛋白胨固體培育基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：2.培育：培育：將接種后的培育基和一個(gè)未接種的培育基將接種后的培育基和一個(gè)未接種的培育基放入放入37恒溫箱中培育恒溫箱中培育12h24h后，后，察看并記錄察看并記錄五.菌種的保藏：1.暫時(shí)保藏：暫時(shí)保藏：試管固體斜面培育基上試管固體斜面培育基上42.長(zhǎng)期保管：長(zhǎng)期保管：菌種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml甘油甘油1ml菌液菌液20一.培育基： 微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.根本成分： 碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽2.特殊營(yíng)養(yǎng)：特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等維生素、堿基等牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：4.種類(lèi)：種類(lèi)：固體培育基固體培育