血管緊張素Ⅱ上調自發(fā)性高血壓大鼠和Wistar--Kyoto大鼠血管平滑肌細胞外信號調節(jié)激酶的信號轉導

1、生理學報 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2005, 57 (5: 587-592587研究論文Received 2005-01-05 Accepted 2005-04-25This work was supported by the Science and Technology Committee of Zhejiang Province (No. 021107057 and the NaturalScience Foundation of Zhejiang Province (No. M303874.*Corresponding author.

2、Tel: +86-571-88967874; E-mail: huangchaoyang007血管緊張素上調自發(fā)性高血壓大鼠和 Wistar-Kyoto 大鼠 血管平滑肌細胞外信號調節(jié)激酶的信號轉導朱建華,劉 忠,黃朝陽 *,李 閃浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院,杭州 310003摘 要 :本文研究血管緊張素 (angiotensin, Ang 對自發(fā)性高血壓大鼠 (spontaneously hypertensive rat, SHR 和 Wistar-Kyoto (WKY大鼠血管平滑肌細胞 (vascular smooth muscle cells, VSMCs細胞外信號調節(jié)激酶 (extra

3、cellular signal-regulated pro-tein kinases, ERKs 信號途徑的影響。體外培養(yǎng) SHR 和 WKY 大鼠的 VSMCs ,先在培養(yǎng)基中加入終濃度為 1×10-5mmol/L的纈沙坦或 1×10-5mmol/L的 PD98059或不加藥物,再給予 1×10-7mmol/L的 Ang 刺激 24 h后收集細胞,以無血清培養(yǎng)基 培養(yǎng)的 VSMCs 作對照。用免疫沉淀法測定 ERK 活性;用 Western-blot 方法檢測總 ERK (total ERK, t-ERK 、磷酸化 ERK (phosphorylated-ERK

4、, p-ERK 及絲裂素活化蛋白激酶磷酸酶 -1 (mitogen-activated protein kinases phosphatase-1, MKP-1水 平;用 RT-PCR 法半定量測定 MKP-1 mRNA的含量。結果顯示:(1 SHR和 WKY 大鼠 Ang 刺激組 VSMCs 中 ERK 活 性、 p-ERK 、 MKP-1及 MKP-1 mRNA水平均明顯高于對照組 (P <0.05; SHR和 WKY 大鼠 Ang +纈沙坦組和 Ang +PD98059組的上述指標與對照組比較均無顯著性差異。 (2 SHR大鼠 VSMCs 中 ERK 活性、 p-ERK 、 MKP

5、-1及 MKP-1mRNA 均顯著高于相同干預的 WKY 大鼠 (P <0.01。 (3 SHR和 WKY 大鼠之間以及對照組、 Ang 刺激組、 Ang +纈沙 坦組和 Ang +PD98059組間 VSMCs 中 t-ERK 水平均無顯著性差異。以上結果表明, Ang 可能主要通過其 1型 (Ang type 1, AT 1 受體激活 SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs 中 ERK 途徑,增加 ERK 活性和 p-ERK 蛋白水平,繼而引起 MKP-1及 MKP-1 mRNA水平升高。關鍵 詞 :血管緊張素;絲裂素活化蛋白激酶;細胞外信號調節(jié)激酶;血管平滑肌細胞;大鼠;自發(fā)性高血壓

6、 中圖分類號 :Q254; R544.1Effects of angiotensin on extracellular signal-regulated protein kinasessignaling pathway in cultured vascular smooth muscle cells from Wistar-Kyotorats and spontaneously hypertensive ratsZHU Jian-Hua, LIU Zhong, HUANG Zhao-Yang*, LI ShanDepartment of Cardiology, the First Affili

7、ated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310003, ChinaAbstract: The aim of this study was to investigate the effects of angiotensin (Ang on extracellular signal-regulated protein kinase(ERK signaling pathway in cultured vascular smooth muscle cells (VSMCs from spontaneously

8、hypertensive rats (SHR and Wistar-Kyoto (WKYrats. VSMCs from SHR and WKYrats were treated with 1×107mmol/L Ang for 24 h in the absence or presence of30 min of pre-treatment of valsartan (1×105mmol/L or PD98059 (1×105mmol/L, selective inhibitor of ERKs- dependent pathways,when they wer

9、e cultured in 20% calf serum medium. VSMCs of SHR and WKY cultured in serum-free medium were used as controlgroups. Among the different treatments, VSMCs from the SHR and WKY were devided into four groups: (1 control, (2 Ang , (3Ang +valsartan, (4 Ang +PD98059. ERK activity in VSMCs was measured by

10、immuno-precipitation. Proteins of total ERK (t-ERK, phosphorylated-ERK (p-ERK and mitogen-activated protein kinases phosphatase-1 (MKP-1 in VSMCs were detected by生理學報 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2005, 57(5: 587-592 588Western blot. MKP-1 mRNA in VSMCs was measured by RT-PCR. In VSMCs from

11、WKY or SHR rats, ERK activity, p-ERK, MKP-1 and MKP-1 mRNA in Ang group were higher than those in control group (P <0.05. In both SHRs and WKYs, there were no significant differences in ERK activity, p-ERK, MKP-1 and MKP-1 mRNA among the control group, Ang +valsartan group and Ang +PD98059 group.

12、 ERK activity, p-ERK, MKP-1 and MKP-1 mRNA in SHRs were significantly higher than those in WKYs with same treatments (P <0.01. There was no significant difference in t-ERK among different groups and no difference in t-ERKbetween SHRs and WKYs (P >0.05. Our results show that Ang activates VSMCs

13、 ERK signaling pathways via Ang type 1 (AT 1 receptors. Ang increased ERK activity and p-ERK, but not t-ERK, accompanied by an increase in MKP-1 mRNA expression andprotein. Among the different treatments, ERK activity and p-ERK were higher in SHR than in WKY. Valsartan and PD98059 blocked Ang -stimu

14、lated ERK activation. These results suggest that ERK signaling pathway plays an important role in the pathogenesis ofhypertension. The effect of Ang on SHR and WKY VSMCs ERK signaling pathway may be mediated by AT1receptors, enhancing ERK activity and the amount of p-ERK, and then increasing MKP-1 m

15、RNA and its expression.Key words: angiotensin ; mitogen-activated protein kinases; extracellular signal-regulated protein kinase; vascular smooth muscle cells; rats; spontaneously hypertensive高血壓時的血管重構、彈性降低等病理改變與 血管平滑肌細胞 (vascular smooth muscle cells, VSMCs增殖密切相關。絲裂素活化蛋白激酶 (mitogen-acti-vated protei

16、n kinases, MAPK 信號途徑在機體的細 胞生長、分化和增殖過程中發(fā)揮重要的調控作用 1。 MAPK 由 p38-MAPK , C-jun N末端激酶 (C-jun N-ter-minal kinases, JNKs 和細胞外信號調節(jié)激酶 (extra-cellular signal-regulated kinases, ERKs 三類同功酶 組成,在高血壓的病理生理改變中又以 ERKs 的作 用最為相關 2。 ERKs主要有 ERK1和 ERK2兩種同 工酶,磷酸化 ERK (phosphorylated-ERK, p-ERK 是其活性形式。具有雙效性的絲裂素活化蛋白激酶 磷酸酶

17、-1 (mitogen-activated protein kinases phos-phatase-1, MKP-1被 p-ERK 活化,活化的 MKP-1又通過去磷酸化作用使 p-ERK 失活以保持 ERK 信 號途徑的平衡 3。血管緊張素 (angiotensin, Ang 具有刺 激血管收縮、 VSMCs 增殖和膠原合成等廣泛的生物 學效應,在高血壓的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的 作用。在體實驗表明,血管緊張素轉換酶抑制劑和 Ang 受體阻滯劑可以通過降低 ERK 活性而抑制血 管重塑 4。離體實驗也表明, Ang 對 VSMCs 增 殖及 DNA 合成有促進作用,且其作用與 MAPK

18、信 號途徑激活有關 5。但 Ang 在激活 VSMCs 內 ERK 信號途徑時, 是 ERK 蛋白總量增加還是僅有 p-ERK 增加, MKP-1在 VSMCs 增殖中的作用及 Ang 對 MKP-1的影響如何,以及 Ang 對不同種系大鼠 ERK 信號途徑有何不同影響等問題尚不明確。 纈沙坦是一種 Ang 1型 (Ang type 1, AT 1 受體阻滯劑, PD98059則可通過抑制 ERK 上游分子 MAPK/ERK激酶 (MAPK/ERK kinase, MEK的活化以 阻斷 ERK 信號途徑。本文擬通過觀察 Wistar-Kyoto (WKY大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠 (spontan

19、eously hy-pertensive rat, SHR VSMCs在 Ang 刺激下 ERK 活性、總 ERK (total ERK, t-ERK 、 p-ERK 、 MKP-1及 MKP-1 mRNA水平的變化,以及纈沙坦和 PD98059對 Ang刺激下的 ERK 信號途徑的作用, 了解 ERK 信號途徑在高血壓發(fā)生發(fā)展過程中的作用 機制及 Ang 對此信號途徑的影響。1 材料和方法1.1 材料與試劑 雄性 8周齡的 SHR 和 WKY 大鼠 各 4只,重量在 180200 g,購自中國科學院上海 實驗動物中心。兔抗鼠 t-ERK 多克隆抗體、小鼠抗 大鼠 p-ERK 單克隆抗體、辣根

20、酶標記山羊抗兔和山 羊抗鼠 IgG 二抗以及強化的化學發(fā)光試劑 (enhanced chemiluminescence, ECL均購自 Santa Cruz公司; 兔抗鼠 MKP-1單克隆抗體、苯甲磺酰氟 (phenyl-methylsulfonyl fluoride, PMSF 、抑肽酶 (apro-tinin 、亮肽素 (leupeptin、 Ang 和 5-溴脫氧尿嘧 啶核苷 (5-bromo-2'-deoxyuridine, BrdU 購自 Sigma 公司, DMEM 培養(yǎng)基購自 Gibco 公司, TRIzol 購 自 Invitrogen 公司, M-MLV 逆轉錄酶和

21、PD98059購 自 Promega 公司, PVDF 膜和蛋白 A 的瓊脂糖珠子 購自 Amersham 公司, ERK1/2活性測定試劑盒購自 Chemicon 公司, ERK 標準蛋白購自 New England Biolab 公司,引物由上海生物工程公司合成,胎牛 血清購自杭州四季青公司,纈沙坦由諾華公司饋 贈,其余試劑均購自上海生物工程公司。1.2 大鼠 VSMCs 的原代培養(yǎng) 采用文獻報道的589朱建華等 : 血管緊張素上調 SHR 和 WKY 大鼠血管平滑肌細胞 ERKs 的信號轉導組織貼塊法 6,在無菌條件下分離大鼠胸主動脈,剪 碎后加入含有 20%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)液

22、,在 37、 5% CO2孵育箱中靜置培養(yǎng)。待細胞生長融 合至 75%95%培養(yǎng)皿時,用 0.25%胰蛋白酶消化 傳代增殖。用平滑肌 -actin 免疫組化染色鑒定細 胞,胞漿有棕黃色顆粒者為陽性,證明為 VSMCs , 35代細胞用于本實驗。在傳代過程中,細胞以 5×105個 /ml接種于 6孔板培養(yǎng)板上。實驗前 48 h換 成不含血清的 DMEM ,使細胞處于靜止狀態(tài)。在 培養(yǎng)基中加入終濃度為 1×10-5 mmol/L的纈沙坦或 1×10-5 mmol/L的 PD98059或不加藥物預處理 30 min, 再予 1×10-7 mmol/L的 Ang

23、 刺激 24 h后收集細胞, 以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的 VSMCs 作對照,每組實驗 重復 4次。 SHR 和 WKY 大鼠的 VSMCs 各分 4組: (1對照組; (2 Ang 刺激組; (3 Ang +纈沙坦 組; 4 Ang II+PD98059組。1.3 樣品的獲取1.3.1 蛋白提取 用冰冷的 PBS 洗 VSMCs 2次, 倒凈 PBS 。加入 0.4 ml裂解液冰上裂解 30 min,其 組成為:Tris-Hcl 50 mmol/L, pH 8.0; NaCl 150 mmol/L; EDTA 0.5 mmol/L; DTT 1 mmol/L; NP-40 1%;脫氧膽酸鈉 0.5

24、%; SDS 0.1%; PMSF 100 mg/L;抑肽酶 1 mg/L;亮肽素 2 mg/L;釩酸鈉 100 µmol/L。用塑料刮勺刮下細胞,吹打后將細胞懸 液和碎片移入 1.5 ml Eppendorf管中, 4, 12 000 g 離心 10 min,取上清,用 Folin 酚法進行蛋白定量 后保存于 -70。1.3.2 總 RNA 的提取 用 TRIzol 試劑一步法提 取總 RNA ,溶解于 20 µl DEPC水中,在 Smart Spec3000分光光度計上測定 A260/280比值為 1.82.0,并分 別測定濃度后保存于 -70。1.4 ERK1/2活

25、性測定 免疫沉淀法純化蛋白并用 ERK1/2試劑盒測定 ERK 的活性。取 0.5 ml蛋白樣 本,加入抗 p-ERK 抗體 10 µl ,在 4孵育 12 h。 加入 20 µl 50% (V /V 蛋白 A 的瓊脂糖珠子, 4孵 育 2 h。 2000 g , 4離心 1 min,棄去上清液,加 入 1 ml裂解液重懸珠子, 4孵育 10 min后離心; 重復 2次,其中第 3次用適量的激酶活性測定緩沖 液代替裂解液重懸。棄去上清液,沉淀的蛋白進行 激酶活性的測定,在酶標儀 450 nm處讀取灰度 (optical density, OD 值,并根據(jù) ERK 標準蛋白

26、OD 值繪制的標準曲線計算樣本的 ERK 活性。1.5 Western blot法檢測 t-ERK 、 p-ERK 和 MKP- 1蛋白表達 t-ERK 檢測取 20 µl 蛋白, p-ERK 和 MKP-1檢測取 40 µl 蛋白,加入上樣緩沖液煮沸 3 min 變性后按文獻報道的 Western blot方法 7,完成 十二磺基硫酸鈉 -聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE和蛋白轉膜操作, 膜片分別與一抗 (兔抗鼠 t-ERK 多 克隆抗體和小鼠抗大鼠 p-ERK 單克隆抗體,稀釋濃 度為 1:1 000;兔抗鼠 MKP-1單克隆抗體,稀釋濃 度為 1:5 000進行

27、抗原抗體結合反應,再與辣根酶 標記二抗 (山羊抗兔或山羊抗鼠 IgG ,稀釋濃度均為 1:10 000反應,經(jīng)適當洗滌,膜片與 ECL 溫浴 1 min ,保鮮膜包裹后,經(jīng) X 光片曝光,顯影和定 影,顯現(xiàn)特異的蛋白信號。用 GS-800 Calibrated Densitometer 激光光密度儀掃描,結果用計算機 Meta Morph程序分析。設內對照,同一膠上被測 蛋白與內對照所測 OD 值的比值,即相對 OD 值代 表蛋白的相對表達量。1.6 RT-PCR法檢測 MKP-1 mRNA的表達1.6.1 逆轉錄反應 (reverse transcription, RT 兩步法:RNA 樣品

28、 2 µg 、 0.01 mmol/L Oligo(T 18 1 µl 、加 DEPC 水至 12 µl 體積, 70水浴變性 5min ,再加入 M-MLV 逆轉錄酶 200 U、 5×緩沖液 5 µl 、 10 mmol/L dNTP 1.25 µl 、 RNA 酶抑制劑 20 U 、補 DEPC 水至 25 µl 體積, 37水浴 1 h。 1.6.2 PCR反應體系 cDNA 3 µl 、 Taq 酶 1.5U 、 10 mmol/L dNTP 1 µl 、 25 mmol/L MgCl23 &#

29、181;l 、 10×緩沖液 4.7 µl 、 MKP-1的上游引物 5-ATCTCC-CCCAACTTCAGCTT-3 和下游引物 5-TGATGGG-GCTTTGAAGGTAG-3 各 4 µl (濃度均為 0.01 mmol/ L 、 -actin 的上游引物 5-CACGGCATTGTAACC-AACTG-3和下游引物 5-TCTCA-GCTGTGGTGGT-GAAG-3 各 4 µl (濃度均為 0.01 mmol/L,補 DEPC 水至 50 µl 體積。 PCR 反應條件為:預變性 94 5 min ;變性 94 30 s、退火

30、55 30 s、延伸 72 1 min,循環(huán) 26次; 72延伸 7 min。1.6.3 瓊脂糖電泳 PCR 產(chǎn)物于 2%瓊脂糖凝膠 電泳, MKP-1 202 bp、 -actin 400 bp,用凝膠圖 像分析系統(tǒng)進行灰度掃描,以 -actin 為內參照作半定 量分析, 比較不同年齡組的 SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs 的 MKP-1/-actin 灰度比值。1.7 統(tǒng)計處理 實驗數(shù)據(jù)以 mean±SD表示,用 SPSS 10.0統(tǒng)計軟件包進行成組 t 檢驗和單因素方差 分析 (ANOVA及 Student-Newman-Keuls 法作顯著性 分析。 P <0.05

31、為具有統(tǒng)計學差異。生理學報 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2005, 57(5: 587-5925902 結果2.1 各組 VSMCs 中 ERK 活性水平比較SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs Ang刺激組 ERK 活 性水平均高于對照組、 Ang +纈沙坦組和 Ang +PD98059組 (P <0.01; Ang +纈沙坦組及 Ang +PD98059組 ERK 活性與對照組比較無明顯差異。 各組 SHR 大鼠 VSMCs 中 ERK 活性水平均顯著高于 相同干預的 WKY 大鼠 (P <0.01, SHR 對照組 VSMCs

32、ERK 活性比 WKY 對照組增加 1.7倍 (P <0.01(圖 1 。2.2 各組 VSMCs 中 t-ERK 水平比較SHR 和 WKY 大鼠 4組 VSMCs 中 t-ERK 水平無 明顯差異, 提示不同干預對大鼠 VSMCs 的 t-ERK 水 平無明顯影響 ; SHR 和 WKY 大鼠間 VSMCs 中 t-ERK 水平也無差異 (表 1 。2.3 各組 VSMCs 中 p-ERK 水平比較SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs Ang刺激組 p-ERK 水平均高于對照組、 Ang +纈沙坦組和 Ang +PD98059組 (P <0.05; Ang +纈沙坦組及 Ang

33、 +PD98059組, p-ERK 水平與對照組比較無顯著差 異。另外,各組 SHR 大鼠 VSMCs 中 p-ERK 水平 均顯著高于相同干預的 WKY 大鼠 (P <0.01(圖 2 。2.4 各組 VSMCs 中 MKP-1水平比較SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs Ang刺激組 MKP-1水平均高于對照組、 Ang +纈沙坦組和 Ang +PD98059組 (P <0.05; Ang +纈沙坦組及 Ang +PD98059組 MKP-1水平與對照組比較無顯著差 異。各組 SHR 大鼠 VSMCs 中 MKP-1水平均顯著高 于相同干預的 WKY 大鼠 (P <0.0

34、1(圖 3 。表 1. 各組大鼠 VSMCs 中 t-ERK 表達 Table 1. t-ERK expression in VSMCs from ratsin different groups (n =4 Group WKYSHRControl group0.96±0.091.07±0.17Ang group1.06±0.191.05±0.12Ang +valsartan group0.99±0.231.04±0.20Ang +PD98059 group1.03±0.241.06±0.19圖 3. 各組大鼠 VS

35、MCs 中 MKP-1Fig.3. MKP-1 level in VSMCs from rats in different groups. n=4.*P <0.05 vs Con, #P <0.01 vs WKY group with same treatment.圖 2. 各組大鼠 VSMCs 中 p-ERK 的活性Fig.2. p-ERK activity in VSMCs from rats in different groups.n =4. *P <0.01 vs Con, #P <0.01 vs WKY group with same treatment.圖

36、1. WKY和 SHR 大鼠 VSMCs 中 ERK 活性的變化 Fig.1. Change of ERK activity in VSMCs from SHR and WKYrats. Con, control group; Ang , Ang group; Val, Ang +valsartan groups; PD98059, Ang + PD98059 group. n=4.*P <0.01 vs Con, #P <0.01 vs WKY group with same treatment.591朱建華等 : 血管緊張素上調 SHR 和 WKY 大鼠血管平滑肌細胞 ERKs

37、 的信號轉導2.5 各組 VSMCs 中 MKP-1 mRNA水平比較SHR 和 WKY 大鼠 VSMCs Ang刺激組 MKP-1mRNA 水平均高于對照組、 Ang +纈沙坦組和 Ang +PD98059組 (P <0.05; Ang +纈沙坦組及 Ang +PD98059組 MKP-1 mRNA水平與對照組比較無 顯著性差異 (P >0.05。另外,各組 SHR 大鼠 VSMCs 中 MKP-1 mRNA水平均顯著高于相同干預的 WKY 大鼠 (P <0.01(圖 4 。3 討論原發(fā)性高血壓的生理病理過程主要包括 VSMCs 的增生和肥大,以及細胞外基質合成增加和重排等

38、, 越來越多的研究表明 MAPKs 的激活可能在 VSMCs 增殖過程中起重要作用 8。 ERK 信號途徑則被認為 是經(jīng)典的 MAPK 信號途徑,與 VSMCs 增殖關系最 為 密 切 。Ang 是腎素 -血管緊張素系統(tǒng)的重要作用因 子,不僅是一種血管收縮劑,還是一種促生長因子 6。 我們的研究表明,經(jīng) Ang 刺激后 , SHR和 WKY 大 鼠 VSMCs 中 ERK 活性、 p-ERK 水平均增加,但 t-ERK 水平卻沒有變化。這提示在 Ang 激活大鼠 VSMCs 的 ERK 信號途徑過程中, ERK 的總量并未變 化, 而是其活化形式增加了。 各組 SHR 大鼠 VSMCs 中 E

39、RK 活性和 p-ERK 水平均顯著高于相同干預的 WKY 大鼠,這可能是因為基礎狀態(tài)下 SHR 有較高圖 4. 各組大鼠 VSMCs 中 MKP-1 mRNA含量Fig.4. MKP-1 mRNA level in VSMCs from rats in differentgroups. n=4. *P <0.05 vs Con, #P <0.01 vs WKY group with sametreatment.的 Ang , Ang 激活了 E RK 途徑。纈沙坦和 PD98059可以抑制 Ang 對 ERK 信號途徑的激活, 提示 Ang 主要通過 AT 1受體激活 ERK 信

40、號途徑。在基礎情況下,細胞缺乏 M K P -1,激活的 MAPK 可以誘導 MKP-1表達, MKP-1又反饋調節(jié) MAPK 的活性,這對于維持心血管組織穩(wěn)態(tài)平衡有 重要作用 9。本實驗表明,經(jīng) Ang 刺激后 , WKY和 SHR 大鼠 VSMCs 中 MKP-1和 MKP-1 mRNA水平均 較對照組增加,其機制可能是 Ang 使大鼠 VSMCs 中 ERK 活性增加,從而反饋引起 MKP-1的升高; 另外, p-ERK 還能增加 MKP-1穩(wěn)定性,減少 MKP-1降解 10。纈沙坦和 PD98059抑制了 ERK 活性程度 后,同時也抑制了 MKP-1的水平。 PD98059主要 通過

41、抑制 ERK 上游分子 MEK 的激活使 ERK 活性降 低,不直接影響 Ang II的作用,這提示 Ang 主 要不是直接調節(jié) MKP-1的水平。上述研究顯示:Ang 主要通過 AT 1受體激活 WKY 和 SHR 大鼠 VSMCs 中 ERK 途徑,增加 ERK 活性和 p-ERK 蛋白水平,繼而引起 MKP-1及 MKP-1mRNA 水平升高,但對 ERK 蛋白總量沒有影響; 纈沙坦和 PD98059可以阻斷 Ang 對 ERK 信號途徑 的影響。 SHR 大鼠 VSMCs 中 ERK 活性、 p-ERK 、 MKP-1及 MKP-1 mRNA均顯著高于 WKY 大鼠, 提示 ERK 信

42、號途徑在高血壓的病理過程中起重要的作用。參 考 文 獻1Aroor AR, Shuklar SD. MAP kinase signaling in diverse ef-fects of ethanol. Life Sci 2004; 74(19: 2339-2364.2Purcell NH, Darwis D, Bueno OF, Muller JM, Schule R,Molkentin JD. Extracellular signal-regulated kinase 2 inter-acts with and is negatively regulated by the LIM-onl

43、y pro-tein FHL2 in cardiomyocytes. Mol Cell Biol 2004; 24(3:1081-1095. 3Communal C, Colucci WS, Remondino A, Sawyer DB, PortJD, Wichman SE, Bristow MR, Singh K. Reciprocal modula-tion of mitogen-activated protein kinases and mitogen-acti-vated protein kinase phosphatase 1 and 2 in failing humanmyoca

44、rdium. J Card Fail 2002; 8(2: 86-92.4El Mabrouk M, Touyz RM, Schiffrin EL. Differential ANG -induced growth activation pathways in mesenteric arterysmooth muscle cells from SHR. Am J Physiol Heart CircPhysiol 2001; 281(1: 30-39.5Hong HJ, Chan P, Liu JC, Juan SH, Huang MT, Lin JG,Cheng TH. Angiotensi

45、n induces endothlin-1 gene expressionvia extracellular signal-regulated kinase pathway in rat aorticsmooth muscle cells. Cardiovasc Res 2004; 61(1: 159-168.592 6 生理學報 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2005, 57(5: 587-592 Touyz RM, Wu XH, He G, Salomon S, Schiffrin EL. Increased angiotensin -mediated S