人子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察.

1、人子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察作者:時(shí)間：2007-11-22 11:21:00作者：俞超芹，石書芳，劉玉環(huán)，王瑞霞，宋艷華，俞瑾【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜異位癥摘要U的：探討子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EM)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)方法，并比較EM在位及異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞與正常對(duì)照在位 子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)的差異。方法：采用改良EM細(xì)胞原代培養(yǎng)方法，免疫細(xì)胞化 學(xué)法鑒定細(xì)胞類型，在光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)差異。結(jié)果： 正常對(duì)照子宮內(nèi)膜細(xì)胞及EM在位、異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞分離培養(yǎng)成功率分別為 91.67%、93.75%和75. 00%。EM異位、在位子宮內(nèi)膜

2、腺上皮細(xì)胞與正常在位子宮 內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞大小相似，但EM異位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞染色質(zhì)增多，核增 大。EM異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞較EM在位及正常在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞小，且 細(xì)胞膜表面有較多的微絨毛和胞漿突起。結(jié)論：注意取材方式，采用改ft原代 培養(yǎng)方法，可以提高EM異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)成功率。EM異位子宮內(nèi)膜腺上 皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與正常婦女及EM在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞有顯著不同。關(guān)鍵詞 子宮內(nèi)膜異位癥；原代培養(yǎng)；腺上皮細(xì)胞；間質(zhì)細(xì)胞andPrimary culture and morphologic observation of eutopic ectopic endometrial cells

3、 from patients with endomehiosiscultureeutopic andABSTRACT Objective: To explore the method of primary for endometriotic cells and to find out the differences in morphological manifestations among endometriotic cells and endometrial cells sampled from patients with endometriosis endometriosisfree wo

4、men. Methods: Endometriotic and eutopic endometrial cells were cultured by modified method of primary culture. The endometriotic cell types were observed and differentiated under optical and electron microscopes. Results: The success rates for culture of eutopic endometrial cells from endometriosisf

5、ree women and patients with endometriosis were 91. 67% and 93. 75% respectively. The success rate for culture of endometriotic cells was 75. 00%. TheKEY WORDS stromal cellssize of endometriotic glandular cells was similar to those of eutopic endometrial glandular cells from endometriosisfree women a

6、nd patients with endometriosis. The chromatin was manifold and the nucleus was augmented in the endometriotic glandular cells. The endometriotic stromal cells were smaller than the eutopic endometrial stromal cells from endometriosisfree women and patients with endometriosis. Many tiny villi and pro

7、tuberances on plasma membrane could be seen in the endometriotic stromal cells. Conclusion: The success rate for culture of endometriotic cells can be elevated through improving the method of primary culture. The ultrastructures of endometriotic glandular and stromal cells are obviously different fr

8、om those of eutopic endometrial glandular and stromal cells from endometriosisfree women and patients with endometriosis.endometriosis： primary culture： glandular cells：子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis, EM）是子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞 種植于子宮腔以外的雌激素依賴性疾病，具有侵襲性生長、廣泛種植、易復(fù)發(fā) 等惡性腫瘤樣特性。雖然EM的發(fā)現(xiàn)已有一白多年的歷史，但其病因尚不十分清 楚，亦無有效的治療方法。因此，EM是

9、U前婦科學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一。已有的 大量研究表明，異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞與腺上皮細(xì)胞的功能及相互作用不同于 在位內(nèi)膜1,2,而原代培養(yǎng)細(xì)胞山于剛離開機(jī)體，因此能較好地反映體內(nèi)細(xì) 胞的生物學(xué)特性，故原代培養(yǎng)已成為EM體外研究的一個(gè)重要方法。實(shí)踐表明， 在位和異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)成功率并不高，尤其是異位 內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)的成功率較低，故本研究對(duì)EM在位內(nèi)膜細(xì)胞及異位內(nèi)膜細(xì)胞的分 離培養(yǎng)方法進(jìn)行了探索，觀察正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞、EM在位內(nèi)膜細(xì)胞及EM異位 內(nèi)膜細(xì)胞之間形態(tài)學(xué)的差異，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)角度研究EM的發(fā)病機(jī)制，以期為 EM的研究提供有價(jià)值的體外細(xì)胞模型。1 材料與方法材料1. 1. 1

10、 標(biāo)本采集 （1） 2002年12月2003年7月在長海醫(yī)院婦產(chǎn)科 行手術(shù)治療的EM患者共16例，年齡2347歲，平均（41. 13土2. 78）歲；所 有患者均無內(nèi)科合并癥，月經(jīng)規(guī)律；術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未服用激素類藥物；剖腹行 全子宮切除術(shù)或子宮附件切除術(shù)后，分離子宮內(nèi)膜、巧克力糞腫內(nèi)皮及盆腔異 位灶。（2）因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)患者共12例，年齡2347歲，平均（41. 83土2. 79）歲：無內(nèi)科合并癥：術(shù)前 3個(gè)月內(nèi)未服用激素類藥物；剖腹行 子宮附件切除術(shù)后刮取子宮內(nèi)膜。1. 1.2 主要儀器 C02細(xì)胞培養(yǎng)箱（德國Hereaus公司產(chǎn)品）；SWCJ2F 型凈化工作臺(tái)（江蘇蘇州安泰空氣技術(shù)

11、有限公司產(chǎn)品；微量可調(diào)移液器（法國 Glison公司產(chǎn)品）；倒置相差顯微鏡（上海光學(xué)儀器廠產(chǎn)品）；KA1000臺(tái)式離 心機(jī)和SH288型37 C恒溫水浴搖床（上海安亭科技儀器廠產(chǎn)品）。1.1.3 主要試劑F12培養(yǎng)基、達(dá)氏改良依氏培養(yǎng)基（Dulbecoo smodified Eagle s Medium, DMEM）谷氨酰胺（美國 Gibco 公司產(chǎn)品）：I丫型膠原酶、牛血清白蛋白、胎牛血清（美國Sigma公司產(chǎn)品）：DNase I酶（華 美生物工程有限公司產(chǎn)品）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn) 品）：鼠抗人細(xì)胞角蛋0單克隆抗體、鼠抗人波形蛋白單克隆抗體（美國 Santa公司產(chǎn)品）

12、；鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化酶連接法（streptavidinbiotin peroxidase, SP）免疫組織化學(xué)試劑盒（美國 D0KA 公 司產(chǎn)品）。1.2實(shí)驗(yàn)方法將組織標(biāo)本用無菌F12/DMEM （FD）培養(yǎng)液沖洗后，按文獻(xiàn)方法3,4經(jīng)不斷實(shí)踐后改&進(jìn)行分離培養(yǎng)操作。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：將 子宮內(nèi)膜標(biāo)本用無菌生理鹽水沖洗后，放入冰浴的FD培養(yǎng)液中。用FD清洗后 剪碎標(biāo)本，加入FD培養(yǎng)液，再加入IV型膠原酶（終濃度為1 mg/ml） , 37 C 恒溫水浴搖床中消化60 min后,加入DNase I （終濃度為15 U/ml）,繼續(xù)消 化30 mine將消化后的組織吸入離心管中，700 r/

13、min離心7 min,棄上清 液，加入含10%胎牛血清的FD培養(yǎng)液，700 r/min,離心7 min,棄上清液。加 入FD培養(yǎng)液，用吸管將細(xì)胞吹打開，然后經(jīng)100 U （孔徑150 pm）和200 U （孔徑74 Pin）不銹鋼細(xì)胞濾網(wǎng)依次過濾（在培養(yǎng)皿中進(jìn)行）。200 U網(wǎng)上細(xì) 胞團(tuán)主要為腺上皮細(xì)胞。將濾液（主要為間質(zhì)細(xì)胞）經(jīng)1 000 r/min離心7 min,用適量FD培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞。制作3. 0%和1. 5%牛血清白蛋白（bovine serum albumin, BSA）梯度，將間質(zhì)細(xì)胞懸液鋪于梯度層上，室溫沉降2030 mirio棄去上層BSA液，用FD培養(yǎng)液洗滌1遍（1 000

14、 r/min離心7 min）,將 細(xì)胞按5X105/inl的密度接種于含10%胎牛血清的FD培養(yǎng)液中，置于37 C 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用FD培養(yǎng)液沖洗200 U濾網(wǎng)上的細(xì)胞（主要為腺上皮細(xì) 胞），收集沖洗液，700 r/min離心5 min,棄上清，用適量FD培養(yǎng)液懸浮。 將細(xì)胞懸液鋪于裝有8 ml FD培養(yǎng)液的15 ml玻璃離心管中，重力沉降10 min,棄上清，反復(fù)操作4次，使腺上皮細(xì)胞團(tuán)沉降至底層。用含10%胎牛血清 的FD培養(yǎng)液懸浮腺上皮細(xì)胞團(tuán)后，接種于玻璃培養(yǎng)皿中，待混雜其中的間質(zhì)細(xì) 胞貼壁，3 hJ5吸出腺上皮細(xì)胞團(tuán)，磷酸鹽緩沖鹽水（phosphate buffered s

15、aline, PBS）離心洗2遍（700 r/min離心7 min） o用含0. 02%依地酸 （edetic acid, EDTA）的0. 025%胰酶消化5 min,使腺上皮細(xì)胞團(tuán)分散成單個(gè)細(xì)胞，然 后吸入離心管，700 r/min離心7 min。將細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的FD培 養(yǎng)液中，置于37 C 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.3 觀察指標(biāo)與方法1. 3. 1細(xì)胞類型鑒定 細(xì)胞角蛋白（cytokeratin）廣泛存在于人類上皮組織及培養(yǎng)的上皮細(xì)胞內(nèi)，而波形蛋口（vimentin）則主要位于間質(zhì)細(xì)胞中 5。所以分別選擇鼠抗人細(xì)胞角蛋白單克隆抗體和鼠抗人波形蛋白單克隆抗 體作為第一抗體

16、，以SP染色法進(jìn)行染色，對(duì)分離獲得的子宮內(nèi)膜兩種細(xì)胞進(jìn)行 鑒定。1. 3. 2光學(xué)顯微鏡觀察 將無菌蓋玻片放入六孔培養(yǎng)板中，消化分離后的間質(zhì)細(xì)胞接種于六孔培養(yǎng)板蓋玻片上，置于37 C 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。從 培養(yǎng)皿中取出間質(zhì)細(xì)胞生長a好的載玻片，用PBS液洗去原培養(yǎng)液。消化分離 后的腺上皮細(xì)胞予以常規(guī)涂片。間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞用95%乙醇固定，常規(guī) HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。在ECXAI12型透視電鏡下進(jìn)行觀察并攝像。1. 3. 3 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察 將消化分離的正常對(duì)照子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及 腺上皮細(xì)胞，EM在位和異位間質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞分別用2. 5%戊二醛和1%餓 酸雙固定，618環(huán)

17、氧樹脂包埋，LKBV型超薄切片機(jī)切片，酷酸鈾、枸椽酸鉛雙 巫染色，結(jié)果2. 1原代細(xì)胞分離培養(yǎng)情況分離培養(yǎng)的12份正常對(duì)照（子宮肌瘤）子宮內(nèi)膜標(biāo)本，成功11例，分離培養(yǎng)成功率為91.67%；分離培養(yǎng)的16份EM 在位子宮內(nèi)膜標(biāo)本，成功15例，分離培養(yǎng)成功率為93. 75%：分離培養(yǎng)的16份 EM異位子宮內(nèi)膜標(biāo)本，成功12例，分離培養(yǎng)成功率為75. 00%。2. 2 細(xì)胞類型鑒定結(jié)果 腺上皮細(xì)胞角蛋白染色大多數(shù)呈陽性反應(yīng)，細(xì) 胞純度達(dá)85%；間質(zhì)細(xì)胞波形蛋口染色呈陽性反應(yīng)，細(xì)胞純度達(dá)80%,經(jīng)1次傳 代后，純度可達(dá)85%以上。見圖1。2.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果2. 3.1 光學(xué)顯微鏡觀察（1）腺

18、上皮細(xì)胞：正常對(duì)照、EM在位和異位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞均呈團(tuán)狀排列生長，為致密細(xì)胞集落，細(xì)胞呈多角形或蝌 蚪形，邊界清楚，排列緊密，胞漿飽滿，核圓大。（2）間質(zhì)細(xì)胞：EM在位和 異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞接種24 h后基本都能貼壁。正常對(duì)照子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞 與EM在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞體積均較大，呈多角形或梭形排列，胞漿薄而透 明，核橢圓。細(xì)胞融合后類似成纖維細(xì)胞，貼壁后呈旋渦狀生長。EM異位子宮 內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)較在位間質(zhì)細(xì)胞小，分散生長，呈伸展、挺直狀，中間稍 寬，兩頭尖，似紡錘狀。見圖2。圖1 EM異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞形態(tài)鑒定（SP染色, X300）（略）Figure 1 Morpho

19、logical identification of human endometriotic stromal and glandular cells (SP staining, X300)A: Endometriotic stromal cells： B: Endometriotic glandular cells.A: Eutopic endometrial glandular cells from endometriosisfree women: B: Eutopic endometrial stromal cells from endometriosisfree women: C: Eut

20、opic endometrial glandular cells from patients with endometriosis： D: Eutopic endometrial stromal cells from patients with endometriosis： E: Endometriotic glandular cells： F: Endometriotic stromal cells.圖2 正常對(duì)照和EM在位、異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞形態(tài)特 征（HE染色，X300）（略）Figure 2 Morphological characterization of glandu

21、lar and stromal cells from patients with endometriosis and endometriosisfree women (HE staining, X 300)2. 3.2 電子顯微鏡觀察（1）正常對(duì)照子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞：細(xì)胞膜表面可見微絨毛，部分細(xì)胞膜表面有長絨毛，細(xì)胞間見緊密連接及橋粒連接， 胞漿線粒體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較豐S，可見脂滴，核大，核仁明顯。（2）正常 對(duì)照子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞：一種是呈多角形的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，具有上皮樣形 態(tài)的細(xì)胞表面未見微絨毛，細(xì)胞間無連接結(jié)構(gòu)，胞漿有散在核糖體及粗面內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)，可見溶酶體及一些糞泡，核膜平滑，核染色質(zhì)

22、均勻。另一種細(xì)胞呈梭形， 電鏡下見細(xì)胞無微絨毛，無連接結(jié)構(gòu)，胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng).核糖體和空泡較多， 外周胞漿中有豐S的微絲。（3） EM在位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞：細(xì)胞成團(tuán)，有 極性，圓形，胞膜表面有微絨毛，核大，呈橢圓形或有切跡，細(xì)胞間見橋粒連 接，胞漿線粒體、核糖體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較豐S，可見脂滴，核仁明顯。（4） EM 在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞：電鏡下見細(xì)胞表面無微絨毛，無連接結(jié)構(gòu)，胞漿內(nèi)有 線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體和空泡較多，溶酶體多見，核大，有不規(guī)則切 跡、凹陷，核內(nèi)染色體稀疏，核仁明顯。（5） EM異位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞： 細(xì)胞游離，呈橢圓形，表面有細(xì)小微絨毛，細(xì)胞間有橋粒連接及緊密連接，核 圓

23、大，異染色質(zhì)多，胞漿內(nèi)多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、溶酶體及空泡。（6） EM 異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞：呈長梭形細(xì)胞，有較多微絨毛和胞漿突起，核大，橢 圓形，核仁明顯，細(xì)胞間少有橋粒連接，胞漿內(nèi)有不規(guī)則線粒體和空泡，粗面 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體可見。見圖3。圖3 正常對(duì)照和EM在位、異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞形態(tài)的 電鏡觀察（略）Figure 3 Morphological characterization of glandular and stromal cells from patients with endometriosis and endometriosisfree women by elect

24、ron microscopeA: Eutopic endometrial glandular cells from endometriosisfree women (X11 000): B: Eutopic endometrial stromal cells from endometriosisfree women (X9 300) : C: Eutopic endometrial glandular cells from patients with endometriosis (X11 000) : D: Eutopic endometrial stromal cells from pati

25、ents with endometriosis (X11 000): E: Endometriotic glandular cells (X13 000): F: Endometriotic stromal cells (X6 300).3 討論EM的病因至今仍不清楚，較為經(jīng)典并被廣泛接受的是經(jīng)血逆流學(xué)說。隨著 腹腔鏡的廣泛應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)經(jīng)血逆流在生育期婦女十分普遍，但發(fā)展為EM的則只 是少數(shù)。U前主要有兩種觀點(diǎn)：一種認(rèn)為EM與免疫缺陷有關(guān)，山于EM患者存 在免疫缺陷，不能清除隨經(jīng)血逆流的“異位”子宮內(nèi)膜細(xì)胞，而導(dǎo)致其在盆腔 內(nèi)種植6,7；另一種觀點(diǎn)則提出EM的發(fā)生與EM患者在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的特

26、性有關(guān)，山于其發(fā)生了某些類似腫瘤細(xì)胞樣的改變，使之逃脫了免疫監(jiān)視和清 除而得以在盆腔內(nèi)種植8 有學(xué)者提出子宮內(nèi)膜干細(xì)胞假說，即隨經(jīng)血逆流 的具有分化潛能和自我更新特征的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞促使了最初異位病灶的產(chǎn) 生，并維持病灶的存在，促使病灶的進(jìn)一步發(fā)展9。無論何種學(xué)說，顯然 EM在位、異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞與正常生育期婦女在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞在基因、蛋口 表達(dá)及生物學(xué)行為等方面均存在差異。因此，原代培養(yǎng)正常對(duì)照在位子宮內(nèi)膜 細(xì)胞和EM在位及異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞，對(duì)于研究細(xì)胞的生長、分化和代謝以及卵 巢激素的作用機(jī)制，揭示EM的發(fā)病機(jī)制及臨床治療均具有重要意義。但是，U前在位和異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞的分

27、離培養(yǎng)成功率 并不高，尤其是異位子宮內(nèi)膜養(yǎng)需注意以下兒點(diǎn)：（1）體積較大的卵巢巧克力 糞腫，其內(nèi)皮分離培養(yǎng)后，細(xì)胞數(shù)量很少，不易分離培養(yǎng)成功。（2）巧克力糞 腫內(nèi)壁有新鮮出血且糞腫體積較小（直徑V3 cm）,分離培養(yǎng)后的細(xì)胞容易生 長。（3）子宮韌帶異位結(jié)節(jié)以及腹膜異位灶的分離培養(yǎng)不易成功，但取材時(shí)若 能獲取較大的紫紅色異位結(jié)節(jié)，亦可分離出數(shù)量較多的間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì) 胞。（4）本研究中內(nèi)膜標(biāo)本消化時(shí)使用的是IV型膠原酶和DNase I ,雖然價(jià)格 較常用的胰酶貴，但是經(jīng)其消化后的間質(zhì)細(xì)胞容易貼壁生長。可以適當(dāng)延長【V 型膠原酶和DNase I的消化時(shí)間（一般為2 h）,使內(nèi)膜組織充分消化以獲

28、取更 多的細(xì)胞。而胰酶消化時(shí)間過長會(huì)影響細(xì)胞的活性，使間質(zhì)細(xì)胞不易貼壁，其 至造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗。（5）在子宮內(nèi)膜細(xì)胞分離培養(yǎng)過程中，離心次數(shù)不宜過 多，離心轉(zhuǎn)速不宜過高，否則易造成細(xì)胞丟失，并影響細(xì)胞活性。在本研究 中，間質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的離心次數(shù)不超過4次，而離心轉(zhuǎn)速最高為1 000 r/mirio離體在位和異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的爬片，排除了內(nèi)膜組織中非內(nèi)膜成分的干 擾，有利于進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，使免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)定性、定位準(zhǔn)確，還能 進(jìn)行半定量分析12。在光鏡及電鏡下，可對(duì)3種形態(tài)特征的細(xì)胞類型進(jìn)行鑒別：（1）腺上皮細(xì) 胞；（2） 2種形態(tài)的間質(zhì)細(xì)胞，其中一種是呈多角形的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，5

29、3 一種是呈梭形的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。透視電鏡下EM異位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中 異染色質(zhì)增多，核增大，這種形態(tài)與癌細(xì)胞基本相似，可能與EM的惡性行為有 關(guān)。而EM異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的體積比正常對(duì)照及EM在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì) 胞小，并且其細(xì)胞膜表面有較多的微絨毛和胞漿突起，說明EM異位子宮內(nèi)膜間 質(zhì)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力和侵襲能力增強(qiáng)。Caetje等13用膠原凝膠體實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原 代培養(yǎng)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的侵襲活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的侵襲活性 與轉(zhuǎn)移性膀胱癌細(xì)胞株（E128）相似，而正常在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞與非轉(zhuǎn)移性癌 細(xì)胞株（RT112）相似，表明無侵襲性，證實(shí)了 EM具有惡性腫瘤樣的侵襲特征。而本實(shí)驗(yàn)中所

30、觀察到EM異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)改變，也可能與這種 惡性腫瘤樣的侵襲特征有關(guān)。此外，EM異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)存在不規(guī) 則線粒體，是否與這種侵襲特征相關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。本研究中采取的內(nèi)膜組織標(biāo)本均為增生期內(nèi)膜，今后的研究中需注意補(bǔ)充 分泌期的內(nèi)膜標(biāo)本，以進(jìn)一步完善對(duì)離體在位和異位子宮內(nèi)膜的觀察和監(jiān)測(cè)， 為EM研究提供充分的理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)1 Harada T, Kaponis A, Iwabe endometrium and endometriosis. HumT, et al. Apoptosis in human Reprod Update, 2004, 10(1) : 293

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32、索.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2002, 11(1): 3032.4王小敬，黃海鵬，何福仙簡(jiǎn)易人子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)法及其優(yōu)點(diǎn).贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002, 22 (3) : 25625&5 Matthews CJ, Redfern CP, Hirst BH, et al. Characterization of human purified epithelial and stromal cells from endometrium and endometriosis in tissue culture. Fertil Steril,1992, 57 (5): 990997.6 SharpeTimms KL, Zimmer RL, Rieke EA, et haptog