G試驗檢測及鱟試驗檢測

1、 一一. G. G試驗與鱟試驗檢測原理試驗與鱟試驗檢測原理 二二. G. G試驗試驗深部真菌感染檢測深部真菌感染檢測 三三. . 鱟試驗檢測鱟試驗檢測革蘭氏陰性菌感染檢測革蘭氏陰性菌感染檢測 四四. . G試驗采樣及結(jié)果分析參考試驗采樣及結(jié)果分析參考 一.G試驗與鱟試驗 鱟是地球上最古老的海洋生物之一，已有三億多年的歷史， 人們稱它為“活化石”。 研究發(fā)現(xiàn)，鱟的循環(huán)細胞（阿米巴細胞）中含有一研究發(fā)現(xiàn)，鱟的循環(huán)細胞（阿米巴細胞）中含有一種特殊的凝固酶原。這種凝固酶原可以被自然界廣泛存在種特殊的凝固酶原。這種凝固酶原可以被自然界廣泛存在的兩種物質(zhì)激活為凝固酶，從而導致一系列的生化反應。的兩種物質(zhì)激

2、活為凝固酶，從而導致一系列的生化反應。這兩種物質(zhì)就是這兩種物質(zhì)就是脂多糖脂多糖(LPS)(LPS)和和(1-3)-(1-3)- -D-D葡聚糖。葡聚糖。 人們利用鱟的阿米巴細胞溶胞物制備成了鱟試劑。人們利用鱟的阿米巴細胞溶胞物制備成了鱟試劑。通常稱使用鱟試劑檢測脂多糖（通常稱使用鱟試劑檢測脂多糖（LPSLPS）的試驗為的試驗為鱟試驗。鱟試驗。使用鱟試劑檢測使用鱟試劑檢測(1-3)-(1-3)- -D-D葡聚糖葡聚糖的試驗為的試驗為G G試驗。試驗。 鱟試驗反應機理鱟試驗反應機理 二二 G G試驗試驗深部真菌感染檢測深部真菌感染檢測侵襲性真菌感染（侵襲性真菌感染（IFI）的定義）的定義侵襲性真菌

3、感染的特點侵襲性真菌感染的特點侵襲性真菌感染的現(xiàn)狀侵襲性真菌感染的現(xiàn)狀湛江安度斯生物有限公司湛江安度斯生物有限公司820圍產(chǎn)期圍產(chǎn)期828真菌真菌101053胃腸道胃腸道1305圍產(chǎn)期圍產(chǎn)期91259結(jié)核結(jié)核1277肝膽管肝膽管82370真菌真菌1377胃腸道胃腸道74596肝膽管肝膽管1402細菌性腦膜炎細菌性腦膜炎65577心臟心臟2333肺結(jié)核肺結(jié)核513, 413腎臟腎臟/泌尿道泌尿道2486心臟心臟416, 524HIV/AIDS8006腎臟腎臟/泌尿道泌尿道322, 396敗血癥敗血癥9438敗血癥敗血癥287,181呼吸道呼吸道56, 966呼吸道呼吸道1死亡人數(shù)死亡人數(shù)感染類型

4、感染類型死亡人數(shù)死亡人數(shù)感染類型感染類型19971980美國死于感染性疾病的十大原因美國死于感染性疾病的十大原因真菌感染的死亡率上升了真菌感染的死亡率上升了3.43.4倍倍 （死亡率：（死亡率：0.72.4 /100,000）侵襲性真菌病已變得越來越常見侵襲性真菌病已變得越來越常見美國西弗吉尼亞大學醫(yī)院深部真菌感染美國西弗吉尼亞大學醫(yī)院深部真菌感染危險因素評分危險因素評分臨床危險因素臨床危險因素 分值分值廣譜抗生素應用廣譜抗生素應用4天天 5胃腸道手術(shù)胃腸道手術(shù) 5中心靜脈置管中心靜脈置管 5駐留駐留ICU 4天天 5應用抗生素應用抗生素=4天，體溫仍天，體溫仍38 5血液系統(tǒng)惡性腫瘤血液系統(tǒng)

5、惡性腫瘤 5實體腫瘤實體腫瘤 3糖尿病糖尿病 3留置尿管留置尿管 3機械通氣機械通氣48h 3完全腸外營養(yǎng)（完全腸外營養(yǎng)（TPN） 3粒細胞減少（粒細胞減少（1000/mm3） 3低血壓低血壓 3創(chuàng)傷創(chuàng)傷 3反復收住反復收住ICU 3外周靜脈置管外周靜脈置管 1G試驗的臨床意義試驗的臨床意義 三三 鱟試驗檢測鱟試驗檢測革蘭氏陰性菌感染檢測革蘭氏陰性菌感染檢測細菌內(nèi)毒素為革蘭氏陰性菌細胞壁中的脂多糖成分,內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生原因內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生原因l 內(nèi)毒素血癥： 由于血中細菌或病灶內(nèi)細菌釋放出大量內(nèi)l 毒素至血液，或輸入大量內(nèi)毒素污染的液體而引起。分為 內(nèi)源性和外源性兩類內(nèi)源性內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥發(fā)生的原

6、因內(nèi)毒素血癥發(fā)生的原因1. 1.腸道內(nèi)毒素的吸收：正常機體內(nèi)菌落失調(diào)后，腸道內(nèi)內(nèi)毒素可被大量吸收入血。腸道內(nèi)毒素的吸收：正常機體內(nèi)菌落失調(diào)后，腸道內(nèi)內(nèi)毒素可被大量吸收入血。2. 2.敗血癥時血中細菌的釋放：革蘭陰性桿菌敗血癥時，細菌在機體血液內(nèi)大量繁殖，敗血癥時血中細菌的釋放：革蘭陰性桿菌敗血癥時，細菌在機體血液內(nèi)大量繁殖，死亡解體的細菌可釋放出大量內(nèi)毒素。死亡解體的細菌可釋放出大量內(nèi)毒素。3. 3.有效的抗菌治療后：由于血中細菌大量死亡崩解，可加重內(nèi)毒素血癥。因此，在有效的抗菌治療后：由于血中細菌大量死亡崩解，可加重內(nèi)毒素血癥。因此，在臨床上可能出現(xiàn)感染控制而以器官損害為特點的病情繼續(xù)惡化的

7、情況，此時需臨床上可能出現(xiàn)感染控制而以器官損害為特點的病情繼續(xù)惡化的情況，此時需要抗內(nèi)毒素治療。要抗內(nèi)毒素治療。內(nèi)毒素檢測的臨床意義內(nèi)毒素檢測的臨床意義 檢測血漿和體液中的內(nèi)毒素含量對診斷革蘭陰性細菌感染診斷革蘭陰性細菌感染有重要的臨床參考意義。 全身性細菌感染：全身性細菌感染主要見于敗血癥。革蘭陰性細菌性敗血癥全身性細菌感染主要見于敗血癥。革蘭陰性細菌性敗血癥尤常并發(fā)內(nèi)毒素血癥尤常并發(fā)內(nèi)毒素血癥。對患者進行血漿內(nèi)毒素測定，可以指導治療，及時控制感染。 原因不明的發(fā)熱原因不明的發(fā)熱：四四. . G試驗采樣及結(jié)果分析參考試驗采樣及結(jié)果分析參考l 【標本采集及送檢要求標本采集及送檢要求】l 標本采

8、集要求：1）采集過程要求無菌操作，用指定的肝素類抗凝、無菌、無葡聚糖采血管；2）常規(guī)住院病人早上用藥前空腹采血，血透患者透析前采血。l 標本的送檢和保存要求：l 標本采集后應在半小時內(nèi)離心，4小時內(nèi)檢測完。若當日不能及時檢測的標本應將離心后的血漿轉(zhuǎn)移至無葡聚糖的容器內(nèi)-20以下冷凍保存，一周內(nèi)使用。l 【試劑溶液保存試劑溶液保存】l 復溶后的試劑溶液應在10分鐘內(nèi)使用。若當次試驗有剩余，可將剩余的試劑溶液置-20以下冷凍保存，一周內(nèi)使用。不能反復凍融試劑溶液。l【假陽性因素假陽性因素】l （1-3）-D葡聚糖污染。使用非試劑廠家提供的采血管、反應試管、吸頭等容易受（1-3）-D葡聚糖污染；l

9、某些纖維素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；l G試驗前注射過香菇多糖、脂肪乳,雙黃連,生脈，黃芪 注射液等藥物。白蛋白等血制品l 紗布，或其它醫(yī)療物品（外科手術(shù)）l 連續(xù)檢測有助于降低假陽性的發(fā)生，葡聚糖的測定值在連續(xù)監(jiān)測中出現(xiàn)快速較大幅度連續(xù)檢測有助于降低假陽性的發(fā)生，葡聚糖的測定值在連續(xù)監(jiān)測中出現(xiàn)快速較大幅度的變化提示假陽性，尤其是對還未開始抗真菌治療的患者的變化提示假陽性，尤其是對還未開始抗真菌治療的患者l 【假陰性因素假陰性因素】l 不敏感菌不敏感菌：某些真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）細胞壁沒有（1-3）-D 葡聚糖成分；隱球菌細胞壁外有莢膜致使（1-3）-D 葡聚糖釋放不出，這些

10、真菌G試驗不能檢測。有臨床癥狀，但G試驗陰性時，臨床醫(yī)生可考慮這兩種真菌感染的可能。l 定植菌定植菌：研究顯示，定植真菌不引起患者血液的（1-3）-D 葡聚糖升高，即使是嚴重定植。因此G試驗陰性可以區(qū)分真菌定植或侵襲性感染。l 檢檢 測測 結(jié)結(jié) 果果 分分 析析1.陰性結(jié)果 d100.5pg/ml；如患者出現(xiàn)宿主因素72小時再小時再次檢測次檢測2.弱陽性結(jié)果 100.5d151.5pg/ml；624小時內(nèi)復查確認，小時內(nèi)復查確認，G試驗試驗動態(tài)監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測。加以用藥治療。 高?；颊呓ㄗh每周檢測高危患者建議每周檢測2-3次次 檢測結(jié)果一定要結(jié)合臨床分析檢測結(jié)果一定要結(jié)合臨床分析,不可孤立不可孤立l 【假陽性因素假陽性因素】l 脂多糖污染。使用非試劑廠家提供的采血管、反應試管、吸頭等容易受脂多糖污染；l 某些纖維素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；l 鱟試驗前注射過脂肪乳等藥物。l 【假陰性因素假陰性因素】l 定植菌：研究顯示，定植革蘭氏陰性菌不引起患者血液的脂多糖升高，即使是嚴重定植。因此鱟試驗陰性可以區(qū)分革蘭氏陰性菌定植或侵襲性感染。l 感染嚴重程度：人體局部，淺部革蘭氏陰性菌感染時，因病菌釋放脂多糖不入血或入血少，人體自身免疫系統(tǒng)能給予清除。l 檢檢 測測 結(jié)結(jié) 果果 分分 析析1.陰性結(jié)果 d0.053EU/ml，陰性結(jié)果 如患者出現(xiàn)宿主因