液質(zhì)聯(lián)用原理及應(yīng)用

1、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的原理及應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)別: 氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)對(duì)比。 液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問(wèn)題：不揮發(fā)性化合物分析測(cè)定；極性化合物的分析測(cè)定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測(cè)定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測(cè)定；沒(méi)有商品化的譜庫(kù)可對(duì)比查詢(xún)，只能自己建庫(kù)或自己解析譜圖。 目前的有機(jī)質(zhì)譜和生物質(zhì)譜儀，除了GC-MS的EI和CI源，離子化方式有大氣壓電離（API）（包括大氣壓電噴霧電離ESI、大氣壓化學(xué)電離APCI、大氣壓光電離AP

2、PI）與基質(zhì)輔助激光解吸電離。前者常采用四極桿或離子阱質(zhì)量分析器，統(tǒng)稱(chēng)API-MS。后者常用飛行時(shí)間作為質(zhì)量分析器，所構(gòu)成的儀器稱(chēng)為基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（MALDI-TOF-MS）。API-MS的特點(diǎn)是可以和液相色譜、毛細(xì)管電泳等分離手段聯(lián)用，擴(kuò)展了應(yīng)用范圍，包括藥物代謝、臨床和法醫(yī)學(xué)、環(huán)境分析、食品檢驗(yàn)、組合化學(xué)、有機(jī)化學(xué)的應(yīng)用等；MALDI-TOF-MS的特點(diǎn)是對(duì)鹽和添加物的耐受能力高，且測(cè)樣速度快，操作簡(jiǎn)單。 質(zhì)譜原理簡(jiǎn)介： 質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測(cè)量各種離子譜峰的強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)分析目的的一種分析方法。以檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，離子質(zhì)荷比

3、為橫坐標(biāo)所作的條狀圖就是我們常見(jiàn)的質(zhì)譜圖。 常見(jiàn)術(shù)語(yǔ): 質(zhì)荷比: 離子質(zhì)量(以相對(duì)原子量單位計(jì))與它所帶電荷(以電子電量為單位計(jì))的比值,寫(xiě)作m/Z. 峰: 質(zhì)譜圖中的離子信號(hào)通常稱(chēng)為離子峰或簡(jiǎn)稱(chēng)峰. 離子豐度: 檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度. 基峰: 在質(zhì)譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強(qiáng)度最大的離子峰稱(chēng)作基峰. 總離子流圖；質(zhì)量色譜圖；準(zhǔn)分子離子；碎片離子；多電荷離子；同位素離子 總離子流圖: 在選定的質(zhì)量范圍內(nèi)，所有離子強(qiáng)度的總和對(duì)時(shí)間或掃描次數(shù)所作的圖,也稱(chēng)TIC圖.質(zhì)量色譜圖 指定某一質(zhì)量(或質(zhì)荷比)的離子其強(qiáng)度對(duì)時(shí)間所作的圖. 利用質(zhì)量色譜圖來(lái)確定特征離子，在復(fù)雜混合物分析及痕量分析時(shí)是LC

4、/MS測(cè)定中最有用的方式。當(dāng)樣品濃度很低時(shí)LC/MS的TIC上往往看不到峰，此時(shí)，根據(jù)得到的分子量信息，輸入M+1或M+23等數(shù)值，觀(guān)察提取離子的質(zhì)量色譜圖，檢驗(yàn)直接進(jìn)樣得到的信息是否在LC/MS上都能反映出來(lái)，確定LC條件是否合適，以后進(jìn)行MRM等其他掃描方式的測(cè)定時(shí)可作為參考。1.0 指與分子存在簡(jiǎn)單關(guān)系的離子，通過(guò)它可以確定分子量.液質(zhì)中最常見(jiàn)的準(zhǔn)分子離子峰是M+H+ 或M-H- . 在ESI中, 往往生成質(zhì)量大于分子量的離子如M+1,M+23,M+39,M+18.稱(chēng)準(zhǔn)分子離子,表示為:M+H+,M+Na+等碎片離子： 準(zhǔn)分子離子經(jīng)過(guò)一級(jí)或多級(jí)裂解生成的產(chǎn)物離子. 碎片峰的數(shù)目及其豐度則

5、與分子結(jié)構(gòu)有關(guān),數(shù)目多表示該分子較容易斷裂,豐度高的碎片峰表示該離子較穩(wěn)定,也表示分子比較容易斷裂生成該離子。多電荷離子： 指帶有2個(gè)或更多電荷的離子,常見(jiàn)于蛋白質(zhì)或多肽等離子.有機(jī)質(zhì)譜中,單電荷離子是絕大多數(shù),只有那些不容易碎裂的基團(tuán)或分子結(jié)構(gòu)-如共軛體系結(jié)構(gòu)-才會(huì)形成多電荷離子.它的存在說(shuō)明樣品是較穩(wěn)定的.采用電噴霧的離子化技術(shù),可產(chǎn)生帶很多電荷 的離子,最后經(jīng)計(jì) 算機(jī)自動(dòng)換算成單 質(zhì)/荷比離子。 同位素離子 由元素的重同位素構(gòu)成的離子稱(chēng)為同位素離子. 各種元素的同位素,基本上按照其在自然界的豐度比出現(xiàn)在質(zhì)譜中,這對(duì)于利用質(zhì)譜確定化合物及碎片的元素組成有很大方便, 還可利用穩(wěn)定同位素合成標(biāo)

6、記化合物,如:氘等標(biāo)記化合物,再用質(zhì)譜法檢出這些化合物,在質(zhì)譜圖外貌上無(wú)變化,只是質(zhì)量數(shù)的位移,從而說(shuō)明化合物結(jié)構(gòu),反應(yīng)歷程等 如何看質(zhì)譜圖： (1)確定分子離子,即確定分子量 氮規(guī)則：含偶數(shù)個(gè)氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是偶數(shù)，含奇數(shù)個(gè)氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是奇數(shù)。與高質(zhì)量碎片離子有合理的質(zhì)量差，凡質(zhì)量差在38和1013，2125之間均不可能，則說(shuō)明是碎片或雜質(zhì)。 (2)確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式 高分辨質(zhì)譜可以由分子量直接計(jì)算出化合物的元素組成從而推出分子式 低分辨質(zhì)譜利用元素的同位素豐度，例: (3)峰強(qiáng)度與結(jié)構(gòu)的關(guān)系 豐度大反映離子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定 在元素周期表中自上而下，從右至左，雜原

7、子外層未成鍵電子越易被電離，容納正電荷能力越強(qiáng)，含支鏈的地方易斷，這同有機(jī)化學(xué)基本一致，總是在分子最薄弱的地方斷裂。不同類(lèi)型有機(jī)物有不同的裂解方式 相同類(lèi)型有機(jī)物有相同的裂解方式,只是質(zhì)量數(shù)的差異需要經(jīng)驗(yàn)記憶。 質(zhì)譜解析的一般步驟 (適于低分辨小分子譜圖,若已經(jīng)是高分辨質(zhì)譜圖得到元素組成更好) (1)核對(duì)獲得的譜圖,扣除本底等因素引起的失真,考慮操作條件是否適當(dāng) (2)綜合樣品其他知識(shí)：例如熔點(diǎn)，沸點(diǎn)，溶解性等理化性質(zhì)，樣品來(lái)源，光譜，波譜數(shù)據(jù)等.(3) 盡可能判斷出分子離子。 (4) 假設(shè)和排列可能的結(jié)構(gòu)歸屬：高質(zhì)量離子所顯示的，在裂解中失去的中性碎片，如M-1，M-15，M-18，M-20

8、，M-31.意味著失H，CH3，H2O，HF，OCH3. (5)假設(shè)一個(gè)分子結(jié)構(gòu)，與已知參考譜圖對(duì)照，或取類(lèi)似的化合物，并作出它的質(zhì)譜進(jìn)行對(duì)比。 有機(jī)質(zhì)譜的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn): (1)定分子量準(zhǔn)確，其它技術(shù)無(wú)法比。 (2)靈敏度高，常規(guī)10-710-8g,單離子檢測(cè)可達(dá)10-12g。 (3)快速，幾分甚至幾秒。 (4)便于混合物分析，LC/MS，MS/MS對(duì)于難分離的混合物特別有效, 其它技術(shù)無(wú)法勝任。 (5)多功能，廣泛適用于各類(lèi)化合物。 局限性: (1)異構(gòu)體，立體化學(xué)方面區(qū)分能力差。 (2)重復(fù)性稍差，要嚴(yán)格控制操作條件。所以不能象低場(chǎng)NMR，IR等自己動(dòng)手，須專(zhuān)人操作。 (3)有離子源產(chǎn)生的記

9、憶效應(yīng)，污染等問(wèn)題。 (4)價(jià)格稍顯昂貴，操作有點(diǎn)復(fù)雜。 質(zhì)譜儀器： 質(zhì)譜儀由以下幾部分組成 數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 離子源 質(zhì)量分析器 檢測(cè)接收器 真空系統(tǒng) 真空系統(tǒng) 質(zhì)譜儀的離子源、質(zhì)量分析器和檢測(cè)器必須在高真空狀態(tài)下工作，以減少本底的干擾，避免發(fā)生不必要的離子-分子反應(yīng)。所以質(zhì)譜反應(yīng)屬于單分子分解反應(yīng)。利用這個(gè)特點(diǎn)，我們用液質(zhì)聯(lián)用的軟電離方式可以得到化合物的準(zhǔn)分子離子，從而得到分子量。由機(jī)械真空泵(前極低真空泵)，擴(kuò)散泵或分子泵(高真空泵)組成真空機(jī)組，抽取離子源和分析器部分的真空。 只有在足夠高的真空下，離子才能從離子源到達(dá)接收器，真空度不夠則靈敏度低。 進(jìn)樣系統(tǒng) 把分析樣品導(dǎo)入離子

10、源的裝置，包括：直接進(jìn)樣，GC，LC及接口，加熱進(jìn)樣，參考物進(jìn)樣等。離子源 使被分析樣品的原子或分子離化為帶電粒子(離子)的裝置，并對(duì)離子進(jìn)行加速使其進(jìn)入分析器，根據(jù)離子化方式的不同，有機(jī)質(zhì)譜中常用的有如下幾種，其中EI，ESI最常用。EI:電子轟擊電離硬電離。 CI:化學(xué)電離核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。 FD:場(chǎng)解吸目前基本被FAB取代。 FAB:快原子轟擊或者銫離子 (LSIMS,液體二次離子質(zhì)譜 ) 。 ESI:電噴霧電離屬最軟的電離方式。適宜極性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白質(zhì)分子多肽等) APCI:大氣壓化學(xué)電離同上，更適宜做弱極性小分子。 APPI:大氣壓光噴霧電離同上，更適宜做非極

11、性分子。 MALDI:基體輔助激光解吸電離。通常用于飛行時(shí)間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合蛋白質(zhì)，多肽等大分子 其中ESI，APCI，APPI統(tǒng)稱(chēng)大氣壓電離(API) 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的離子源:ESI電噴霧電離源 APCI大氣壓化學(xué)電離源 電噴霧（ESI）的特點(diǎn) 通常小分子得到M+H+ +,M+Na+ 或M-H-單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，由于質(zhì)譜儀測(cè)定質(zhì)/荷比，因此質(zhì)量范圍只有幾千質(zhì)量數(shù)的質(zhì)譜儀可測(cè)定質(zhì)量數(shù)十幾萬(wàn)的生物大分子。 電噴霧電離是最軟的電離技術(shù)，通常只產(chǎn)生分子離子峰，因此可直接測(cè)定混合物，并可測(cè)定熱不穩(wěn)定的極性化合物；其易形成多電荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子；通過(guò)調(diào)

12、節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂（源內(nèi)CID）測(cè)定化合物結(jié)構(gòu)。 大氣壓化學(xué)電離（APCI）特點(diǎn) 大氣壓化學(xué)電離也是軟電離技術(shù)，只產(chǎn)生單電荷峰，適合測(cè)定質(zhì)量數(shù)小于2000Da的弱極性的小分子化合物；適應(yīng)高流量的梯度洗脫/高低水溶液變化的流動(dòng)相；通過(guò)調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂。 電噴霧與大氣壓化學(xué)電離的比較電離機(jī)理：電噴霧采用離子蒸發(fā)，而APCI電離是高壓放電發(fā)生了質(zhì)子轉(zhuǎn)移而生成MH+或M-H-離子。 樣品流速：APCI源可從0.2到2 mlmin；而電噴霧源允許流量相對(duì)較小,一般為0.2-1 mlmin. 斷裂程度；APCI源的探頭處于高溫，對(duì)熱不穩(wěn)定的化合物就足以使其分解. 靈敏度：通常認(rèn)為電噴霧

13、有利于分析極性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更適合于分析極性較小的化合物。 多電荷：APCI源不能生成一系列多電荷離子 NanoSpray 離子源 專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的 NanoSpray 離子源特別適合于做微量的生化樣品，其流速范圍可從 5nLmin到luLmin。一滴樣品就可做數(shù)小時(shí)的分析?？稍谧钚〉臉悠废牧肯芦@得最大靈敏度。靈敏度可高達(dá)fmole。并可直接與微孔HPLC聯(lián)用。 正負(fù)離子模式:一般的商品儀器中,ESI和APCI接口都有正負(fù)離子測(cè)定模式可供選擇。 根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇，也可兩種模式同時(shí)進(jìn)行 質(zhì)量分析器: 是質(zhì)譜儀中將離子按質(zhì)荷比分開(kāi)的部分,離子通過(guò)分析器后,按

14、不同質(zhì)荷比(M/Z)分開(kāi),將相同的M/Z離子聚焦在一起,組成質(zhì)譜。 質(zhì)量分析器的分類(lèi)： 雙聚焦扇形磁場(chǎng)-電場(chǎng)串聯(lián)儀器(sector). 四極質(zhì)譜儀(Q). 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(TOF). 離子阱質(zhì)譜儀（TRAP） 付利葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS). 四極+TOF（Q-TOF） 串列式多級(jí)質(zhì)譜儀三重四極（QqQ） (MS/MS) TOF+TOF進(jìn)行MS/MS的儀器從原理上可分為兩類(lèi)第一類(lèi)儀器利用質(zhì)譜在空間中的順序，是由兩臺(tái)質(zhì)譜儀串聯(lián)組裝而成。即前面列出的串列式多級(jí)質(zhì)譜儀。 第二類(lèi)利用了一個(gè)質(zhì)譜儀時(shí)間順序上的離子儲(chǔ)存能力，由具有存儲(chǔ)離子的分析器組成，如離子回旋共振儀（ICR）和離子阱

15、質(zhì)譜儀。但不能進(jìn)行母離子掃描或中性丟失。 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的質(zhì)量分析器類(lèi)型：串聯(lián)四極質(zhì)譜儀(MS/MS) ： 三重四極（QqQ）離子源第一分析器碰撞室第二分析器接收器 MS1 MS2 Q1 q2 Q3QqQ儀器可以方便的改變離子的動(dòng)能，因此掃描速度快，體積小，常作為臺(tái)式進(jìn)入常規(guī)實(shí)驗(yàn)室，缺點(diǎn)是質(zhì)量范圍及分辨率有限，不能進(jìn)行高分辨測(cè)定，只能做到單位質(zhì)量分辨。（通過(guò)高分辨能得到化合物的分子式）在液質(zhì)聯(lián)機(jī)中使用的碎片化手段，能量都是以碰撞的形式輸送給分子離子，這個(gè)能量足以使得處在能量亞穩(wěn)態(tài)分子中的某些化學(xué)鍵斷裂并使一些特定的分子發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。 碰撞誘導(dǎo)解離CID質(zhì)譜：選擇一定質(zhì)量的離子作為母體離子，進(jìn)入碰撞

16、室，室內(nèi)充有靶子反應(yīng)氣體(碰撞氣體： N2、He、Ar、 Xe、CH4等) ，發(fā)生離子分子碰撞反應(yīng)，從而產(chǎn)生子離子，再經(jīng)MS2的分析器及接受器得到子離子質(zhì)譜，一般稱(chēng)做CID (collision-induced dissociation)譜 影響CID質(zhì)譜的因素：較大影響的因素有：所用碰撞氣體的種類(lèi)，壓力，離子的能量，儀器的配置以及離子電荷狀態(tài) 由于在不同的儀器上不可能在完全相同的條件下去分析樣品，任何一個(gè)給定的化合物將在不同的條件下給出差別或大或小的質(zhì)譜，尤其是各個(gè)離子峰的相對(duì)豐度的差別幾乎是無(wú)法避免的。因而目前尚難以建立商品化的譜庫(kù)供檢索使用，只能進(jìn)行人工解析或自己建庫(kù)。大氣壓電離技術(shù)中產(chǎn)

17、生的離子為偶數(shù)電子離子，其主要的碎片應(yīng)由化學(xué)鍵的誘導(dǎo)斷裂和重排反應(yīng)來(lái)產(chǎn)生，所以在EI質(zhì)譜解析中總結(jié)出的偶數(shù)電子離子的開(kāi)裂規(guī)則一般可適用于CID質(zhì)譜的解釋。 檢測(cè)接收器：接收離子束流的裝置，有：電子倍增器、光電倍增器、微通道板數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng) 將接收來(lái)的電信號(hào)放大、處理并給出分析結(jié)果及控制質(zhì)譜儀個(gè)部分工作。 從幾伏低壓到幾千伏高壓。 LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化1.接口的選擇： ESI適合于中等極性到強(qiáng)極性的化合物分子，特別是那些在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個(gè)質(zhì)子的大分子（如蛋白質(zhì)） APCI不適合可帶多個(gè)電荷的大分子，其優(yōu)勢(shì)在于弱極性或中等極性的小分子的分析。 2.正、負(fù)離子模式

18、的選擇： 選擇的一般原則為：正離子模式：適合于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對(duì)樣品加以酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時(shí)可優(yōu)先考慮使用正離子模式。 負(fù)離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙胺對(duì)樣品進(jìn)行堿化。樣品中含有較多的強(qiáng)伏電性基團(tuán)，如含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試使用負(fù)離子模式。 3.流動(dòng)相的選擇 常用的流動(dòng)相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以加入易揮發(fā)酸堿如甲酸、乙酸和氨水等調(diào)節(jié)pH值。 LCMS接口避免進(jìn)入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必須lmmol/l。（鹽分太高會(huì)抑制離子源的信號(hào)和堵塞噴霧針及污染儀器）含甲酸（或乙酸

19、）2。含三氟乙酸0.5。含三乙胺l。含醋酸銨10一5 mmol/l。 送樣前一定要摸好LC條件，能夠基本分離，緩沖體系符合MS要求。 4.流量和色譜柱的選擇不加熱ESI的最佳流速是150ulmin，應(yīng)用4.6 mm內(nèi)徑LC柱時(shí)要求柱后分流，目前大多采用 l2.1 mm內(nèi)徑的微柱，TIS源最高允許lmlmin，建議使用200400ulmin APCI的最佳流速lmlmin，常規(guī)的直徑4.6mm柱最合適。 為了提高分析效率，常采用 100 mm的短柱（此時(shí)UV圖上并不能獲得完全分離，由于質(zhì)譜定量分析時(shí)使用MRM的功能，所以不要求各組分沒(méi)有完全分離）。這對(duì)于大批量定量分析可以節(jié)省大量的時(shí)間。 5.輔

20、助氣體流量和溫度的選擇霧化氣對(duì)流出液形成噴霧有影響，干燥氣影響噴霧去溶劑效果，碰撞氣影響二級(jí)質(zhì)譜的產(chǎn)生。 操作中溫度的選擇和優(yōu)化主要是指接口的干燥氣體而言，一般情況下選擇干燥氣溫度高于分析物的沸點(diǎn)20 左右即可。對(duì)熱不穩(wěn)定性化合物，要選用更低的溫度以避免顯著的分解。 選用干燥氣溫度和流量大小時(shí)還要考慮流動(dòng)相的組成，有機(jī)溶劑比例高時(shí)可采用適當(dāng)?shù)偷臏囟群土髁啃∫稽c(diǎn)的。 樣品的預(yù)處理：為什么要進(jìn)行樣品的預(yù)處理： 從保護(hù)儀器角度出發(fā)，防止固體小顆粒堵塞進(jìn)樣管道和噴嘴，防止污染儀器，降低分析背景，排除對(duì)分析結(jié)果的干擾。 要求獲得最佳的分析結(jié)果，從ESI電離的過(guò)程分析：ESI電荷是在液滴的表面，樣品與雜質(zhì)

21、在液滴表面存在競(jìng)爭(zhēng)，不揮發(fā)物（如磷酸鹽等）防礙帶電液滴表面揮發(fā)，大量雜質(zhì)防礙帶電樣品離子進(jìn)入氣相狀態(tài)，增加電荷中和的可能。 樣品的預(yù)處理常用方法 a）超濾 b）溶劑萃取去鹽 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）凈化去鹽 e）色譜分離 反相色譜分離 親和技術(shù)分離 f）甲醇或乙腈沉淀蛋白 g）酸水解，酶解 h）衍生化 化合物鑒別 全掃描方式（Q1掃描） 全掃描數(shù)據(jù)采集可以得到化合物的準(zhǔn)分子離子，從而可判斷出化合物的分子量，用于鑒別是否有未知物，并確認(rèn)一些判斷不清的化合物，如合成化合物的質(zhì)量及結(jié)構(gòu)。子離子分析（ MS/MS ） 子離子，用于結(jié)構(gòu)判斷(得到化合物的二級(jí)譜圖即碎片離子)和選擇離子

22、對(duì)作多種反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。 子離子譜圖與錐體電壓斷裂譜圖（源內(nèi)CID）可能十分相似，所不同的是子離子質(zhì)譜圖已知只有一種質(zhì)量通過(guò)MS1，因此也已知所有碎片離子都是由我們所選定的母離子所產(chǎn)生的，所以我們更相信由MS/MS產(chǎn)生的譜圖的純度。用大氣壓電離質(zhì)譜儀可以得到分子量信息影響分子量測(cè)定的因素1）pH的影響：正離子方式pH要低些，負(fù)離子方式pH要高些，除對(duì)離子化有影響外，還影響LC的峰形。 2）氣流和溫度：當(dāng)水含量高及流量大時(shí)要相應(yīng)增加。 3）溶劑和緩沖液流量：流速適當(dāng)高可以提高出峰的靈敏度。 4）溶劑和緩沖液的類(lèi)型：通常正離子用甲醇好，負(fù)離子乙腈好些 5）選擇合適的液相色譜類(lèi)型：正相、反相、選

23、擇合適的色譜柱 6）合適的電壓：DP電壓高時(shí)，樣品在源內(nèi)分解或碎裂；高DP電壓時(shí)回使多電荷離子比例低，多聚體也減少 7）樣品結(jié)構(gòu)和性質(zhì) 8）雜質(zhì)的影響：溶劑的純度、水的純凈程度等。當(dāng)成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)使被測(cè)物離子化不好，同時(shí)使LC分離不好 9）樣品濃度不夠，有時(shí)需要濃縮 分子量測(cè)定中的誤判 溶劑中的雜質(zhì) 來(lái)自于塑料添加劑的峰 樣品容器不干凈，常見(jiàn)表面活性劑的峰 進(jìn)樣系統(tǒng)污染 樣品在源內(nèi)碎裂，形成碎片離子 LC-MS中常見(jiàn)的本底離子 m/z 50-150, 溶劑離子，(H2O)nH+ ，n= 3-112 m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中鄰苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2