Agilent1260高效液相色譜儀操作規(guī)程

1、四川中安檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書Agilent1260高效液相色譜儀操作規(guī)程文件編號(hào)ZAJC-3T-001批 準(zhǔn) 人批準(zhǔn)日期編 制 人編制日期 正確使用儀器，確保化驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度，延長(zhǎng)儀器使用壽命。適用于Agilent1260高效液相色譜儀及色譜數(shù)據(jù)工作站的操作。：按照本操作規(guī)程操作儀器，對(duì)儀器進(jìn)行自檢，作使用登記。      負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)監(jiān)督儀器操作是否符合規(guī)程，對(duì)儀器進(jìn)行定期自檢、儀器綜合管理。  按要求準(zhǔn)備所需流動(dòng)相，每瓶均超聲10min排氣，將原來(lái)浸泡在甲醇中的濾頭取出對(duì)應(yīng)放在各個(gè)流動(dòng)相中（A：二次蒸餾水；D:緩沖溶液

2、；B:色譜純甲醇C：色譜純乙腈）。 打開計(jì)算機(jī)電源，登陸 windows 操作系統(tǒng)。 打開 Agilent 1260 各模塊電源，待 Agilent 1260 各模塊自檢完成后(各模塊右上角指示燈為黃色或者無(wú)色)，點(diǎn)擊屏幕桌面圖標(biāo)“HPLC -1260（聯(lián)機(jī)）”，則進(jìn)入工作界面。模塊右上角狀態(tài)燈顏色說(shuō)明：無(wú)色：未開電源或者模塊準(zhǔn)備就緒； 黃色：模塊未準(zhǔn)備就；綠色：正在進(jìn)樣分析 ；紅色：模塊出錯(cuò)；所有模塊紅色：儀器有漏液工作站圖形顏色說(shuō)明：綠色：模塊準(zhǔn)備就緒；黃色：模塊未準(zhǔn)備就緒；藍(lán)色：正在進(jìn)樣分析；紅色：出錯(cuò)或者不能聯(lián)機(jī)；灰色：此模塊沒(méi)啟用。將鼠標(biāo)移至系統(tǒng)或各個(gè)模塊的狀態(tài)指示欄 ，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)顯

3、示未就緒或出錯(cuò)的原因。 反時(shí)針旋開泵模塊上的溶液排空閥 ，右鍵單擊泵視圖的空白處，選擇“方法”，設(shè)置“流速”為 5ml/min。將實(shí)驗(yàn)中需要的各個(gè)通道分別設(shè)置“溶劑”為 100%，點(diǎn)擊確定開始沖洗，每個(gè)通道沖洗3-5分鐘，若沖洗通道時(shí)壓力顯示超過(guò)10 bar，則可換過(guò)濾白頭。 沖洗完柱子，按要求調(diào)整流動(dòng)相速率及流動(dòng)相比例，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)排空閥，關(guān)閉溶液排空閥(確認(rèn)泵流量為 1ml/min)，然后右鍵點(diǎn)擊需用檢測(cè)器模塊視圖的空白處，選擇“方法”進(jìn)入檢測(cè)器的參數(shù)設(shè)置界面，按要求設(shè)置參數(shù)（停止時(shí)間與泵一致），后點(diǎn)擊右鍵，選擇“控制”，在彈出的窗口選擇打開，開始平衡柱子，監(jiān)視信號(hào)基線和壓力，等待平穩(wěn)后即可

4、進(jìn)樣（若用緩沖溶液和有機(jī)相作為流動(dòng)相，先用水和有機(jī)相平衡30 min，比例與所要求的緩沖溶液和有機(jī)相比例一致），待基線平穩(wěn)后換用所要求的緩沖溶液和有機(jī)相按比例混合平衡柱子30 min）。 將編輯好的方法保存起來(lái)。 在每個(gè)樣品進(jìn)樣前，從“運(yùn)行控制”菜單中點(diǎn)擊“樣品信息”，編輯好數(shù)據(jù)的保存路徑。進(jìn)樣時(shí)，逆時(shí)針旋動(dòng)進(jìn)樣器六通閥旋鈕，進(jìn)樣完畢立即順時(shí)針旋回該旋鈕，并拔出進(jìn)樣針，妥善放置。 點(diǎn)擊屏幕桌面圖標(biāo)“HPLC-1260（脫機(jī)）”。從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號(hào)”選項(xiàng)，選中您的數(shù)據(jù)文件名，點(diǎn)擊確定，數(shù)據(jù)被調(diào)出。從“圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)”，設(shè)置信號(hào)包括的信息，從“范圍”中選擇“滿量程”或“自動(dòng)

5、量程”及合適的顯示時(shí)間或選擇“ 自定義量程”手動(dòng)輸入 X、Y 坐標(biāo)范圍進(jìn)行調(diào)整，點(diǎn)擊“確定”。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的顯示比例合適為止。 從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度”，“峰寬”，“最小峰面積”，“最小峰高”。從“積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。后將積分參數(shù)存入方法，最后，選擇“方法->保存方法/方法另存為”或直接保存數(shù)據(jù)分析方法。 選擇“積分->積分事件”，選擇“手動(dòng)積分事件” ，如需更改，更改自動(dòng)積分方法后，保存并關(guān)閉“積分事件”。選擇“積分->更新方法中的手動(dòng)積分事件”，保存手動(dòng)

6、積分方法；選擇“積分->應(yīng)用方法中的手動(dòng)積分事件”，將手動(dòng)積分方法應(yīng)用到當(dāng)前譜圖中；選擇“積分->刪除方法中的手動(dòng)積分事件”，將從當(dāng)前方法中刪除手動(dòng)積分事件。最后，選擇“方法->保存方法/方法另存為”或者直接保存數(shù)據(jù)分析方法。 為“標(biāo)準(zhǔn)樣品”建立校正曲線(工作曲線/標(biāo)準(zhǔn)曲線)，在色譜圖正確積分后才可進(jìn)行校正設(shè)置。 從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號(hào)”選項(xiàng)，選中您的標(biāo)樣數(shù)據(jù)文件名，點(diǎn)擊確定，數(shù)據(jù)被調(diào)出。選擇“校正->校正設(shè)置”設(shè)置校正參數(shù)。參考峰/其他峰-分鐘欄留空，修改“%”以改變確認(rèn)保留時(shí)間范圍內(nèi)的峰都被認(rèn)為是參考/其他峰含量單位-填寫樣品含量單位選擇缺省校正曲線方法，“

7、確定”退出。 選擇“校正->新建校正表”。出現(xiàn)“新建校正表”菜單，“確定”即可。出現(xiàn)“校正表”表格，在圖譜中選擇需要校正的色譜峰，后在表格中“化合物”中填寫化合物名稱，“含量”中填寫色譜峰對(duì)應(yīng)物質(zhì)含量。右側(cè)“校正曲線”即可實(shí)時(shí)更新校正曲線圖，并標(biāo)注 RSD 和相關(guān)系數(shù)?！按_定”保存退出。最后，選擇“方法->保存方法/方法另存為”或者直接保存數(shù)據(jù)分析方法。調(diào)用新的標(biāo)樣數(shù)據(jù)文件后，選擇“校正->添加級(jí)別” ，點(diǎn)擊“確定”，在校正表中輸入相應(yīng)的標(biāo)樣濃度，點(diǎn)擊“確定”，右側(cè)校正曲線窗口則會(huì)自動(dòng)更新。 選擇“報(bào)告->設(shè)定報(bào)告”，在“定量設(shè)置”中的計(jì)算模式一欄選定“外標(biāo)法”，“報(bào)告

8、設(shè)置”為“完整報(bào)告”后，打印報(bào)告即可在“視圖->信號(hào)選項(xiàng)”中選擇“化合物名稱”即可將命名的化合物名稱添加到打印的色譜圖中。 選擇“報(bào)告->設(shè)定報(bào)告”選項(xiàng)，點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“定量”右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法”，其它選項(xiàng)不變。選擇“類型”，點(diǎn)擊“確定”。從“報(bào)告”菜單中選擇“打印”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上。如想輸出到打印機(jī)上，則在上圖中左下角“目標(biāo)”處，將打印機(jī)選上。若要生成其他格式的報(bào)告，則選定“文件”，然后選擇相應(yīng)的格式即可。在方法菜單中，選擇“運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”，確認(rèn)“數(shù)據(jù)分析選項(xiàng)”也被選中，點(diǎn)擊“確定”。點(diǎn)擊“保存”按鈕，存儲(chǔ)修改的方法。此方法包含校準(zhǔn)表，建立完畢。關(guān)閉紫外檢

9、測(cè)器，關(guān)閉檢測(cè)器的燈后沖洗系統(tǒng)，可以延長(zhǎng)檢測(cè)器燈的壽命。 沒(méi)有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用 85%90%有機(jī)相+15%10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱或者適宜的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱；有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用 85%90%水相+15%10%有機(jī)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱(反相系統(tǒng))30min，除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液，然后用85%90%有機(jī)相+15%10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱30min。 (反相系統(tǒng))用 90%95%有機(jī)相+10%5%水相封存反相色譜柱，兩端封死。（如長(zhǎng)時(shí)間存放可將柱子完全浸泡有機(jī)相內(nèi)，以防用純有機(jī)相封存反相色譜柱，如果長(zhǎng)期保存有機(jī)相會(huì)揮發(fā)）。 將泵流

10、速逐步降至 0ml/min，單擊“關(guān)閉”按鈕關(guān)閉所有模塊，退出化學(xué)工作站，關(guān)閉電腦。關(guān)閉所有模塊電源。4.7.6 沖洗六通閥上下反復(fù)旋動(dòng)六通閥旋鈕，用注射器注射去離子水進(jìn)行反復(fù)沖洗，沖洗完畢后將旋鈕旋至分析（inject）標(biāo)志處，用空閑針頭堵住進(jìn)樣口并蓋上紅色保護(hù)蓋。5.1 日常維護(hù)為了儀器的合理運(yùn)轉(zhuǎn)及延長(zhǎng)其使用壽命，應(yīng)該將儀器放置在平穩(wěn)固定的臺(tái)面上，要求臺(tái)面無(wú)振動(dòng)，周圍無(wú)輻射和磁場(chǎng)。另外，因?yàn)榱鲃?dòng)相大多數(shù)是有機(jī)溶劑，還要保持室內(nèi)有一些排風(fēng)扇等通風(fēng)換氣的設(shè)備。 首先檢查檢測(cè)使用的流動(dòng)相以及色譜柱是否準(zhǔn)確無(wú)誤，然后再打開儀器的穩(wěn)定電源，然后再開輸液泵，柱箱。設(shè)置好色譜柱的最大保護(hù)柱壓，進(jìn)行排氣工

11、作，并確保流路時(shí)不會(huì)有氣泡。而流速不可操之過(guò)急，應(yīng)該從小到大一點(diǎn)點(diǎn)地加速，這樣是為了更好地保護(hù)色譜柱。 注意不要把溶劑瓶放在光線強(qiáng)烈的地方，盡量使用琥珀色的溶劑瓶放置。還可以在色譜柱前加上保護(hù)柱，從而避免色譜柱的污染，進(jìn)而延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。5.1.4.1實(shí)驗(yàn)完成后，首先關(guān)閉檢測(cè)器，保證燈的有效使用年限。5.1.4.2沒(méi)有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用 85%90%有機(jī)相+15%10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。5.1.4.3有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用 85%90%水相+15%10%有機(jī)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱(反相系統(tǒng))30min，除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液，然后用85%90%有機(jī)相+15%10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱30min。5.1.4.4泵的流速應(yīng)慢速減小到0時(shí)，才可以關(guān)閉泵和穩(wěn)壓器。反相系統(tǒng)用9095有機(jī)相+105水相封存反相色譜柱。流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌）。流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，可用超聲波振蕩10-15