HPV臨床常用檢測方法

1、1/6 下載文檔可編輯由于 HPV 不能在體外細胞培養(yǎng)，故不能用簡便 的血清血檢測進行 HPV 的診斷和分型。臨床上 用于檢測 HPV 的方法包括細胞學方法、免疫組 化、原位雜交、斑點雜交、核酸印跡和PCR 等，其中以 PCR 方法的敏感性最高，是目前應用最 多感染的HPV型別、含量、持續(xù)時間決定病變的發(fā)展與預后，是進行HPV僉測的主要內(nèi)容。目前主要是通過應用分子生物學方法進行HPVDNA勺檢測。1、現(xiàn)有的HPV實驗室主要檢測手段：1聚合酶鏈反應(PCR, Polymerase Cha in Reactio n):擴增位于兩段已知序列之間的DNA片斷的方法。該法有較高的敏感度，可進行HPV分型

2、,缺點是對實驗室環(huán)境要求較高，容易發(fā)生樣本間的交叉污染，從而導致假陽性率高。2核酸雜交檢測有較好的特異性和敏感度，還可以進行HPV DNA勺分型,各種核酸雜交檢測方法有一定的優(yōu)缺點。A核酸印跡原位雜交適用于HPV分型和HPV DNA分子量鑒定，雖然靈敏度高，但因操作復雜,需要新鮮組織標本，不便在臨床上大規(guī)模使用。2/6 下載文檔可編輯B斑點印跡其敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法，雖然經(jīng)濟實用，但 實驗過程存在有放射性污染，是環(huán)保所不能輕視的問題。C原位雜交(in situ hybridization，一種核酸雜交技術(shù)，可用來測定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，檢測重組體DNA通

3、過非放射性探針對石蠟組織進行檢測，能作定位檢測，假陽性 率低，但靈敏度不高，大大降低了臨床使用價值。D雜交捕獲法(Hybrid Capture)雜交捕獲試驗是利用化學發(fā)光對抗體捕獲的信號加以放大。首先使DNA雙鏈釋放并分解成為可以雜交的核苷酸單鏈，DNA單鏈與RNA組合探針結(jié)合為RNA-DN雜合體，特異性抗體將RNA-DN雜合體捕獲，偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與RNA-DN雜合體結(jié)合,堿性磷酸酶使 酶底物發(fā)光，根據(jù)光的強弱可確定堿性磷酸酶的含量，從而確定RNA-DN雜合體的含量。能檢測13種高危型HPV包括HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各種

4、檢測方法的比較各種檢測方法的比較3/6 下載文檔可編輯方法學靈敏度箭性技術(shù)特點細胞學（Cytology）低低操作容易，成本較低，準確度較差斑點印跡（Dot blot）中中有一定放射性核酸印跡原位雜交(souther nblothybridizati on)高高標準、麻煩，不宜大規(guī)模使用原位雜交(In Situhybridizatio n)高中蠟塊組織包埋內(nèi)檢測HPV雜交捕獲（HC HC2高中無放射性，易使用，高、低危型間有交叉反應，且不能分型普通多聚酶鏈反應（PCR很高中取材容易， 但目前已應用試 劑的只能檢測少數(shù)單一型別， 女口6、11、18等，且由于技術(shù)上的 問題存在假陽性2、最新推出的H

5、PV的實驗室檢測技術(shù)4/6 下載文檔可編輯高靈敏度高危型HPV分型多色熒光實時PCR式劑：為歐洲著名分子生物學研究機構(gòu)專門針對宮頸癌篩查而全新設計的高危型HPV分 型多色熒光實時PCR僉測試劑，可同時檢測高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宮頸疾病人乳頭狀瘤病毒（HPV感染患者中HPV亞型分布情況 及高危型HPV的年齡分布。 方法采用專利Invader酶切信號放大法， 利用Cervista HPV HR Cervisat核酸雜交基因分型試劑檢測宮頸脫落細胞HPV的14個亞型DNAHPV型 組亞型備注A5/A651，56，66A718，39，45，59，68A916，31，

6、33，35，52,585/6 下載文檔可編輯1.3 HFV DtSAHybriMx雖用核酸井子雜交儀*UNA槎耿試 劑盒和人乳頭狀瘤慕除按戰(zhàn)分子快連親交閃分型試劑倉（HybriMflTt,美國專利6020187）均為凱菁 生物科技有限公謝產(chǎn)品口采用低矗度撰因芯片和導 流雜兗技術(shù)（伽1出帕口靜hybridiMLion）應用寡核 昔糧探針雜兗叮栓岀13種離危亞據(jù)（HPV 1筑I仏：M、33、35、39x4仇51、J2. 56, 58, 59, 68）, 5種低危亞型（HP*靈1U +2. 43和44）及中國人特有的高危亞型（CPOM、53. 66）。具 休步mar：利用訓普生物化學科技公可的基H&

7、amp;#提試閘盒提取樣本DNA,FTC-200（ MJ Rrwuh）PCR擴壇由反應體系25 pj,條件為列T9 miuF95 T：20 s, 55 3G T72 12M .r擴增40 r環(huán)，72 TJgWiS min.輕七預魚后.在HybriMaj醫(yī)用檢匯分子快極雜交儀乎臺上放人標 記荷21種HP棊因舉專核昔酸探針的低嶠度畢因 芯片，將擴増產(chǎn)物賈95 X：變性5 min,冰浴2血兒 加入檢涮料內(nèi)進行10 min的診腌雜立酶標園 色：加人封陰液封閉為反蠱的空白微扎*酹插顯色 后觀察檢畫結(jié)果匕陽性點呈現(xiàn)藍幫色回點， 多個圓 點陽性即為多重感堅.每帳芯片上有PCR反應質(zhì) 桂點和衆(zhòng)交顯色質(zhì)控點各I

8、個。HPV基因分型檢測試劑盒（PCR反向點雜交法）【產(chǎn)品用途】對人乳頭瘤病毒（HPV的感染情況進行定性檢測并加以分型，能夠檢測23種HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型；包括18種 高危和5種低危型，可用于臨床HPV感染的輔助診斷?！井a(chǎn)品優(yōu)勢】1.精確分型：能同時對23種HPV基因型進行精確分型，包括18種高 危型和5種地位型；2.效率高：單次檢測標本數(shù)量可達96份；3.性能好：特異性強、重復性好，均高于98%4.設備通用：如普通PCF儀和雜交儀，適應于大、中、小型實驗室；5.內(nèi)部質(zhì)控：具有真正意義上的內(nèi)部質(zhì)控，檢測結(jié)果更加準確；6.可以檢測多種臨床標本?！炯夹g(shù)方法】采用PCR和反向點雜交法相結(jié)合的基因芯片技術(shù)6/ 6 下載文檔可編輯【檢測原理】將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上， 然后與 已做標記的樣本進行雜交， 通過檢測雜交信號的強度和分布來進行分 析?！緳z測標本】宮頸脫落細胞、液基細胞學標本、疣體組織、石蠟組織切片等【臨床意義】1