強心苷的提取和分離

1、強心苷的提取與分離提取 分離 色譜鑒定 紙色譜 薄層色譜強心苷的分離提純通常比較復雜與困難，因為它在植物中的含量一般都比較低（1%以下），而且同一中藥中所含的強心苷類成分不僅種類多、 結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近， 還易受植物體內(nèi)酶、 酸的影響生成相應的次生苷，從而增加了成分的復雜性，同時共存的糖類、鞣質(zhì)、皂苷、色 素等，往往能影響或改變強心苷的溶解性，這些都增加了提取分離工作的難度。提取時還需考慮強心苷在植物體中的存在形式。如需提取原生苷，要注意抑制酶的活性，防止酶水解的發(fā)生。措施諸如原料采收后要低溫（50C60C）通風快速干燥、保存期間注意防潮、用乙醇提取以破壞酶的活性。同時還要注意在提取過程中避免酸或堿

2、的影響。 如需提取次生苷，則要利用酶的活性，如采用發(fā)酵法進行酶解等。（一）提取提取強心苷通常用 70% 80%的乙醇為溶劑，若原料為種子類藥材或含脂類雜質(zhì)較多 時，需先用石油醚或汽油脫脂處理后再提?。?若原料為葉或全草， 含葉綠素較多時，可用析 膠法， 將醇提液濃縮后靜置，使葉綠素等脂溶性雜質(zhì)成膠狀沉淀析出，濾過除去， 也可用活性炭吸附法除去稀醇提取液中的葉綠素。提取液中共存的糖、水溶性色素、鞣質(zhì)、皂苷、酸 性及酚性等物質(zhì)可用氧化鋁、 聚酰胺吸附法或鉛鹽沉淀法除去， 但需注意強心苷也有可能被 吸附而損失。提取液經(jīng)上述初步除雜后，可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇（乙醇）溶液依次萃取，將強心苷按極性

3、大小不同分為若干部分， 但每一部分仍為極性相似強心苷的混合物， 需做進 一步分離（二）分離混合強心苷的分離可用萃取法、 逆流分溶法和色譜法， 并對其中含量較高的組分選用適 當溶劑反復結(jié)晶以獲得單體。 多數(shù)情況下， 由于混合強心苷的組成復雜， 往往需要幾種方法 配合使用，尤其結(jié)合各種色譜法進一步分離。常用的色譜法有吸附色譜和分配色譜。分離親脂性強心苷（如單糖苷、次生苷）和苷 元時， 一般選用吸附色譜，吸附劑用硅膠或中性氧化鋁，洗脫劑可用氯仿 -甲醇、酯酸乙酯 -甲醇、苯、丙酮等。分離弱親脂性強心苷時，宜用分配色譜，常用支持劑為硅膠、硅藻土、 纖維素，洗脫劑為不同比例的醋酸乙酯-甲醇-水或氯仿 -

4、甲醇-水。（三）色譜鑒定紙色譜強心苷的紙色譜常用的溶劑系統(tǒng)多由氯仿、 醋酸乙酯、 苯、 甲苯等有機溶劑與水混合而 成，但因水在這些溶劑中的溶解度較小， 可通過加入適量乙醇的方法來增加溶劑系統(tǒng)的含水 量，以利于弱親脂性強心苷的分離。通常強心苷的親脂性較強時，多將濾紙預先用甲酰胺或丙二醇浸漬數(shù)分鐘作為固定相， 以苯或甲苯（用甲酰胺飽和）為移動相。當強心苷的親脂性較弱時，仍可以前者為固定相， 只是將移動相改為極性較大的溶劑， 如用二甲苯和丁酮的混合液， 或氯仿、 苯和乙醇的混合 液，或用氯仿 -四氫呋喃 -甲酰胺（ 50： 50： 6.5）、丁酮-二甲苯 -甲酰胺（ 50： 50： 4）等溶劑 系統(tǒng)

5、作移動相。親水性較強的強心苷，宜用水浸透濾紙作固定相，用水飽和的丁酮或乙醇 甲苯-水（4： 6： 1）、氯仿-甲醇-水（ 10： 4： 5或10： 8： 5）作移動相。薄層色譜在強心苷的薄層色譜中， 以分配色譜的分離效果較好。 不但所得色斑顏色清晰、 色澤集 中，而且薄層上能承載的樣品量也較大， 因此樣品量稍大時也不會出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。 分配色譜 主要用于分離極性較強的強心苷類化合物， 常用硅藻土、 纖維素粉作支持劑， 固定相可用甲 酰胺、二甲基甲酰胺、乙二醇等，移動相用氯仿 -丙酮（ 4： 1）、氯仿-正丁醇（ 19： 1）等溶 劑系統(tǒng)。強心苷的薄層色譜鑒定也可用吸附色譜， 但因強心苷分子中常含

6、有較多的極性基團 （如 多糖苷或苷元上的極性基團多） ，因而不宜用吸附性能強的吸附劑如氧化鋁，而多用硅膠， 展開劑系統(tǒng)有二氯甲烷 -甲醇-甲酰胺（ 80： 19： 1）、醋酸乙酯 -甲醇-水（80： 5： 5）等含有 少量水或甲酰胺的混合溶劑，可有效減輕拖尾現(xiàn)象。強心苷的紙色譜和薄層色譜中常用的顯色劑有：2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液與2mol/L氫氧化鉀水溶液等體積混合，噴后強心苷顯紅色，幾分鐘后褪色。1%苦味酸水溶液與10%氫氧化鈉水溶液（95 : 5）混合，噴后于95C左右烘約5分鐘，強心苷顯橙紅色。2%三氯化銻的氯仿溶液，噴后于100C烘5分鐘即顯色，顏色隨強心苷及苷元結(jié)構(gòu)的不同而不

7、同。氧化鋁是一種極性吸附劑，對極性大的成分吸附力強，故成分的極性越大，由于被吸附力越強，在色譜中的 移動速度越慢，在柱內(nèi)保留時間越長，就越后被洗脫。因 此混合物中的各成分將按極性由小至大的順序依次被洗脫 下來。黃花夾竹桃中強心苷類化學成分的提取分離技術黃花夾竹桃（Thevetia Peruviana）為夾竹桃科植物。性寒味苦，有毒，具有強心利尿、 祛痰定喘、祛瘀鎮(zhèn)痛功效。臨床用于治療心力衰竭、喘息咳嗽、跌打損傷、腫痛等。從黃花夾竹桃果仁中可提制強心靈，方法是以脫脂后的果仁粉末為原料，先進行發(fā)酵酶解處理，再以乙醇為溶劑從中滲漉提取總次生苷，提取液于60C以下減壓濃縮，放冷,即得強心靈粗品，繼而用

8、乙醇溶解粗品，活性炭脫色，重結(jié)晶，即得強心靈純品， 黃花夾竹桃中強心苷的提取工藝流程：若要繼續(xù)分離強心靈中的 5 種單體成分，可用柱色譜，以中性氧化鋁為吸附劑，用苯-氯仿（1 ： 1、1 : 3、1 : 4）、氯仿、氯仿-甲醇（99.5 : 0.5、99 ： 1、98 : 2）、甲醇依次洗脫，可 先后得到極性由小到大的各個成分，即：單乙酰黃夾次苷乙、黃夾次苷乙、黃夾次苷甲、黃 夾次苷丙、黃夾次苷丁。藥渣黃花夾竹桃果仁粉卄苯或石汕®連續(xù)回流脫脂.脫脂粉術ill入5倍雖的水及2 5%的屮苯加黑于J 354冗W溫ffi中黠輕24小時 酶斛后的粉木ill XI5倍槪tOH攪拌152。分削浸泡

9、12小忖陸 滲觀再加入1Q倍呆EtOH締續(xù)慘譙1伽滲漉液F減圧回收EtUH至1:25（生藥:淒砸液L 然后加水便成1:12民放置，析屁過濾r濾液1粗晶加入40倍做5%EgH加熱溶解再加入粗品 量15%的麗性炭y流半小時脫色，過濾潔性炭（棄i）濾液EtOH 液減壓濃縮至1:&加入3倍帚水, 放置訓迪結(jié)晶I乙蟄詵緞m'C干燥T強心靈毛地黃中強心苷化合物的提取分離技術毛花洋地黃（Digitalis lanata）是玄參科植物，應用于臨床已有百年歷史，至今仍是治 療心力衰竭的有效藥物。毛花洋地黃是制備強心藥西地蘭（cedilanid，又稱去乙酰毛花洋地黃苷丙）和地高辛（digoxin，

10、又稱異羥基洋地黃毒苷）的主要原料。西地蘭的提制：西地蘭是毛花洋地黃苷丙的去乙?；?。其提制工藝分為提取總苷、分 離苷丙、苷丙去乙?；健?提取總苷根據(jù)溶解性用乙醇提取原料藥，濃縮后經(jīng)析膠、氯仿洗滌除去脂雜，最后用含醇氯仿萃取出總苷。由于要提取的總苷均為原生苷，可溶于乙醇，且乙醇還可抑制酶的活性，防止酶水解的發(fā) 生，故選用乙醇為提取溶劑。又因強心苷對酸堿不穩(wěn)定，故醇提液需調(diào)至中性再減壓回收。 繼而用氯仿洗除去脂雜（苷丙因在苷甲、乙、丙三者中極性最大，最難溶于氯仿而留在水 層）,最后利用苷甲、乙、丙均可溶于氯仿-乙醇（3 : 1或2 : 1）用含醇氯仿萃取出總苷同時與停留在水層中的水雜分離。亡花

11、洋地黃時粗粉5倍吊：70%熱乙辭（609）浸沛或濡漉潘溉近 完金時再加2倍最70%泠乙醉潯漉I醉提取液上沽液減壓回收乙醇至無醇味濃縮液放冷.用0定倍圮氯優(yōu)洗滌次水尿丿川乙醇至含醉量22%.再用0.3倍量氮偽舉取2次加碳酸W調(diào)pH至屮性.住60匸以下減壓冋收乙勢至含醇y； 110%-20%.于1hC以卜靜置析膠過液，次I I吸取匕消液股狀物¥水層楠聲水溥性雜盛）（葉綠執(zhí)梶脂等）氣仿層回收氯優(yōu)抽松抽松物I加適尿甲醇熱濟，回收甲購空I剩余呈為抽松物的0 3 -0.4倍 濃縮液加入抽松物車SO, 04倍S的蒸水及胡神 搖勻.靜賓恥小時以丨析碼濾取結(jié)晶母液總飯至會t花滯哋黃-fftL 乙、丙）

12、2.分離苷丙根據(jù)苷甲、乙、丙三者的極性和溶解度的差別，可從總苷中分離出苷丙。三者溶 解度見表7-1表人1毛花洋地黃甘甲，乙.丙的溶解度化合物甲醇乙醇氯仿ffl總昔按札總昔甲殊氮仿壤懈水卩：100 : 500 : 500）的 比例,先粽讎于甲帆過希,再向勵中加入氮仿 和水我掘齟隸分層1氮仿層0W住含廿甲、牝）I誠壓濃縮至小體秋冷亂析敝抽濾 購晶住含苗耶嘟分就）I氯仿層I冋收斛住沁）按上述溶劑比贈行貯次萃取分離T廉甲轉(zhuǎn)減壓sm It析臥脫 結(jié)晶住紬丙）由于三者的苷元上所含羥基的數(shù)目和位置不同，決定了極性由大至小順序為：苷丙苷乙 苷甲。其中極性小的化合物（苷甲、乙）在非極性溶劑（氯仿）中溶解度大，極

13、性較大 者（苷丙）則在極性溶劑（稀甲醇）中溶解度大，據(jù)此可用甲醇-氯仿-水混合溶劑萃取，使毛花洋地黃苷甲、乙、丙得以分離。3.去乙?；ㄑ蟮攸S苷丙的去乙?；容^容易，利用氫氧化鈣即可水解去掉乙?；?。毛花洋地萸背內(nèi)按井丙一中醇-氫軾化鈣-蒸惴水（1耳：33nil : 5O-7Omg :比例"先將疔內(nèi)濬于屮醉、氯氧化鈣濬水中，分別過濾，混合 混合液（反應靜置過像，測pH,至水解液稍顯堿性"pH接近?時.水解完畢，H用1%lCLi至中性，過濾濾液減壓濃縮至小體枳放冒過夜析晶粗晶I用150倍屮附巫結(jié)品結(jié)晶（占乙毛花洋地茴肓:丙）堿性試劑可使強心苷分子中的?；狻?nèi)酯環(huán)開裂，但強

14、心苷分子中的苷鍵不會被堿水 解破壞，而且氫氧化鈣只能水解去掉?；?，并不能破壞強心苷分子中的內(nèi)酯環(huán)。鈴蘭中強心苷化合物的提取分離技術鈴蘭（Convallaria keiskei ）是百合科植物，具有強心、利尿的功效。鈴蘭含多種強心苷類化 學成分，有的強心作用極強，如鈴蘭毒苷的強心作用約為G-毒毛旋花子苷效價的1.22倍,約為洋地黃毒苷效價的3.53倍，作用迅速，可用于治療克山病，但毒性性也較大。從鈴蘭中提取鈴蘭毒苷的工藝流程如下：1溶劑法鈴蘭全草粗盼J苯-乙醇（9；1）回流提取液膠質(zhì)沉淀W.葉綠盍等）1減壓回收溶利加水析膠水洛液廠水層（朮器性朶質(zhì)）氯你乙卯（9：1）萃取飢仿層 體機用水萃取數(shù)次r虱仿層V滅壓濃繩至小體積，靜扯1520口抽濾 粗晶H甲醇巫結(jié)晶 結(jié)晶（鈴上弄百）2.活性炭吸附法從鈴蘭草中提取分離鈴蘭毒苷還可采用下列方法：各種強心苷的提取多以醇或稀醇為提取溶劑，雖提取率較高，但提取物中雜質(zhì)也較多，進一步分離和純化比較困難。有報道以苯-乙醇、氯仿-乙醇、乙醇-水等混合溶劑以及水分別作溶劑提取鈴蘭毒苷，并對實驗結(jié)果進行了比較，結(jié)果顯示乙醇-水（1 : 5、1 : 9）提取率最高，但水溶性雜質(zhì)最多。苯 -乙醇