酶活力計(jì)算公式

1、固態(tài)發(fā)酵漆酶活性測(cè)定 :酶液制取:5g發(fā)酵樣品以1:20(W/ V)比例用蒸餾水懸浮，2 0 0 r/m in搖3h, 之后5000 r/min離心2 0m in.(上清用0、45濾紙過(guò)濾，于2 0°C保存濾液， 取能整除得濾液體積用于漆酶活性測(cè)定。 )酶活反應(yīng)體系3、0mL(2、3mL 0、2 mol/L醋酸醋酸鈉緩沖液；pH = 4> 50、5mL粗酶液稀釋液;0、2 mLlmmol / L得 ABTS)420nm處測(cè)定吸光值得變化。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵漆酶活性計(jì)算公式：N:酶液稀釋倍數(shù)V 總： 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系得終體積( mL)V 酶: 反應(yīng)添加得酶液體積( mL) OD

2、 420： t時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在42 0 nm處吸光度得增加值36 0 00: 420 nm處ABTS氧化態(tài)得摩爾吸光系數(shù)(L/m o l cm )T:反應(yīng)時(shí)間(mi n)L為比色皿得直徑(c m) o1 0 0mL/(0、5m LX 5g ):固態(tài)變成液態(tài)得稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵漆酶活性測(cè)定:酶活反應(yīng)體系3、0mL(2、3mL 0、2mo l /L醋酸一醋酸鈉緩沖液；p H= 4、50、5m L粗酶液稀釋液；0、2mL 1mmol/ L得A BTS)N:酶液稀釋倍數(shù)V 總: 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系得終體積( mL)V 酶: 反應(yīng)添加得酶液體積 (m L) OD4 2 0： t時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420 n

3、m處吸光度得增加值3 600 0: 420 nm處A B TS氧化態(tài)得摩爾吸光系數(shù)(L /mol cm)T:反應(yīng)時(shí)間(min)L 為比色皿得直徑( cm )。固態(tài)發(fā)酵錳過(guò)氧化物酶(MnP)活性測(cè)定：酶液制?。捍置敢褐苽浒l(fā)酵過(guò)程中每隔 2 d取5 g發(fā)酵物于250 mL三 角瓶中，加入100 mL H2O,在200 r / min得搖床中振蕩提取 3 h,之后5 0 0 0 r/m i n離心20min。（用濾紙過(guò)濾后，取濾液用于測(cè)定MnP酶活性。）在4 mL反應(yīng)體系中含5 0 mm ol/L（ p H 45） 得乳酸鈉緩沖液3、4 mL, 1、6 mmo l/L 得硫酸錳溶液0、 1 mL,酶

4、液0、4m L,預(yù)熱至3 7 °C時(shí)，力卩1、6 mmol / L得H 2 O2溶液 0、1 mL啟動(dòng)反應(yīng)。在2 3 8 nm紫外光處，測(cè)定反應(yīng)4 min內(nèi)OD238差值.在對(duì)照組中， 以煮沸滅活15 min酶液代替原酶液，以蒸餾水代替 H2O2溶液，其她反應(yīng)物 不變。每分鐘使1卩molL得Mn2+轉(zhuǎn)化為Mn3十所需得酶量為1個(gè)酶活力單 位（U） 。（2 38=6、5 mM 1、c m-1）此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵 MnP 活性計(jì)算公式：N:酶液稀釋倍數(shù)V總：漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系得終體積（m L）V酶：反應(yīng)添加得酶液體積（mL ） OD42 0: t時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420 n m處吸光度得增加

5、值6 500:238nm處Mn2 +轉(zhuǎn)化為 Mn3 +摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T:反應(yīng)時(shí)間（m in）L:比色皿得直徑（cm）100mL / （0、4mLX 5g）:固態(tài)變成液態(tài)得稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵錳過(guò)氧化物酶（Mn P）活性測(cè)定：錳過(guò)氧化物酶（M nP）活性測(cè)定在 4 mL 反應(yīng)體系中含 50 mmol/L（ pH 4 5） 得乳酸鈉緩沖液3、4 m L, 1、 6 mmol/L得硫酸錳溶液0、1 m L ,酶液0、4 mL,預(yù)熱至 37 C 時(shí)，力卩1、 6 mm ol / L得 H2 O2溶液0、1 mL 啟動(dòng)反應(yīng)。在23 8 nm紫外光處，測(cè)定反應(yīng) 4 mi n內(nèi)OD 238差值

6、。在對(duì)照組中，以煮沸滅活15 min 酶液代替原酶液，以蒸餾水代替 H2O 2溶液，其她反應(yīng)物不變。每分鐘使 1 ymo l/L得Mn 2 +轉(zhuǎn)化為Mn3+所需得酶量為1個(gè)酶活力單位（U）。（ 2 38 1-1= 6、5 mM 、c m- ）此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵MnP活性計(jì)算公式：N:酶液稀釋倍數(shù)V總：漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系得終體積（mL）V 酶： 反應(yīng)添加得酶液體積 （mL） O D420： t時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm處吸光度得增加值6500: 238nm處M n 2 +轉(zhuǎn)化為Mn3 +摩爾吸光系數(shù)（L /mol cm）T:反應(yīng)時(shí)間（m in）L:比色皿得直徑（c m）固態(tài)發(fā)酵木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（L

7、iP）活性測(cè)定：酶液制取:5g發(fā)酵樣品以1:20（W/V）比例用蒸餾水懸浮，200 r/mi n搖3h, 之后5000 r /m i n離心20min。（上清用0、4 5阿濾紙過(guò)濾，于一2 0C保 存濾液，取能整除得濾液體積用于木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性測(cè)定。 ）測(cè)酶活：3m L反應(yīng)混合液包括3、 4mL酒石酸鈉（250mM, pH 3、0）,0、1mL 10 mM藜蘆醇，0、4mL酶樣品。在3 0± 1 °C下溫浴5min后，于反應(yīng)加 入0、1 mL 1 0m M H2O2啟動(dòng)酶促反應(yīng)，以煮沸滅活 1 5 min酶液代替 原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液作對(duì)照，測(cè)OD 3 10

8、（ 3 10= 9、3 X103M-1c m-1） 處反應(yīng)5mi n前后反應(yīng)液吸光度得變化。一個(gè)酶活力單位（U）得定義：每min氧 化藜蘆醇生成1卩M藜蘆醛消耗得酶量。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵Li P活性計(jì)算公式：N:酶液稀釋倍數(shù)V 總: 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系得終體積（ mL）V 酶: 反應(yīng)添加得酶液體積 （m L） OD 420: t時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在4 20 nm處吸光度得增加值9 3 00：31 0 nm處摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T:反應(yīng)時(shí)間（min）L:比色皿得直徑（cm）100mL/ （0、4 mL x 5g）:固態(tài)變成液態(tài)得稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（Li P）活性測(cè)定：測(cè)酶活：3mL反應(yīng)混合液包括 3、4mL酒石酸鈉（250mM , pH 3、0）, 0、1mL 1 0 mM藜蘆醇，0>4 mL酶樣品。在30±l°C下溫浴5 m i n后，于 反應(yīng)加入0、1mL10m M H2O2啟動(dòng)酶促反應(yīng)，以煮沸滅活1 5 min酶液代替原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液作對(duì)照，測(cè)O D 31 0 （ & 30 = 9、3X103M-1cm-1）處反應(yīng)5 min前后反應(yīng)液吸光度得變化。一個(gè)酶活力單位（ U） 得定義：每mi n氧化藜蘆醇生成1卩M藜蘆醛消耗得酶量。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵 LiP 活性計(jì)算公式