9食品中霉菌和酵母菌測定的標準操作規(guī)程

1、XXXXX有 限 公 司食品中霉菌和酵母菌測疋的標準操作規(guī)程編號起草人日期審核人日期批準人日期實施日期第版文件密級1目的規(guī)范食品中霉菌和酵母菌測定的標準操作規(guī)程。2范圍本標準規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts ）的計數(shù)方法。本標準適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計數(shù)。3責(zé)任質(zhì)量部組織制訂、化驗室負責(zé)實施。4內(nèi)容設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱：2 C5 C。恒溫培養(yǎng)箱：28 C± 1 C。均質(zhì)器。恒溫振蕩器。顯微鏡：10X100X。電子天平：感量g。無菌錐形瓶：容量500 mL、250 mL。無菌廣口瓶：500 mLo無菌

2、吸管：1 mL（具mL刻度）、10 mL（具mL刻度）。無菌平皿：直徑90 mm無菌試管：10 mnrK 75 mm無菌牛皮紙袋、塑料袋。培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A中。孟加拉紅培 ，養(yǎng)基: 見附錄A中 檢驗程序 霉菌和酵母計數(shù)的檢驗程序見圖 1。圖 1 霉菌和酵母計數(shù)的檢驗程序操作步驟樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品至盛有 225 mL 滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充 分振搖，即為 1:10稀釋液。或放入盛有 225 mL 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊 式均質(zhì)器拍打2min,制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品至盛有 225 mL

3、無菌蒸餾水的錐形瓶（可 在瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中,充分混勻,制成 1:10 的樣品勻液。取1 mL 1:10 稀釋液注入含有 9 mL 無菌水的試管中 , 另換一支1 mL 無菌吸管 反復(fù)吹吸 ,此液為1:100 稀釋液。按 操作程序,制備10 倍系列稀釋樣品勻液。 每遞增稀釋一次, 換用1 次1 mL 無 菌吸管。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣 品可包括原液）,在進行 10 倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取 1 mL 樣品 勻液于2個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1 mL羊品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對 照。及時將15 m20 mL冷卻至46 C的

4、馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基（可 放置于46C± 1C恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，28C± 1C培養(yǎng)5d,觀察并記錄。菌落計數(shù)肉眼觀察， 必要時可用放大鏡， 記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。 以菌落 形成單位（colonyforming units， CFU 表示。選取菌落數(shù)在 10 CFU150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。 霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。 菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均 數(shù)。結(jié)果與報告計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計算。若所有平板上菌

5、落數(shù)均大于150 CFU則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)，其他平 板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。若所有平板上菌落數(shù)均小于10 CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋 倍數(shù)計算。若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算；如為原 液，則以小于 1計數(shù)。報告菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。 菌落數(shù)大于或等于 100 時，前3 位數(shù)字采用“四舍五入” 原則修約后， 取前2 位 數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，此時也按 “四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。稱重取樣以CF

6、U/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告或分別報 告霉菌和 /或酵母數(shù)。附錄A（ 規(guī)范性附錄 ）培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯- 葡萄糖 -瓊脂成分馬鈴薯（去皮切塊） 300 g葡萄糖 g瓊脂 g氯霉素 g蒸餾水 1000 mL制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL蒸餾水，煮沸10 min20 min。用紗布過濾，補 加蒸餾水至1000 mL加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 C滅菌20 min。 傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中孟加拉紅培 養(yǎng)基成分蛋白胨 g葡萄糖 g 磷酸二氫鉀 g 硫酸鎂（無水） g 瓊脂 g 孟加拉紅 g 氯霉素 g 蒸餾水 1000 mL 制法上

7、述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補足蒸餾水至 1000 mL分裝后，121C滅 菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。附錄B（ 資料性附錄 ） 霉菌直接鏡檢計數(shù)法 常用的為郝氏霉菌計測法，本方法適用于番茄醬罐頭。設(shè)備和材料折光儀。顯微鏡。郝氏計測玻片：具有標準計測室的特制玻片。蓋玻片。 測微器：具標準刻度的玻片。操作步驟檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為（即濃度為 % %，備 用。顯微鏡標準視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125 倍調(diào)節(jié)標準視野，使其直 徑為 mm。涂片：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標準液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室， 以備觀察。觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標準視野下進行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察 50 個視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進行觀察。結(jié)果與計算：在標準視野下