健康食品之胃腸功能改善評(píng)估方法.

1、健康食品之胃腸功能改善評(píng)估方法880802 衛(wèi)署食字第 88037803 號(hào)公告920829 衛(wèi)署食字第 0920401629 號(hào)公告修正壹、前言 消化器官的主要功能是使食物消化，營(yíng)養(yǎng)素吸收及排便。消化最主要是經(jīng)由消化酵素的 作用，自律神經(jīng)的調(diào)節(jié)及體液性的調(diào)節(jié) （消化管荷爾蒙等 ）等系統(tǒng)來(lái)控制。因此，除了病原菌 的侵襲外，各種飲食內(nèi)容的改變及精神壓力或過(guò)敏都會(huì)引起胃腸道的不適，影響食物的消化 及營(yíng)養(yǎng)素的吸收。人類(lèi)的腸道中棲息了約數(shù)百種細(xì)菌，這些正常菌相的存在，除了可抑制有害病菌在腸內(nèi) 孳生及危害外，且可產(chǎn)生人體所需的物質(zhì)，如維生素 B 及 K 等。在人體正常菌相中，包含 了有益菌與有害菌，有益

2、菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物（如乳酸與醋酸）可抑制有害菌的增殖，對(duì)健康 的維持與整腸方面有相當(dāng)?shù)膸椭?。一般健康人體腸道中有害細(xì)菌（如產(chǎn)氣莢膜梭菌 Clostridium perfringens ）含量不高，無(wú)法危害人體，然而身體的不適，飲食及環(huán)境的變化、 精神壓力、老化等都可能使有害菌增加，造成腸內(nèi)菌相平衡的崩解，進(jìn)而引起便祕(mì)、下痢。食品種類(lèi)繁多，其中部份食品可改善食慾，促進(jìn)消化酵素的分泌，增進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，增加 小腸吸收。食品亦可因含有利腸道益生菌生長(zhǎng)的成份，或本身含有腸道中的有益細(xì)菌，因而 具改善腸內(nèi)菌相的功能。因此，若食品具有 （1） 促進(jìn)消化吸收， （2） 改善腸內(nèi)細(xì)菌菌相， （3） 促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，幫

3、助維持腸道正常機(jī)能等三種功能中任一種功能時(shí)，可認(rèn)為具有改善胃腸道 功能。貳、實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果判定 一、評(píng)估對(duì)胃腸道功能改善之要點(diǎn)與原則：（一）改善胃腸功能必須明確具有以下四種功能指標(biāo)之丨。1. 促進(jìn)消化吸收2. 改善腸內(nèi)細(xì)菌菌相3. 幫助（改善）胃腸運(yùn)動(dòng)4. 有助於胃黏膜之保護(hù)作用（二）所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)可分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與人體實(shí)驗(yàn)，兩者可擇一施行。若廠商所提產(chǎn)品的相關(guān)科學(xué)研究證據(jù)不明確或不足時(shí)，須同時(shí)進(jìn)行 人體實(shí)驗(yàn)和動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)，以加強(qiáng)證據(jù)之可信度。四）五）六）七）八）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)間至少需 4 星期以上，人體實(shí)驗(yàn)至少需進(jìn)行 2 星期以上。 所使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以哺乳類(lèi)動(dòng)物為原則。動(dòng)物隻數(shù)每組至少為 8 隻，

4、小白鼠隻數(shù)每組 至少為 10 隻。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須來(lái)自各大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 人體實(shí)驗(yàn)每組人數(shù)至少為 8 人，且必須有控制組。 人體實(shí)驗(yàn)必須由大學(xué)食品、營(yíng)養(yǎng)、醫(yī)藥等相關(guān)系所、研究機(jī)構(gòu)、醫(yī)學(xué)中心執(zhí)行，需有 醫(yī)師參與，並遵循衛(wèi)生單位對(duì)人體實(shí)驗(yàn)有關(guān)之相關(guān)規(guī)定。(九)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)，飼料的內(nèi)容與比例必須符合AIN (American Institute of Nutrition )之規(guī)範(fàn)，進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)的飲食內(nèi)容與比例必須符合衛(wèi)生署所公佈之飲食指南。(十)評(píng)估對(duì)胃腸道功能所採(cǎi)用的實(shí)驗(yàn)方法，必須是學(xué)術(shù)界或醫(yī)學(xué)單位所採(cǎi)用或普遍認(rèn)可之 方法，亦可使用市售的生化試劑(Test Kit)直接測(cè)定之。、促進(jìn)消化吸收(一)

5、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1. 動(dòng)物體重的測(cè)定及消化吸收率的測(cè)定2. 消化酵素活性的測(cè)定 ：如 trypsin, chymotry psin, amylase, li pase, leuci ne ami nopeptidase, disaccharidase 。(二 )人體實(shí)驗(yàn)：1. 有關(guān)改善食慾不佳方面，觀察食慾、食量、體重、血紅素等指標(biāo)的變化。2. 有關(guān)改善消化吸收不良方面，觀察食慾、食量、胃腸腹脹感、糞便形狀及次數(shù)、胃腸 運(yùn)動(dòng)及小腸吸收等指標(biāo)變化。(三) 結(jié)果判定：1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中必須至少一項(xiàng)指標(biāo)為實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)於控制組(p<0.05)。2. 人體實(shí)驗(yàn)方面，如果是針對(duì)改善兒童食慾方面，以食慾、食量的

6、改善為觀察重點(diǎn)。體 重及血紅素的變化則作為輔助指標(biāo)。3. 針對(duì)消化吸收不良者，除了有明顯改善食慾、食量，胃腸腹脹感及糞便形狀等消化不良癥狀外，在小腸吸收指標(biāo)中至少有一項(xiàng)指標(biāo)為實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)於控制組(p<0.05)。4. 如果符合以上要求即可判定測(cè)試食品具有促進(jìn)消化吸收作用。(四) 測(cè)定方法1. 消化酵素活性測(cè)定樣品製備：截取實(shí)驗(yàn)老鼠(Sprague-Dawley或Wistar品系)小腸片段，刮下腸黏膜(脂解酵素活性測(cè)定 不必刮下腸黏膜)，取0.2 g加入2 mL含protease 抑制劑(1 AM phenyimethylsulfonylfluoride 及 2.2 mM iodoacet

7、ic acid) 之 4oC、0.9% NaCl 溶液，以均 質(zhì)機(jī)均質(zhì)化。(1)雙醣酵素(disaccharidase) 活性測(cè)定目的：測(cè)定小腸雙醣類(lèi)消化酵素(乳糖酵素、麥芽糖酵素與蔗糖酵素)活性。測(cè)定方法：取30巴的腸黏膜均質(zhì)液加入15 AL的56 mM雙醣溶液(乳糖、麥芽糖或蔗 糖)於 37oC下作用30分鐘，再加入100 4L的0.6 N NaOH溶液溶解細(xì)胞，另以10乩 的6 N HCl溶液中和之。取45 PL處理過(guò)後之腸黏膜液或葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(0-40 mg/mL) 與 625 4L 反應(yīng)緩衝液(50 mM Tris-malate、33 mM sodium potassium phos

8、phate 與30 mM MgCl 2，pH 6.8)、150 的 1 mM ATP、150 H_ 的 1 mM NADP、15 的 330 IU/mL hexokinase (EC 2.7.1.11)與 15 H_ 的 170 IU/mL glucose-6-phosphate dehydrogenase (EC 1.1.1.49) 於37oC下作用30分鐘，最後將樣品置於冰浴上以終止 其反應(yīng)。葡萄糖產(chǎn)物含量則以分光光度計(jì)於340 nm波長(zhǎng)下測(cè)定減少的NAD PH，並以改良的Lowry方法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量，而雙醣酵素活性以M葡萄糖/分鐘卅g蛋白質(zhì)表示之。(2) 脂解酵素(lipase)活

9、性測(cè)定目的：測(cè)定小腸內(nèi)脂質(zhì)消化酵素活性測(cè)定方法：用市售試劑組(Sigma Lipase-PS 丁町測(cè)定之。將900 kL受質(zhì)溶液(1.1 mM 1,2-diglyceride、2 mM sodium N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine、0.66mM ATP、860 U/L mo noglyceride lip ase、1340 U/L glycerol kin ase、40,000 U/L glycerol-3-phosphate oxidase、1340 U/L horseradish peroxidase、40,000 U/L c

10、o-lipase與緩衝液)加至15 4L之腸均質(zhì)液或標(biāo)準(zhǔn)液(附於試劑組)中，於37oC下作用 3-5 分鐘，再加入 300 AL 活化劑(36 mM deoxycholate、6 mM 4-aminoantipyrine、 0.05% sodium azide與緩衝液)，於37oC下作用3分鐘後，以分光光度計(jì)於 550 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定2分鐘，並以改良的Lowry方法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量，而脂解酵素活性 以u(píng)nit/Mg蛋白質(zhì)表示之。(3) 白胺酸胺基酵素 (leucine aminopeptidase ， LAP)活性測(cè)定目的：測(cè)定小腸絨毛刷狀緣膜上蛋白質(zhì)消化酵素活性。測(cè)定方法：用市售試劑組

11、(Sigma Diagnostics ® LAP)測(cè)定之。取0.5 mL腸黏膜均質(zhì) 液，混合 0.5 mL LAP 受質(zhì)溶液(20 mg/dL L-leucyl- P-naphthylamine 溶於 phosphate 緩衝液，pH 7.1)，於37oC下作用1小時(shí)，再加入0.5 mL的2 N HCl，1.5 mL處理過(guò) 後之腸黏膜液或1.5 mL標(biāo)準(zhǔn)液(0-12 Sigma unit/mL)與0.5 mL sodium nitrite 溶液，於 室溫下作用3分鐘後，混合1.0 mL 0.5% (w/v) ammonium sulfamate ，於室溫下作用3 分鐘，再加入2.0

12、mL N-1-naphthylethylenediamine酒精溶液，於室溫下作用 45分鐘後，以分光光度計(jì)於580 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值，並以改良的Lowry方法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量，而白胺酸胺基之酵素活性以Sigma unit/Pg蛋白質(zhì)表示之。1 Sigma unit定義為於37oC、pH 7.1下，每1小時(shí)生成1 Amole P-naphthylamine的酵素量。判定：以上各一項(xiàng)有改善，表示有改善胃腸消化之功能。2. 改善胃腸功能之參考指標(biāo)：(1)Lundh測(cè)試(主要為胰臟功能)：使用300 ml之流質(zhì)食物(含6%脂肪、5%蛋白質(zhì)及15 %醣類(lèi)),並放置十二指腸管, 依時(shí)段抽取十二指

13、腸液，以測(cè)定消化酵素之濃度(如 Trypsin )或以?xún)?nèi)視鏡抽取胰液作 消化酵素之分析。Schilling測(cè)試(主要為胃腸功能)-以維生素B12之吸收來(lái)測(cè)定胃腸功能-以放射性標(biāo)示之維他命B12給予空腹之受試者B12含量B12 則加入 Intrinsic factor一小時(shí)後再由肌肉注射未標(biāo)示 B1224小時(shí)後收集尿液，並測(cè)定-7天後重複此步驟，但口服 -兩次檢查加以比較評(píng)估(3)脂肪之吸收判定：糞便脂肪分析：正常值：< 7g/day-每日食用食物中至少有100 g中鏈三酸甘油酯共三天；並收集糞便 3天 測(cè)定糞便中脂肪含量使用Sudan stain，只可測(cè)三酸甘油酯及l(fā)ipalytic p

14、roduct(4) D-xylose耐受測(cè)試(主要為小腸功能)：-主要測(cè)定近端小腸之醣類(lèi)吸收隔夜禁食，再服用25g之D-xylose, 5小時(shí)後之尿液中若xylose排出大於25 %, 即表示正常。1及2小時(shí)抽血，若其中一次大人血中xylose>300 mg/L ,或小孩血中xylose >100 mg/L，則表示正常。(5) 核子醫(yī)學(xué)檢查目前只使用於 gastric emptying study受試者服下含有放射源(Tc-99m and In-111 )的固體及液體食物 測(cè)量受試者90分後的胃排空率(6)放射線科檢查 小腸排空速度檢測(cè)受試者喝下600 CC barium 後隔15

15、分透視一次，直到barium完全排出ileocecal valve三、改善腸內(nèi)細(xì)菌菌相(一) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：1. 檢測(cè) 1 種益生菌：Bifidobacterium2. 檢測(cè) 1 種有害(或無(wú)益)菌： Clostridium perfri nge ns(二) 人體實(shí)驗(yàn)：1. 檢測(cè) 1 種益生菌：Bifidobacterium2. 檢測(cè) 1 種有害(或無(wú)益)菌： Clostridium perfri nge ns(三) 測(cè)定方法：1. 腸內(nèi)細(xì)菌菌相(1)材料a. 大白鼠：雄性 Spraguae Dawley (SD)或 Wistar系統(tǒng)大白鼠之盲腸或糞便。b. 人體糞便。Bifidobacteria

16、 iodoacetate medium-25 （ BIM-25）MPN mediuma.雙叉桿菌(Bifidobacteria )參考培養(yǎng)基：(a)Beere ns medium(b)(c)參考培養(yǎng)基agar(維持厭氧狀態(tài))，再於厭氧操作箱b.產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringensTryp tose-sulfite-D-cycloseri ne（ TSC）有關(guān)製備請(qǐng)參考各相關(guān)參考文獻(xiàn)。(2)方法取樣及均質(zhì)(a)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：以按摩方式收集糞便於密閉容器內(nèi)內(nèi)秤取約0.5 g，加入含4.5 mL無(wú)菌厭氧稀釋液(附註)之試管中(內(nèi)含5粒玻璃 珠)，以試管震盪器混合。(a) -1大白

17、鼠經(jīng)餵養(yǎng)試驗(yàn)後，麻醉，解剖，在厭氧狀況取出盲腸(cecum )內(nèi)容物，秤取約1 g,加入含9 mL無(wú)菌厭氧稀釋液之試管中(內(nèi)含 5粒玻璃珠)，以試管震 盪器混合。(b) 人體試驗(yàn)：收集糞便於密閉容器內(nèi)(維持厭氧狀態(tài))，再於厭氧操作箱內(nèi)，進(jìn)行如 同上述大白鼠樣品之秤重及均質(zhì)操作。稀釋及微生物平板分析於厭氧狀況下，上述均質(zhì)液以厭氧稀釋液進(jìn)行一系列十倍稀釋。取適當(dāng)稀釋倍數(shù)， 以表面塗抹法(spread Plate method )或混稀平板法(pour plate method )加入雙 叉桿菌培養(yǎng)基中，置於厭氧操作箱或厭氧缸中(內(nèi)含厭氧包，或抽氣維持厭氧狀態(tài))， 於3537oC培養(yǎng)，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。至

18、於產(chǎn)氣莢膜梭菌之計(jì)數(shù)，請(qǐng)依照美國(guó)FDA發(fā)行的Bacteriological Analytical Manual (BAM)。統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)變異數(shù)分析(Analysis of varianee ANOVA )測(cè)試各實(shí)驗(yàn)組間是否有 差異，若有差異再以鄧肯氏多變?cè)囼?yàn)(Duncan，s multiple range test )作進(jìn)一步分 析，以決定各實(shí)驗(yàn)組在95%可信度內(nèi)是否有差異。結(jié)果判定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：若盲腸或糞便的bifidobacteria明顯增加，以及Clostridium perfringens 減少或無(wú)明顯變化者，則稱(chēng)之具改善腸內(nèi)細(xì)菌相功能。人體試驗(yàn)：若bifidobacteria明

19、顯增加，以及 Clostridium perfringens 減少或無(wú)明顯 變化者，則稱(chēng)之具改善腸內(nèi)細(xì)菌相功能。附註：厭氧稀釋液之製備如下：0.2 g50 mLGelat inDistilled waterSalts solution （如 2.1.3 中 salts solution 配方）50 mLResazurin solution （25 mg/100 mL H 2O）0.4 mL將各成分混合，煮沸，冷卻，再加入 0.05 g cysteine，'以厭氧操作分裝入 試管中，每一試管裝9 mL,以121 oC殺菌15 min，殺菌完成或?qū)嶒?yàn)過(guò)程 呈粉紅色，請(qǐng)勿使用。四、幫助（改善

20、）胃腸運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)腸道正常機(jī)能之維持（一）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：1. 胃腸運(yùn)動(dòng)（活性碳、腸鋇計(jì)檢查或核子醫(yī)學(xué)檢查）2. 胃黏膜保護(hù)3. 觀察糞便之乾重、粒數(shù)、水分及形狀（二）人體實(shí)驗(yàn)：1. 腸運(yùn)動(dòng)（腸鋇計(jì)檢查或核子醫(yī)學(xué)檢查）2. 觀察排便時(shí)間，糞便重量、水分及形狀及排便感覺(jué)之變化。（三）檢查方法胃腸運(yùn)動(dòng)測(cè)定：（a）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1. 離體實(shí)驗(yàn)：擷取絕食老鼠之胃或腸片段約1-2cm，放於組織?。╫rganbath）中並通氣之（95%O2，5%CO2），放置2hr使其穩(wěn)定而後做等長(zhǎng) 收縮（0.5-1 gm），視測(cè)試食品對(duì)於胃或腸片段之收縮情況，若實(shí)驗(yàn)組明 顯優(yōu)於控制組（pv0.05），即可判定，即可判定測(cè)試食品具有改

21、善胃腸運(yùn) 動(dòng)之功能。2. 活體實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物配置的灌胃溶液灌食（含有 10%活性碳及測(cè)試物）。而後 追蹤計(jì)算排空率，活性碳則以黑色易觀察之特性作為胃腸排空之另一指標(biāo)。30分鐘後，大白鼠去頭犧牲，隨後剪開(kāi)腹腔以線綁住賁門(mén)處，將胃、 小腸完整取出，計(jì)算胃腸排空率，方法如下：charcoal markerX100%Charcoal Tran sit =In testi nal le ngth（b）人體實(shí)驗(yàn)1. 核子醫(yī)學(xué)檢查：目前只使用於gastric emptying study讓病人服下含有放射源（Tc-99m and In-i11）的固體及液體食物 測(cè)量病人90分後的胃排空率2. 放射線科檢查:小腸

22、排空速度檢測(cè)請(qǐng)病人喝下600 cc鋇鹽（barium salt ）後，隔15分透視一次，直到鋇鹽完全排出迴腸辮（ileocecal valve ）。（四）結(jié)果判定：糞便重量或粒數(shù)明顯增加，再加上胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)或排便時(shí)間中有任何一項(xiàng)結(jié) 果為實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)於控制組（p<0.05），即可判定測(cè)試食品具有潤(rùn)腸通便之功能。五、有助於胃黏膜之保護(hù)作用，維持腸道正常機(jī)能（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1. 離體實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)鼠胃黏膜細(xì)胞，先將測(cè)試物至於胃黏膜細(xì)胞內(nèi)，培養(yǎng)2 小時(shí)，而後置入酸性培養(yǎng)液（ pH=4 ）或含 indomethacin 之培養(yǎng)液下。測(cè)定胃黏膜細(xì) 胞之存活率（ viability ）的變化（ MTT a

23、ssay ），若實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)於控制組 （p<0.05 ），即可判定測(cè)試食品具有保護(hù)作用之功能。2.活體實(shí)驗(yàn)：胃酸的分泌測(cè)定： Shay 潰瘍法 （Shay 's ulcer ） 雄性實(shí)驗(yàn)絕食老鼠 （24 小時(shí)），胃部幽門(mén)結(jié)紮，再予以縫合復(fù)原，俟 4 小時(shí)候， 將其犧牲取出胃部，收集胃液並定量胃液體積，並以 0.1N NaOH 溶液滴定， 求其實(shí)驗(yàn)組及控制組之總酸度之變化若pvO.05 ,即可判定測(cè)試食品具有胃黏膜保護(hù)作用之功能。（二）結(jié)果判定：任何一項(xiàng)結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)於控制組（p<0.05），即可判定測(cè)試食品具 有幫助胃黏膜保護(hù)之功能。六、減少胃內(nèi)幽門(mén)螺旋桿菌（一）受試者

24、的篩選1. 志願(yuàn)參與者先填寫(xiě)一份問(wèn)卷，包括個(gè)人飲食、生理習(xí)慣及健康狀況（含是否有慢性病，需要隨時(shí)服藥等） 。2. 體檢，包括醫(yī)生問(wèn)診、體位測(cè)驗(yàn)、及血液生化檢查（含血紅素、血球比容、血糖、血 脂肪、肝功能及腎功能） 。3. 依據(jù)前兩項(xiàng)的資料，篩去習(xí)慣特異及健康不良的參與者。然後填寫(xiě)志願(yuàn)書(shū)，進(jìn)行尿素 呼氣試驗(yàn)（urea breath test ）,以得 13CO2 /12CO2 比值（即 UBT 值）。就 UBT 值決定受試對(duì)象（建議 UBT > 10 % O者）。（二）實(shí)驗(yàn)方法1. 受試者在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前三週每四天測(cè)一次 UBT值，以觀察其日常飲 食是否影響該值； 並計(jì)算其平均值，以作為實(shí)驗(yàn)開(kāi)

25、始後的比較。2. 每位受試者於實(shí)驗(yàn)前必須接受飲食指導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前須經(jīng) 23週之穩(wěn)定期，於穩(wěn)定期 間應(yīng)按其個(gè)人之原飲食習(xí)慣攝食，並避免暴飲暴食或其他特殊食物之?dāng)z取，且亦不可 服用整腸健胃藥物、補(bǔ)充劑、抗生素、組織胺 -2 拮抗劑、抗氧化劑、強(qiáng)調(diào)整腸健胃的 機(jī)能性食品，或其他不明藥物等。並於該其間進(jìn)行幽門(mén)螺旋桿菌之測(cè)試，而獲得至少 最後之 3 次為近似恆定值，其平均值作為實(shí)驗(yàn)之起始值（ initial value ）。3. 實(shí)驗(yàn)期間（最少二週）的飲食按上述穩(wěn)定期間之條件進(jìn)食，且加食試驗(yàn)品穩(wěn)定與實(shí)驗(yàn)期間定期測(cè)量其 UBT值、血液生化檢查、體檢、與問(wèn)卷調(diào)查，以瞭 解其實(shí)驗(yàn)期間健康情形及身體的感覺(jué)。4.

26、 UBT值測(cè)定：受試者在受試前一天晚上 10點(diǎn)以後禁食，次晨刷牙、漱口，靜坐 5 分鐘後飲用 200 mL 的0.1 N 檸檬酸溶液，漱口、靜坐 10 分鐘後，吹氣至 2支10 mL 的氣體收集管。再靜坐 5 分鐘後飲用 50 mL 含 13C 標(biāo)識(shí)的尿素（ 50 mg ）溶液，再漱口、靜坐1020分鐘後，吹氣至2支10 mL的氣體收集管。所收集的氣體以isotope ratio mass spectrometer （IRMS）分析其 UBT 值。三）結(jié)果判定1. 若受試者之 UBT值於實(shí)驗(yàn)後比實(shí)驗(yàn)前有明顯（P V 0.05）降低，則表示該試驗(yàn)品具 有減少幽門(mén)螺旋桿菌之生理功能。2. 經(jīng)體檢及

27、問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果，若於實(shí)驗(yàn)期間及實(shí)驗(yàn)後一週沒(méi)有明顯不舒服的感覺(jué)或其他健 康問(wèn)題，特別是腸胃道問(wèn)題，則可判斷該試驗(yàn)品沒(méi)有安全上的問(wèn)題。參考文獻(xiàn)1.Mu? oa, F. J. and Pares, R. (1988) Selective medium for isolation and enumeration of Bifidobacterium spp. Appl. Environ. Microbiol. 54: 1715 - 1718.2. Tanaka, R. and Mutai, M. (1980) Improved medium for selective isolation and enu

28、meration of Bifidobacterium. Appl. Environ. Microbiol. 40: 866-869.”. 7th edi3. FDA. 1992. Clostridium perfringens. In“ Bacteriological Analytical ManualChap. 16. pp.209-214. U.S. Food and Drug Administration. Washington, DC.4.Ishibashi, N. and Shimamura, S. (1993) Bifidobacteria: Research and devel

29、opment in Japan. Food Tech. 47(6): 126-135.5. Mitsuoka, T. (1978) Intestinal Bacteria and Health . Harcourt Brace Jovanovich Japan Inc. Tokyo.6. Hoover, D. G.(1993) Bifidobacteria: Activity and pontential benefits. Food Tech. 47(6): 120-124.7. Robison,C. H., Lawler, M. R., Wanda, L. C. and Garwick,

30、A. E. (1990) Normal and Therapeutic Nutrition 17th edition . Macmillan Publishing Company, NY.8. Miller, M. S., Galligan, J. J. and Burks, T. F. (1981) Accurate measurement of intestinaltransit in the rat. J. Pharmacol. Meth. 6: 211-217.9. Holtze, P. (1985) Stimulation and inhibition of gastrointest

31、inal propulsion induced by substance P and substance K in the rat. Br. J. Pharmacol. 86: 305-312.10. Green, A. F. (1959) Comparative efffects of analgesics on pain threshold,respiratory frequency and gastrointestinal propulsion. Br. J. Pharmacol. 14: 26-34.11. Takagi, K. and Okabc, S. (1968) The eff

32、ect of drugs on the production and recovery processes of the stress ulcer. Japan. J. Pharmacol. 18: 9-18.12.Shay, H., Komarov, S. A., Fels, S., Meranxe, S., Gruenstein, D. and Siplet, H. (1945) A simple method for the uniform production of gastric ulceration in the rat. Gastroenteroloty 5: 43-61.13.

33、 Takagi, K., Okabc, S. and Saziki, R. (1969) A new method for the production of chronic gastric ulcer in rats and the effect of several drugs on its healing. Japan. J.Pharmacol. 19: 418-426.14. Waisman, G., Dinari, G., Marcus, H., Ligumsky, M., Rosenbach, Y ., Zahavi,I. and Nitzan, M. (1985) Naloxon

34、e is protective against indomethacin-induced intestinal ulceration in the rat. Gastroenteroloty 89: 86-91.15. McNeely MDD (1996) Gastrointectinal function a digestive disease. In Clinical Chemistry, Pesce, A.J., Kaplan, L.A., editors, Pesce Kaplan Publishers.16.Sleisenger MH, Fordtran JS (1993) Gast

35、rintertinal disease vol.2, P 1593-1594, W.B. Saunders Compary.17. Brandt LJ (1999) Clinical practice of Gastroenterrlopy, Vol.2, P 1190, Churchill livingstone compary.18. Dahlqvist, A.(1964) Method for assay of intestinal disaccharidase. Anal. Biochem. 7: 18-25.19. Peterson, G.L.(1977) A simplificat

36、ion of the protein assay method of Lowry et al.which is more generally applicable. Anal. Biochem.83:346-356.20. Verduin, P.A., Punt, J.M., Kreutzer, H.H. (1973) Studies of the determination of lipase activity. Clin. Chim. Acta 46:11-19.21. Martinek, P.G., Berger, L., Broidda, D. (1964) Simplified es

37、timation of leucine aminopeptidase (LAP) activity. Clin. Chem. 10: 1087-1097.22. Massion,C.G., McNeely, M.D. (1973) Accurate micromethod for estimation of both medium-and long-chain fatty acids and triglycerides in fecal fat. Clin. Chem. 19: 499-505.23. Benson, J. A., Culver, P.J., Ragland, S., Jones, C.M., Drummey, G.D., Bougas,E (1957) The