多型性腮腺腫瘤p53和Ki

1、458000多型性腮腺腫瘤p53和Ki-67的免疫組化表達(dá) 郭樹江 河南煤化集團(tuán)鶴壁煤業(yè)公司總醫(yī)院五官科【摘要】目的： 探討Ki-67、P53的表達(dá)與多型性腮腺瘤的發(fā)生及其臨床病理意義。方法：2004年1月至2009年10月所用之石蠟包埋組織標(biāo)本的腮腺多型性腺瘤患者，經(jīng)隨訪3年以上，其中良性30例，惡性26例；以正常腮腺組 織30例為 對(duì)照。應(yīng)用Envision法檢測(cè)應(yīng)用免疫組Ki-67、P53的表達(dá)，分析其 與腮腺多型性 腺瘤良惡性之間的關(guān)系。結(jié)果：p53在正常腮腺組織中的表達(dá):腺管細(xì)胞P53強(qiáng)陽(yáng)性1例（3.3%）,中等3例（10.0%）,弱陽(yáng)性12例（40.0%）,無(wú)表達(dá)14例（46.7%

2、）腺泡細(xì)胞染色陰性 25例（83.3%） , 3例 弱陽(yáng)性（10.0%） , 2例中等（6.7%）。間質(zhì)細(xì)胞p53強(qiáng)陽(yáng)性1例（3.3%）,弱 陽(yáng)性8例（26.7%） , 21例陰性（70.0%）。Ki-67在正常腮腺組織中的表達(dá) ： 腺管細(xì)胞Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性0例（0.0%）,中等2例（6.7%）,弱陽(yáng)性6例（20.0%）,無(wú)表達(dá)22例（73.3%）;腺泡細(xì)胞染色陰性27例（90.0%），弱陽(yáng)性 3例（10.0%）;間質(zhì)細(xì)胞染色強(qiáng)陽(yáng) 性0例（0.0%）,弱陽(yáng)性5例（16.7%）,無(wú) 表達(dá)25例（83.3%）。p53在PA表達(dá)p53表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性7例（23.3%）,中度染 色16例（53.3%）,弱陽(yáng)

3、性7例（24.4%） 0多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中P53表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性1例（3.3%）,中度染色11例（36.7%）,弱陽(yáng)性18例（60.0%） O P53在粘液軟骨樣組織中表達(dá)和 腫瘤與管細(xì)胞p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PV0.001 ）。Ki-67在PA表達(dá)Ki-67 表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性5例（16.7% ）,中度染色12例（40.0% ）,弱陽(yáng)性13例（43.3% ）;多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性2例（6.7% ）,中度染色7例（23.3% ）,弱陽(yáng)性21例（70.0% ）。Ki-67在粘液軟骨樣組織中表 達(dá)與腫瘤與管細(xì)胞之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01 ） O2.5 p53在C

4、AP表達(dá) p53表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性11例（42.3% ）,中度染色5例（19.2% ）,陰性10例(38.5% )。2.6 Ki-67在CAP表達(dá) Ki-67表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性13例(50.0% ),中度 染色3例(11.5% ),陰性10例(38.5% )。結(jié)論：Ki-67、P53在腮腺腫瘤呈 高表達(dá)，二 者聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷準(zhǔn)確度。【關(guān)鍵詞】 腮腺；上皮性腫瘤；免疫組化檢查； 腫瘤抑制基因；Ki-67多型性腮腺瘤(Pleomorphic salivary ade no ma , PA )是最常見(jiàn)的腮腺腫瘤 ，部分可呈惡化并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。腮腺癌在多形性腺瘤中(Carci noma expleomor phi

5、cadenomq CPA)是存在于多型腮腺瘤中惡性轉(zhuǎn)化所致 ，是最常見(jiàn) 的 惡性混合瘤，約占全部腮腺腫瘤的10%。由多型腮腺瘤轉(zhuǎn)化為腮腺癌的確切病理學(xué)機(jī)制仍然不清，可能涉及不同分子學(xué)事件。癌癥的分子生物學(xué)研究表明，腫瘤抑制基因如p53功能的缺失可能導(dǎo)致各種癌癥的發(fā)生 7、P53腫瘤抑 制基因的突變是人類腫瘤最常見(jiàn)的遺傳變異。腫瘤細(xì)胞增生程度是反映其生物學(xué)行為的重要參數(shù)，直接影響著臨床治療和預(yù)后，Ki-67是一種敏感而特異的增殖期細(xì)胞標(biāo)記物。本研究的目的在于探討Ki-67、P53的表達(dá)與多型性腮 腺瘤的發(fā)生及其臨床病理意義。1資料和方法1.1 一般資料 福爾馬林固定、石臘包埋組織標(biāo)本，多型性腮腺

6、瘤 30例，CPA26 例，男性32例，女性24例，年齡25? 84 (48.3 B5)歲；同期切除的正常腮 腺組 織30例(男16例，女14例，年齡21? 77歲)為對(duì)照組。所有標(biāo)本均經(jīng) HE染色， 并為病理學(xué)醫(yī)生再次確認(rèn)。1.2 試齊IKi-67單克隆抗體，克隆號(hào)：SP12; p53單克隆抗體，克隆號(hào)：DO-11。顯色劑：DAB-0031 ,福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司；En visio n TM+加強(qiáng)型試劑盒,丹麥Dako公司，編K400033 。1.3 方法 石蠟標(biāo)本4 P m厚連續(xù)切片，免疫組化采用SP法，石蠟切片置0.01mmol/L檸檬酸緩沖液微波修復(fù)抗原，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫

7、水、透 明、 封片。已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。1.4 結(jié)果判斷Ki-67和p53均定位于細(xì)胞核，以背景清晰細(xì)胞核出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。計(jì)數(shù)采用Ki-67指數(shù)和p53指數(shù):6,指每個(gè)標(biāo)本低倍鏡（X 100）下觀察并確定有代表性的 Ki-67和p53染色陽(yáng)性視野，選擇5個(gè)視野，在高倍鏡（X 400）下每個(gè)視野數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算其陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，取P0.05。2結(jié)果2.1 p53在正常腮腺組織中的表達(dá) 腺管細(xì)胞P53強(qiáng)陽(yáng)性1例（3.3%）,中等3例 （10.

8、0%）,弱陽(yáng)性12例（40.0%）,無(wú)表達(dá)14例（46.7%）。腺泡細(xì)胞染色陰 性25例（83.3%） , 3例弱陽(yáng)性（10.0%） , 2例中等（6.7%）。間質(zhì)細(xì)胞p53強(qiáng) 陽(yáng) 性1例（3.3%）,弱陽(yáng)性8例（26.7%） , 21例陰性（70.0%）。2.2 Ki-67在正常腮腺組織中的表達(dá) 腺管細(xì)胞Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性0例（0.0%）,中等2 例（6.7%）,弱陽(yáng)性6例（20.0%）,無(wú)表達(dá)22例（73.3%）;腺泡細(xì)胞染色 陰性 27例（90.0%）,弱陽(yáng)性3例（10.0%）；間質(zhì)細(xì)胞染色強(qiáng)陽(yáng)性0例（0.0%）,弱 陽(yáng)性5例（16.7% ）,無(wú)表達(dá)25例（83.3% ）。2.3 p53在

9、PA表達(dá)p53表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性7例（23.3%）,中度染色16例（53.3%）, 弱陽(yáng)性7例（24.4%）。多形性腺瘤粘液軟骨樣組織中 P53表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性1例（3.3%）,中度染色11例（36.7%）,弱陽(yáng)性18例（60.0%） o P53在粘液軟骨樣組織中表達(dá)和腫瘤與管細(xì)胞p53表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）;二者的Ki-67表達(dá)亦未顯示有顯著差異。3討論3.1正常腮腺組織中p53和Ki-67表達(dá)正常腮腺組織中p53表達(dá)呈陰性或弱 陽(yáng)性, 與文獻(xiàn)應(yīng)結(jié)果一致。有作者觀察11 正常的胸腺上皮細(xì)胞不表達(dá)p53,來(lái)自正?？?腔黏膜亦無(wú)p53表達(dá)：12：;而口腔癌病人的“正?！别つこ?p53表達(dá)陽(yáng) 性13

10、。腫瘤抑制蛋白p53廣泛存在于多種細(xì)胞內(nèi)，在正常細(xì)胞，p53的表達(dá)很低，免疫組化方法多呈陰性結(jié)果。但是突變，導(dǎo)致突變蛋白質(zhì)的積累。因而，在癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌，p53蛋白質(zhì)的基因編碼可發(fā)生頻繁的22%? 70%的惡性腫瘤如結(jié)腸癌、Wp53蛋白質(zhì)可經(jīng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)證14,15$C 幺 Ki-67是與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，僅分布于核內(nèi)，其功能被認(rèn)為與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)?，F(xiàn)已知道 G0期細(xì)胞無(wú)Ki-67抗原表達(dá)，在G1后期開始出現(xiàn)，S、G2期升高，M期達(dá)高峰，其后迅速降解。在甲狀腺的皮質(zhì)組織、外周淋巴組織生發(fā)中心和睪丸未分化的精原細(xì)胞中未見(jiàn)表達(dá)生性Ki-67抗原在非增的或低轉(zhuǎn)化性

11、的組織中幾乎不表達(dá)，它反映的是細(xì)胞的增殖情況，腫瘤細(xì)胞的增生活性與腫瘤生物學(xué)行為有關(guān)。3.2 p53和Ki-67和PA和CPA中表達(dá) 以核染色p53強(qiáng)陽(yáng)性和中度染色作為 陽(yáng)性，本組中PA檢測(cè)陽(yáng)性率為76.6%,與文獻(xiàn)結(jié)果一致16,17o CPA中陽(yáng)性表 達(dá)為61.5% ,文獻(xiàn)資料分別為67%10和75%5 o Ki-67在PA和CPA中表達(dá)陽(yáng) 性分別為 56.7% 和 61.5% o3.3 p53和Ki-67表達(dá)與腫瘤Ki-67反映的是細(xì)胞的增殖情況，在許多腫瘤組織中都高表達(dá)。正常宮頸組織中 Ki-67表達(dá)只存在于基底層細(xì)胞核中，癌組織 中其表達(dá)明顯增強(qiáng)，它在子宮頸上皮內(nèi)瘤變I、子宮頸上皮內(nèi)瘤變U、子宮頸上皮內(nèi)瘤變川及宮頸癌中表達(dá)水平隨病變程度的加重而升高，并與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度有關(guān)。P53基因是定位于人類第17號(hào)染色體17P13. 1的抑癌 基因，人類腫瘤中約51種與P53基因突變有關(guān)，P53蛋白在細(xì)胞增殖和凋 亡調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。另一方面，突變型P53蛋白表達(dá)促進(jìn)腫瘤血管增生，是 腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。本研究結(jié)果顯示，PA和CPA組織中p53和Ki-67表達(dá)均較正常的腮腺組織為高，提示組織細(xì)胞中二者表達(dá)陽(yáng)性有助于對(duì)腫瘤的