人可溶性白細胞分化抗原檢測試劑盒說明書題庫

1、人可溶性白細胞分化抗原28（sCD28）ELISA僉測試劑盒說明書本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿樊克生物專業(yè)供應(yīng)：使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本可溶性白細胞分化抗原28（SCD28）含量。試驗原理：sCD28試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA.已知sCD28濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將SCD28和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRR再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中SCD28的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8C保

2、存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗sCD2肌體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0

3、ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備材料1.蒸儲水。2,加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4. 使用一次性

4、的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7. 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。8. 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、 血清-操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清

5、和紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿EDTA檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液1000Xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿-將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000Xg離心10分鐘，取上清液5、 保存如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70C保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37c或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1.標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:80ng/ml（6號標(biāo)準(zhǔn)品）

6、原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40ng/ml（5號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20ng/ml（4號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ng/ml（3號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0ng/ml（2號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5ng/ml（1號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50uL2. 洗滌緩沖液(50X)的稀釋：蒸儲水50倍稀釋操作步驟1 .使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫

7、，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2 .根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37c溫育1小時。4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37c溫育30分鐘。6.

8、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻，37c溫育10分鐘。避免光照。8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

9、樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果?？扇苄园准毎只乖?8（sCD2&ELISA式劑盒性能1 .靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2 .特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。3 .重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的sCD2批準(zhǔn)

10、品濃度為橫坐標(biāo)（X）,做得相應(yīng)的曲線，樣品的sCD28含量可中M據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍：0-80ng/ml4、敏感度：0.1ng/mlTheperformanceofkit:1 sensitivity:minimumdetectionconcentrationislessthan1standard.Linearityofdilution.SamplelinearregressionandtheexpectedconcentrationcorrelationcoefficientRvalueis0.990.2 :nospecificreactionwithother

11、cytokines.3 repeatability:plate,platebetweenthecoefficientsofvariationwerelessthan10%.HumantypeIIIprocollagenaminoterminalpeptideELISAkitsteps:1 beforeuse,allreagentsandmixing.Donotallowliquidtoproducealargenumberofbubbles,soastoavoidaddingalargenumberofbubbles,resultingintheadditionoftheerror.2 acc

12、ordingtodeterminethenumberofsamplenumberplusstandardstripnumber.Eachstandardandblankholeisrecommendedtodothehole.Eachsamplecanbemadeaccordingtoitsownquantity,andcanbeusedasaholeinthehole.3 dilutedafterstandard50ulinreactionhole,addedtothesample50ULinreactionholetobemeasured.Immediatelyjoinedthe50ULa

13、ntibodybiotin.Coverthemembraneplate,gentlyoscillatingmixing,37degreesCelsiusfor45minutes.4 leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid,oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times.Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce.5 perholeaddin

14、gchainaffinityenzyme-HRP100ul,gentlyoscillatingmixing,37degrees30minutesincubation.6 leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid,oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times.Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce.7 perholeaddingsubst

15、rateA,B50ul,gentlyoscillatingmixing,37degrees5minutesincubation.Avoidlight.8 removeELISAplate,quicklyadd50ulterminatedliquid,addingthestopsolutionimmediatelyafterthedeterminationresults.9 oddeterminationofeachholeatthewavelengthof450nm.Theresultofjudgmentandanalysis:1, instrumentvalue:YuBo450nmELISA

16、odreadtheholeontheinstrument2, totheODvalueasaverticalcoordinate(y),correspondingotstandardconcentrationsasahorizontalcoordinate(x),dohavecorrespondingcurve,sampleotcontentcanbeaccordingtotheODvaluebystandardcurveconversionoutcorrespondingconcentration,multipliedbythedilutionmultiple;orwiththestandardconc