洋蔥根尖染色體觀察

1、洋蔥根尖染色體有絲分裂觀察與多倍體誘導(dǎo)一、實驗?zāi)康?、掌握洋蔥培養(yǎng)的方法，掌握利用秋水仙素誘導(dǎo)植物多倍體的方法。2、掌握洋蔥根尖制片的方法，復(fù)習(xí)染色、壓片的基本操作。3、通過對于有絲分裂相的觀察，統(tǒng)計洋蔥染色體數(shù)目，加深對于細胞 有絲分裂過程的理解。4、對比進行多倍體誘導(dǎo)前后的洋蔥根尖，理解四倍體與二倍體的區(qū) 別。二、實驗原理（一）有絲分裂前期）、S期（合成期）、G2期 中G1期、S期和 G2期合稱間期, 準備，而 M 期又可以分為前期、 方便，木實驗采用后一種分法。觀察有絲分裂，重點在于觀察染色體的形態(tài)。在細胞分裂前期，細 胞核解體，染色質(zhì)凝聚顯現(xiàn)出染色體的形態(tài)；在前中期，染色體散亂 地分布

2、于細胞的中部；在中期，紡錘體形成，染色體受到微管的牽 引，著絲粒成行排列于赤道板上；在后期，染色體受到動粒微管的牽完整的有絲分裂相包括 G1期（合成（合成后期）和 M期（分裂期），其 細胞完成 DNA的復(fù)制以及有絲分裂的 中期、后期和末期，為了形態(tài)觀察的皮層維管柱畫細麹了引，向細胞兩級運動；在末期，染色體重新解螺旋，細胞核重新形 成。（二）洋蔥的根尖洋蔥根尖的整體結(jié)構(gòu)如右圖，其中只有分生區(qū)的初生分生組織由于 細胞始終處于持久而強烈的有絲分裂之中而作為我們的觀察對象，其 余部分在制片時都應(yīng)當(dāng)盡量剔除來保證觀察效果。（三）多倍體的誘導(dǎo)多倍體的誘導(dǎo)使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合， 從而

3、使有絲分裂中期紡錘體不能正常形成，但是姐妹染色單體照常想 成，只是沒有被拉向兩級，于是染色體數(shù)目加倍。（四）各步驟的作用1. 固定液可以迅速殺死細胞，保持細胞形態(tài)在有絲分裂相。2. 解離可以破壞細胞的胞間層（果膠），使細胞之間的聯(lián)系變松 散，有利于壓片和染色。3. 漂洗可以洗去過量的鹽酸，防止解離過度破壞細胞結(jié)構(gòu)或影響染 色效果（鹽酸是酸性，而醋酸洋紅是堿性染料）。三、實驗材料新鮮、健康的洋蔥鱗莖一個；0.02%秋水仙素、IM HC1、醋酸洋紅染液、卡諾氏固定液實驗器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、試管、燒杯、小塑料管、濾 紙、刀片、解剖針等四、實驗步驟（一）材料的培養(yǎng)1. 選擇新鮮、健康、根原基

4、發(fā)育較為完整的洋蔥鱗莖，用刀片適當(dāng) 削去根部的木栓組織， 置于清水中培養(yǎng) （水的高度要求與洋蔥底部正 好接觸） ，每天換一次水，保證水的清潔2. 待根尖長度達到1.5-2.Ocm時， 若要觀察二倍體， 則直接于正午 12:00左右剪下根尖投入固定液中，之后換 0.02%秋水仙素，繼續(xù)培養(yǎng) 約 24h3. 秋水仙素培養(yǎng)完成，根尖部位脹大后，與正午 12:00左右剪下洋 蔥根尖，投入固定液中固定 2-72h（二）裝片的制作與觀察4. 從固定液中取出洋蔥根尖，清水沖洗干凈，取一支試管，加入適 量IM HC1,投入根尖，在 60C 恒溫水浴下解離 5-10min,此時根尖整 體應(yīng)呈半透明狀，僅分生區(qū)部

5、分為白色。5. 解離完成后，轉(zhuǎn)移根尖至盛有清水的小燒杯中，漂洗 23 次。6. 將根尖置于載玻片上，只留分生組織，去除其余部分，滴加醋酸 洋紅染液染色 lOmin,同時用刀片將根尖盡量切碎。7. 蓋上蓋玻片（若切得足夠碎此時蓋玻片應(yīng)能輕松蓋上），用濾紙 吸去多余的染液，在有濾紙覆蓋的情況下，用大拇指按壓進行壓片， 也可以用解剖針柄輕輕敲打相應(yīng)部位進行輔助。8. 將裝片置于顯微鏡下進行觀察，比較二倍體與四倍體細胞的不 同，尋找合適的有絲分裂相，統(tǒng)計染色體數(shù)目。五、實驗記錄1.多倍體2.二倍體六、注意事項（1）培養(yǎng)洋蔥根尖時，水不可放多，待根尖長出后，使根尖分生 區(qū)接觸到水而即可；水至少一天一換，若有渾濁，立即更換。（2）剪下洋蔥根尖時注意時間，正午時分最合適，因為此時洋蔥 根尖分生區(qū)有絲分裂最為活躍，此時固定，可以觀察到最多的分裂 相。（3）解離時間要控制好，時間太短，效果不夠；時間太長，解離 過度破壞細胞。（4） 漂洗不能少， 染色時間要足夠，