交叉配血(凝聚胺法)

1、交叉配血(凝聚胺法)1. 原理凝聚胺(polymatching )法首先利用低離子介質降低溶液的離子強度， 減少紅細胞周圍的陽離子云，促進血清(漿)中的抗體與紅細胞相應抗原 結合，再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細胞表 面的負電荷，縮短細胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使 IgG 型抗體 直接凝集紅細胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因 電荷中和而分散，而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。2. 標本米集：2.1 標本種類：抽取靜脈血 3-4ml 待凝固后分離血清，將細胞配成 5%鹽 水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細胞懸液。2.2 標本要求：

2、抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主張用 EDTAK2 ( mg/dz ) 抗凝標本應無溶血，切標簽齊全。3. 標本儲存：急診標本 30 分鐘內完成操作，標本應至 4C冰箱保存 7 天。4. 標本運輸：室溫運輸。5. 標本拒收標準：細菌污染。溶血標本，標簽不齊全不能作測定。6. 試劑：6.1 試劑名稱：凝聚胺試劑(polymatching)6.2 試劑生產廠家：(臺資)珠海貝索生物技術有限公司。6.3 試劑組成：試劑 1.低離子介質(LowLo ni cMedium , LIM).試劑打開使用后，可置室 溫貯存，未開封者 2-25 度貯存，有效期為 2 年。試劑 2.凝聚胺溶液(PolybreneS

3、olution).貯存及有效期同上。試劑 3.重懸液(Resuspe ndin gSolutio n).貯存及有效期同上。試劑 4.8.5 %生理鹽水。7. 儀器：7.1 血型血清離心機：80-2 型離心機江蘇金壇市大地自動儀器廠7.2 離心機：江蘇金壇市大地自動儀器廠7.3 電熱恒溫水箱：江蘇金壇市醫(yī)療器械廠7.4 顯微鏡：XSZ-H3（中國）8. 操作步驟及結果判斷：8.1 供受者紅細胞用生理鹽水配成 3-5 %的細胞懸液。加樣量均為：血清 2 滴，紅細胞懸液1 滴。主管：受血者血清+供者紅細胞懸液；次管：受者紅 細胞懸液+供者血清；（陰陽對照管另設）。8.2 各管分別加低離子介質 0.6

4、5ml 混勻置室溫 1 分鐘。加凝聚胺溶液 2 滴， 混勻，置室溫15 秒。8.31000g（3400rpm），離心 10 秒，棄上清液，管 底保留約 0.1ml 液體。輕搖試管，目測紅細胞有無凝集。如無凝集，則重做前面試驗。8.4 加入 2 滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結果。8.5 凝塊在 1 分鐘內分散，試驗結果為陰性，供受者血液配合;反之，如依 照為不同強度的凝塊，試驗結果判為陽性，供受者血液不配合。實驗結果 必須在 3 分鐘內判讀。9. 操作性能：快速簡便，特異性強，靈敏度較高，重復性好。10. 超出范圍結果處理：10.1 細胞自凝：在冬天氣溫較低時， 某些病人血清中含有冷凝集素而導致 交叉配血假陽性;遇此現象可用 37C-40C生理鹽水洗滌紅細胞并置 37C水溶中輕輕搖動，觀察結果。10.2 若病人血清（血漿）含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加 4-6 滴 polybrene溶液以中和肝素。10.3 紅細胞懸液為 5 %為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當，反應 不明顯易誤判。10.4 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血 型物質中和了相應的抗體。11. 方法局限性：11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。11.2 操作方法應按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實 是否漏加