花青素提取借鑒材料

1、水文僅供琴左,取用取腳可做I腺桑根酒渣中花青素提取1 1材料與方法1.1材料桑棋果酒酒渣.1.2試劑藥品試驗(yàn)所用95%乙醇、濃鹽酸、30%過氧化氫、Na2SO3等試劑均為分析純.1.3主要儀器電子分析天平、分光光度計(jì)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、酸度計(jì)、高速冷凍離心機(jī)、電熱恒溫水浴鍋等.1.4方法稀HCl+95%乙醇提取樣品稱量,用提取劑提取,過濾減壓過濾/板框過濾,所得的提取液按一定比例稀釋pH1.0氯化鉀緩沖液和pH4.5醋酸鈉緩沖液稀釋后在分光光度計(jì)上測出OD值,以O(shè)D值代表桑根紅色素的含量.1.4.1不同溶劑的吸光光譜及提取效果比擬分別以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙

2、醇1:1、0.10%稀HCl+95%乙醇1:1作為提取劑,以物料與提取劑之比1:10提取桑棋色素,提取液經(jīng)3倍稀釋后用分光光度計(jì)測定各提取液吸收光譜.1.4.2不同物料與提取劑之比對花青素提取的影響此時(shí)用提取效果最好的提取劑.1.4.3溫度對提取效果的影響以最正確結(jié)果作為桑棋提取劑,分別于60、50、40、30、20c下提取1h.1.4.4提取時(shí)間對提取效果的影響每隔20分鐘取1測得OD值.1.4.5正交實(shí)驗(yàn)1.4.6得率試驗(yàn)稱取一定量樣品,經(jīng)提取后.提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā),真空枯燥,求得率.方法一稀HCl+95%乙醇提取1不同溶劑的吸光光譜及提取效果比擬固定浸提溫度、提取時(shí)間、液料比,分別8

3、5%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇1:1、0.10%稀HCl+95%乙醇1:1、0.15%稀HCl+95%乙醇1:1為提取劑進(jìn)行浸提試驗(yàn),色素提取液分別采用pH1.0氯化鉀緩沖液和pH4.5醋酸鈉緩沖液稀釋一定倍數(shù) 吸光值在0.20.8之間 ,將稀釋液靜置15min,分別測定兩種樣品稀釋液OD入ma和700nm處的吸光值A(chǔ).按公式計(jì)算桑棋花色昔含量,分析提取溶劑對花色昔提取量的影響.注：OD入max確實(shí)定分別以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇1:1、0.10%稀HCl+95%乙醇1:1、0.15%稀HCl+95%乙醇1:1作為提取劑,以物料與提取劑之比1

4、:10提取桑棋色素,提取液經(jīng)3倍稀釋后用分光光度計(jì)測定各提取液吸收光譜.2不同物料與提取劑之比對花青素提取的影響此時(shí)用提取效果最好的提取劑.分別稱取2.0g酒渣,按液料比5、10、15、20、25、30參加相應(yīng)體積的浸提溶劑,在40C下避光提取2h后,抽濾、離心3000rpm,10min.取1mL清液,用pH1.0和pH4.5的緩沖溶液稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma委D700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對液料比作圖,分析液料比對色素提取量的影響.僅供參照!水文僅供琴左,取用取腳可做I腺3溫度對提取效果的影響分別稱取2.0g酒渣置入5個(gè)50mL的三

5、角瓶中,各參加浸提溶劑,攪拌5min,用封口膜將瓶口密封并用鋁箔紙包裹好以避光.分別置于30C、40C、50C、60C、70c的恒溫水浴上提取2h后,抽濾、離心3000rpm,10min.取1mL上清液,用pH1.0和pH4.5的緩沖液稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma下D700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對溫度作圖,分析溫度對色素提取量的影響.4提取時(shí)間對提取效果的影響每隔30分鐘取樣測得OD值.用pH1.0和pH4.5的緩沖液稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma700nm處處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對時(shí)間作

6、圖,分析提取時(shí)間對色素提取量的影響.5桑棋紅色素酸性乙醇溶劑提取條件的正交試驗(yàn)根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,選取L934正交試驗(yàn)表,以浸提溶劑中乙醇濃度、浸提時(shí)間、浸提溫度、液料比為因素,安排4水平做正交試驗(yàn),以確定提取的最正確條件.方法二超聲波輔助提取桑根紅色素1超聲波功率對紅色素提取的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份,按液料比？分別參加？提取液,在30c溫度下,分別以200700W超聲功率萃取20min.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5緩沖液稀釋吸光值限制在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對超聲功率作圖,分

7、析功率對色素提取量的影響.2超聲溫度對色素提取量的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份,按液料比？分別參加？提取液,以？W超聲功率分別在2060c溫度下萃取20min.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5緩沖溶?稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm姍處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對超聲溫度作圖,分析溫度對色素提取量的影響.3超聲時(shí)間對色素提取量的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份,按液料比？分別參加？提取液,在？C溫度下,以？W超聲功率分別萃取5、10、15、20、25、30min.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.

8、5緩沖溶?稀釋吸光值在0.20.8之間 ,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm處的吸光彳1A,按公式計(jì)算花色昔含量,并對超聲時(shí)間作圖,分析時(shí)間對色素提取量的影響.4桑棋紅色素超聲波輔助提取條件的正交試驗(yàn)根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,選取L934正交試驗(yàn)表,以超聲功率、超聲溫度、超聲時(shí)間為因素,安排3水平做正交試驗(yàn),以確定提取的最正確條件.方法三微波輔助提取桑棋紅色選擇微波輔助提取溫度30C、40C、50C、60C、70C,以微波功率500W、600W、700W、800W、900W,微波輻射時(shí)間2S、4S、6S、8S、10S以及液料比10:1、20:1、30:1、40:1、50:1為單因素考察

9、因素.選擇其中重要的3因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn).最后HPLC分析：將三種方法所得到的產(chǎn)品進(jìn)行HPLC分析,看其活性物質(zhì)是否有變化,主要是后面兩種方法是否對活性物質(zhì)改變.僅供參照!水文僅供琴左,取用取腳可做I腺方法三超高壓輔助提取桑棋紅色1壓力對色素提取量的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份放入超高壓處理袋內(nèi),按液料比？分別參加？提取液,封口包裝；以不同壓力100500MPa進(jìn)行加壓3min,加壓1次的處理.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5緩沖溶?稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對高壓壓力作圖,分析壓力

10、對色素提取量的影響.2加壓時(shí)間對色素提取量的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份放入超高壓處理袋內(nèi),按液料比？分別參加？提取液,封口包裝；分別以加壓時(shí)間l5min進(jìn)行300MPa,加壓1次的高壓處理.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5緩沖溶?稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對加壓時(shí)間作圖,分析時(shí)間對色素提取量的影響.3加壓方式一間歇式對色素提取量的影響精確稱取2.0g桑棋酒渣假設(shè)干份放入超高壓處理袋內(nèi),按液料比？分別參加？提取液,封口包裝；分別加壓1次300MPa處理3min、力口壓2次300MP

11、a處理1.5min,卸壓,再300MPa處理1.5min、加壓3次300MPa處理1min,卸壓,再300MPa處理1min,再300MPa處理1min.抽濾、離心得到色素粗提液,用pH1.0和pH4.5緩沖溶?稀釋吸光值在0.20.8之間,分別測定兩種樣品稀釋液在OD入ma和700nm處的吸光值A(chǔ),按公式計(jì)算花色昔含量,并對加壓次數(shù)作圖,分析結(jié)果.方法四參加酶對紅色素提取的影響未加酶；果膠酶0.1%;纖維素酶.01%;果膠酶0.05%+纖維素酶0.05%.測定花色昔含量的方法有很多,經(jīng)典的有薄層層析法、快速測定比色法、紫外吸收光譜UV等,現(xiàn)代的有紅外吸收光譜、液相色譜HPLC以及核磁共振NMR、質(zhì)譜FAB等.除紫外吸收分光光度法外,其余方法均需要標(biāo)準(zhǔn)色素樣品,測定的是某種花色營的具體含量.這對于尚未確定組成的新樣品的初步研究是一個(gè)難題,也給一般性的檢驗(yàn)分析帶來了困難.花色昔是水溶性色素,根據(jù)比爾定律,溶液的濃度與其吸光度A成正比,因此在未有標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),可用紫外-可見吸收分光光度法測定總花色甘的含量.花色昔含量主要有2種表示方法：色價(jià)及代入消光系數(shù)用公式計(jì)算.由此可見,關(guān)鍵是吸光值A(chǔ)的測定.綜合國內(nèi)外資料,主要有以下幾種計(jì)算吸光值A(chǔ)的方法：1當(dāng)葉綠素是該樣品中主要存在的干擾