大腸桿菌生長曲線實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目大腸桿菌生長曲線的測定實(shí)驗(yàn)時(shí)間實(shí)驗(yàn)室生化樓327小組成員1. 通過對大腸桿菌生長曲線的測定，了解細(xì)菌生長的特點(diǎn)，綜合訓(xùn)練微生物實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)技能。2. 鞏固培養(yǎng)基的配制、滅菌、儀器的包扎、倒平板。3. 掌握用比濁法測定細(xì)菌的生長曲線。二.實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)流程或裝置示意圖將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一定時(shí)間測定培養(yǎng)液中 的菌量，以菌量的數(shù)量作縱坐標(biāo)，生長時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長曲線。它反映了單細(xì)胞微生物在一定 環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長規(guī)律。依據(jù)其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、 生長期、穩(wěn)定

2、期和衰亡期。將每一種一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延 遲期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。般為1延遲期：又叫調(diào)整期。細(xì)菌接種至培養(yǎng)基后，對新環(huán)境有一個(gè)短暫適應(yīng)過程（不適應(yīng)者可因轉(zhuǎn)種而死亡）。 此期曲線平坦穩(wěn)定，因?yàn)榧?xì)菌繁殖極少延遲期長短因素種、接種菌量、菌齡以及營養(yǎng)物質(zhì)等不同而異， 4小時(shí)。此期中細(xì)菌體積增大，代謝活躍，為細(xì)菌的分裂增殖合成、儲(chǔ)備充足的酶、能量及中間代謝產(chǎn)物。 對數(shù)生長期：又稱指數(shù)期。此期生長曲線上活菌數(shù)直線上升。細(xì)菌以穩(wěn)定的幾何級數(shù)極快增長，可持續(xù)幾 小時(shí)至幾天不等（視培養(yǎng)條件及細(xì)菌代時(shí)而異）。此期細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活性都很典型，對外界

3、環(huán)境因素 的作用敏感，因此研究細(xì)菌性狀以此期細(xì)菌最好?？股刈饔?，對該時(shí)期的細(xì)菌效果最佳。穩(wěn)定期：該期的生長菌群總數(shù)處于平坦階段，但細(xì)菌群體活力變化較大細(xì)菌濃度達(dá)到最大即環(huán)境最大容納量。由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗、毒性產(chǎn)物（有機(jī)酸、過氧化物等）積累PH下降等不利因素的影響，細(xì)菌繁殖速度漸趨下降，相對細(xì)菌死亡數(shù)開始逐漸增加，此期細(xì)菌增殖數(shù)與死亡數(shù)漸趨平衡。細(xì)菌形態(tài)、染色、生物活 性可出現(xiàn)改變，并產(chǎn)生相應(yīng)的代謝產(chǎn)物如外毒素、內(nèi)毒素、抗生素、以及芽孢等。衰亡期：隨著穩(wěn)定期發(fā)展，細(xì)菌繁殖越來越慢，死亡菌數(shù)明顯增多。活菌數(shù)與培養(yǎng)時(shí)間呈反比關(guān)系，此期 細(xì)菌變長腫脹或畸形衰變，甚至菌體自溶，難以辯認(rèn)其形。生理

4、代謝活動(dòng)趨于停滯。故陳舊培養(yǎng)物上難以鑒別 細(xì)菌。體內(nèi)及自然界細(xì)菌的生長繁殖受機(jī)體免疫因素和環(huán)境因素的多方面影響，不會(huì)出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典型的 生長曲線。掌握細(xì)菌生長規(guī)律，可有目的地研究控制病原菌的生長，發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對人類有用的細(xì)菌。這4個(gè)時(shí)期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所不同。因此通過測定微生物的生長曲 線，可了解個(gè)菌的生長規(guī)律，對于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。測定微生物的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實(shí)驗(yàn)室條件選用。本實(shí)驗(yàn)用比濁法測定，由于細(xì)菌懸 液的濃度與光密度（0D值）成正比，因此可利用分光光度計(jì)測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測 的0D直與其對應(yīng)的培

5、養(yǎng)時(shí)間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線，此法快捷、簡單。三.實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料大腸桿菌斜面菌種、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、生理鹽水（NaCD 50mL 721型分光光度計(jì)、比色皿、恒溫?fù)u床、培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電子天平、酒精燈、電爐、接種環(huán)、試管架、錐形瓶15個(gè)（250mL）、無菌吸管、燒杯（lOOOmL）、 乳膠頭、報(bào)紙、膠塞、玻璃棒等四.實(shí)驗(yàn)方法步驟及注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)步驟：配制營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)一測定一繪制生長曲線1. 配制營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：用電子天平稱取14.4g營養(yǎng)肉湯粉末置于lOOOmL燒杯中，加水至800mL用電爐加熱（加熱過程中要用玻璃棒不斷攪拌 ）至沸騰后，冷卻少許

6、后分別倒進(jìn)15個(gè)錐形瓶中，每個(gè)錐 形瓶倒50mL塞上膠塞，用報(bào)紙包好，棉繩系好。2. 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基滅菌：將步驟一包好的培養(yǎng)基置于高壓蒸汽滅菌鍋121 C滅菌30min.3. 配制大腸桿菌菌液：取大腸桿菌斜面菌種一支，在酒精燈火焰上方操作，用接種環(huán)刮取少量菌苔于約理鹽水中，充分震蕩均勻。將15個(gè)錐形瓶進(jìn)行標(biāo)記，分別標(biāo)號(hào)配制大腸桿菌菌液50mL 生4. 標(biāo)記5. 接種6. 培養(yǎng)1、2、314、15.用1mL無菌移液管分別移取 1mL大腸桿菌菌液到已編號(hào)的 15個(gè)錐形瓶中，并充分震蕩均勻.將錐形瓶置于37C下在恒溫?fù)u床上培養(yǎng)（150r/min ）。然后分別按對應(yīng)時(shí)間將錐形瓶取出，待培養(yǎng)結(jié)束 時(shí)測定

7、OD值。7. 測定：將培養(yǎng)的大腸菌群菌液用無菌移液管移取到比色皿中，選用600nm分光光度計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)，用蒸餾水作為空白對照，并對不同時(shí)間培養(yǎng)液從0起依次進(jìn)行測定，對濃度大的菌懸液用自來水適當(dāng)稀釋后測定，使其OD直在之間，經(jīng)稀釋后測得的OD值要乘于稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實(shí)際的8. 繪制生長曲線：對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行生長曲線的繪制，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。0D直。五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法與原始記錄 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法：以時(shí)間為橫坐標(biāo)，ODOo為縱坐標(biāo)，用excel繪制大腸桿菌的生長曲線，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)原始記錄：123456178（3 倍）9（4 倍）12:0013:0015:4518:0019:0020:002

8、0:3021:0022:00OD600 1OD600 2OD600 3平均10（4 倍）11（4 倍）12（4 倍）13（5 倍）14（5 倍）15（5 倍）5（6 倍）6（6 倍）23:0000:001:002:006:208:3011:0012:00OD600 1OD600 2OD600 3平均隨時(shí)間的變化大腸桿菌液吸光度的數(shù)據(jù)（括號(hào)內(nèi)數(shù)字表示稀釋倍數(shù)）時(shí)間/h0167811 910OD6bo時(shí)間/h111213142324OD6bo修正前的大腸桿菌的生長曲線圖修正后的大腸桿菌的生長曲線圖修正前的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)時(shí)間/h016789101113OD6b0修正后的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)時(shí)間

9、/h0167891011OD6b0前12小時(shí)的大腸桿菌的吸光度數(shù)據(jù)六.參考文獻(xiàn)1.2.3 .4 .前12小時(shí)的大腸桿菌的生長曲線圖牛天貴.食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù).第1版.北京：科學(xué)出版社，2010. 楊革.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.第2版.北京：科學(xué)出版社，2010.何國慶，賈英民，丁立孝等.食品微生物學(xué).第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2009. 周德慶，胡寶龍.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.第2版.北京：高等教育出版社，2006.七.教師對實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的意見簽名:二、實(shí)驗(yàn)報(bào)告20對象驗(yàn)現(xiàn)象、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析及其結(jié)論0。分著培養(yǎng)時(shí)間的增加，培養(yǎng)基里的液體變得越來越混濁，所散發(fā)出來的味道也越來越濃，味道很難聞。 實(shí)

10、驗(yàn)結(jié)果隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，培養(yǎng)基里的液體變得越來越混濁，所散發(fā)出來的味道也越來越濃，味道養(yǎng)和空間腸桿菌進(jìn)行營養(yǎng)和空間的死亡，最后數(shù)量不斷菌死亡，直最后數(shù)量不斷減少。直至變?yōu)橥ㄟ^對大腸桿菌生長曲線的測定，了解了細(xì)菌生長的特點(diǎn)，是：剛開始時(shí)細(xì)菌緩慢增長，后來增 長迅速，呈“ J ”型，最后細(xì)菌生長緩慢，數(shù)量達(dá)到頂峰，在一段時(shí)間內(nèi)保持不變。因?qū)嶒?yàn)測量的時(shí)間不夠合理等各種因素，因此用原始數(shù)據(jù)繪制出來的大腸桿菌的生長曲線圖不夠有 規(guī)律，經(jīng)修正后生長曲線比較好。結(jié)論:細(xì)菌的生長曲線分為延緩期、生長期、穩(wěn)定期和衰亡期。體內(nèi)及自然界細(xì)菌的生長繁殖受機(jī)體 免疫因素和環(huán)境因素的多方面影響，不會(huì)出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典

11、型的生長曲線。掌握細(xì)菌生長 規(guī)律，可有目的地研究控制病原菌的生長，發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對人類有用的細(xì)菌。這4個(gè)時(shí)期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所不同。因此通過測定微生 物的生長曲線，可了解細(xì)菌的生長規(guī)律，對于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。實(shí)驗(yàn)總結(jié)1.本次實(shí)驗(yàn)成敗及其原因分析總的來說，本實(shí)驗(yàn)算是成功的。在一定程度生探討出了大腸桿菌生長曲線的測定。通過此次試實(shí)驗(yàn), 了解了細(xì)菌生長的特點(diǎn)，綜合訓(xùn)練了微生物實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)技能。鞏固培養(yǎng)基的配制、滅菌、儀器的包 扎、倒平板。在一定程度上掌握了用比濁法測定細(xì)菌的生長曲線的方法。但有兩點(diǎn)不足：一是一開始忽略了 0D直必須在 之間才有效；二是時(shí)間的

12、間隔不太合理，開始的階段應(yīng) 該時(shí)間安排緊密一點(diǎn)，還有晚上的一段數(shù)據(jù)沒有測，實(shí)驗(yàn)時(shí)間不夠長，延遲期和衰亡期曲線不明顯。實(shí) 驗(yàn)中若能考慮全面，這樣測出來的數(shù)據(jù)才更有代表性，更加準(zhǔn)確。2.本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及改進(jìn)措施本試驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有以下四點(diǎn)整個(gè)過程最好是在無菌操作臺(tái)上操作，這樣培養(yǎng)基受空氣中微生物的影響就較小，同時(shí)也可以減少污染，保證培養(yǎng)基里大腸桿菌純度較高，否則會(huì)在一定程度上影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。形瓶，用無菌移液管移取少量，操作要快，先進(jìn)行預(yù)測, 進(jìn)行稀釋后再測量。每隔半小時(shí)或一個(gè)小時(shí)（測量時(shí)間要安排合理， 時(shí)間要控制好：在實(shí)驗(yàn)初期30min對菌懸液進(jìn)行一次測 定。實(shí)驗(yàn)中期每小時(shí)測一次，后期12小時(shí)測定一次，依次持續(xù)到20小時(shí)后。）從恒溫?fù)u床取出錐0D直應(yīng)在 之間，如果超過這個(gè)范圍則需要測量時(shí)要等數(shù)字變化不大時(shí)再讀取，可以讀三次，最后取平均值，這樣能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確。72