中藥化學(xué)-6黃酮-329

1、 分離黃酮類化合物常用硅膠、聚酰胺、葡聚糖分離黃酮類化合物常用硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠、氧化鋁等填料。凝膠、氧化鋁等填料。柱色譜法柱色譜法 一般為一般為吸附色譜吸附色譜，可以用于分離極性較小的異，可以用于分離極性較小的異黃酮、二氫黃酮和高度甲基化的黃酮。黃酮、二氫黃酮和高度甲基化的黃酮。 加水去活化后，為加水去活化后，為分配色譜分配色譜，可用于分離極性，可用于分離極性較大的多羥基黃酮及其苷類。較大的多羥基黃酮及其苷類。 （1 1）硅膠柱色譜）硅膠柱色譜 若母核結(jié)構(gòu)相同，而若母核結(jié)構(gòu)相同，而-OH-OH取代數(shù)目不同，則取代數(shù)目不同，則-OH-OH多的后出柱；多的后出柱； 易形成分子內(nèi)氫鍵的易形成

2、分子內(nèi)氫鍵的-OH-OH，其極性變小先出柱；其極性變小先出柱；如：鄰二如：鄰二-OH -OH 間二間二- -OH OH （RfRf值）值） 一般出柱順序：苷元一般出柱順序：苷元 單糖苷單糖苷 雙糖苷雙糖苷 多糖苷。多糖苷。出柱先后順序：出柱先后順序：吸附規(guī)律：吸附規(guī)律：極性大吸附能力強(qiáng)極性大吸附能力強(qiáng)（2 2）聚酰胺柱色譜）聚酰胺柱色譜 聚酰胺分子內(nèi)有很多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌聚酰胺分子內(nèi)有很多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌類等形成氫鍵，因而對(duì)這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用。類等形成氫鍵，因而對(duì)這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用。 聚酰胺分子中具有聚酰胺分子中具有酰胺羰基酰胺羰基，可與酚羥基形成氫鍵，主要，可與酚

3、羥基形成氫鍵，主要依據(jù)與被分離物質(zhì)成氫鍵能力不同進(jìn)行分離。依據(jù)與被分離物質(zhì)成氫鍵能力不同進(jìn)行分離。分離原理：分離原理：吸附強(qiáng)弱取決于：吸附強(qiáng)弱取決于：化合物與聚酰胺化合物與聚酰胺形成氫鍵的能力形成氫鍵的能力。 形成氫鍵的基團(tuán)越多，則吸附力越強(qiáng)；形成氫鍵的基團(tuán)越多，則吸附力越強(qiáng)；聚酰胺對(duì)化合物的吸附力在水中有下列規(guī)律：聚酰胺對(duì)化合物的吸附力在水中有下列規(guī)律： 易形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱；易形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱； 不同類型黃酮化合物被吸附的強(qiáng)弱順序：不同類型黃酮化合物被吸附的強(qiáng)弱順序： 黃酮醇黃酮醇 黃酮黃酮 二氫黃酮醇二氫黃酮醇 異黃酮異黃酮 芳香核、共軛雙鍵多者芳香核、共軛雙鍵多者

4、吸附力大；吸附力大；聚酰胺聚酰胺“雙重色譜雙重色譜”原理原理正相色譜正相色譜非極性固定相（非極性脂肪鏈）非極性固定相（非極性脂肪鏈）含水溶劑（甲醇含水溶劑（甲醇- -水，極性大）水，極性大） 苷（極性大）（柱色譜分離）苷（極性大）（柱色譜分離）苷元苷元 苷苷聚酰胺：聚酰胺：洗脫劑：洗脫劑：先洗脫：先洗脫：RfRf值：值：反相色譜反相色譜 分離苷元和苷時(shí)，聚酰胺柱色譜表現(xiàn)出雙重色譜的性質(zhì)：分離苷元和苷時(shí)，聚酰胺柱色譜表現(xiàn)出雙重色譜的性質(zhì)： 當(dāng)流動(dòng)相為水當(dāng)流動(dòng)相為水- -醇系統(tǒng)時(shí)，其為反相色譜；醇系統(tǒng)時(shí)，其為反相色譜； 當(dāng)流動(dòng)相為氯仿當(dāng)流動(dòng)相為氯仿- -甲醇系統(tǒng)時(shí)，其為正相色譜。甲醇系統(tǒng)時(shí)，其為正

5、相色譜。極性：水極性：水- -醇醇 聚酰胺聚酰胺 氯仿氯仿- -甲醇甲醇反相：固定相反相：固定相 流動(dòng)相流動(dòng)相正相與反相色譜正相與反相色譜硅膠硅膠 固定相固定相（硅醇）（硅醇） 流動(dòng)相流動(dòng)相（醇）極性時(shí)為（醇）極性時(shí)為正相正相聚酰胺聚酰胺 固定相固定相（聚酰胺脂肪鏈）（聚酰胺脂肪鏈） OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOCH3OOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOHHOOOOOHOHOHrha-glcABCDE聚酰胺聚酰胺TLC TLC RfRf值：值：聚酰胺柱色譜洗脫順序：聚酰胺柱色譜洗脫順序：E B A C DE B A C D 氧化鋁對(duì)黃酮類化合物吸附力強(qiáng)，特別是具有氧化鋁對(duì)黃

6、酮類化合物吸附力強(qiáng)，特別是具有3-OH3-OH或或5-OH 5-OH 、4-4-羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物與鋁離子絡(luò)羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物與鋁離子絡(luò)合而被牢固吸附在氧化鋁柱上，難于洗脫，所以很少應(yīng)合而被牢固吸附在氧化鋁柱上，難于洗脫，所以很少應(yīng)用。用。 通常情況下，要求在分子的結(jié)構(gòu)中無(wú)酸性基團(tuán)，或通常情況下，要求在分子的結(jié)構(gòu)中無(wú)酸性基團(tuán)，或ArAr-OH-OH被甲基化被甲基化，往往也可以用氧化鋁柱分離，往往也可以用氧化鋁柱分離。（3 3）氧化鋁氧化鋁柱色譜柱色譜原理原理: : a a 分離游離黃酮時(shí)，主要靠吸附作用。分離游離黃酮時(shí)，主要靠吸附作用。 凝膠對(duì)黃酮類化合物的吸附程度取決于凝

7、膠對(duì)黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目游離酚羥基的數(shù)目。 b b 分離苷時(shí)，則分子篩的屬性起主導(dǎo)作用。分離苷時(shí)，則分子篩的屬性起主導(dǎo)作用。 在洗脫時(shí)，黃酮甙類大體上是按在洗脫時(shí)，黃酮甙類大體上是按分子量由大到小分子量由大到小的順序流出柱體。的順序流出柱體。（4 4）葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠柱色譜柱色譜 VeVe/Vo/Vo越小，化合物越容易洗脫。越小，化合物越容易洗脫。 從表中從表中可以可以看出，看出，首先首先洗脫下來(lái)的是苷類成分，按照分子篩原理分離，然后是游離黃洗脫下來(lái)的是苷類成分，按照分子篩原理分離，然后是游離黃酮類成分，按照吸附原理分離。酮類成分，按照吸附原理分離。 黃酮類化合物在

8、黃酮類化合物在SephadexSephadex-LH 20-LH 20柱上的分離（甲醇為洗脫劑）柱上的分離（甲醇為洗脫劑）黃酮類化合物黃酮類化合物取代情況取代情況VeVe/Vo/VoA A 芹菜素芹菜素5,7,4-5,7,4-三三OHOH5.35.3B B 木犀草素木犀草素5,7,3,4-5,7,3,4-四四OHOH6.36.3C C 槲皮素槲皮素3,5,7,3,4-3,5,7,3,4-五五OHOH8.38.3D D 楊梅素楊梅素3,5,7,3,4,5-3,5,7,3,4,5-六六OHOH9.29.2E E 山萘酚山萘酚-3-3-半乳鼠李糖基半乳鼠李糖基-7-7-鼠李糖苷鼠李糖苷三糖苷三糖苷3

9、.33.3F F 槲皮素槲皮素-3-3-蕓香糖苷蕓香糖苷雙糖苷雙糖苷4.04.0G G 槲皮素槲皮素-3-3-屬李糖苷屬李糖苷單糖苷單糖苷4.94.9比較它們酸性的強(qiáng)弱比較它們酸性的強(qiáng)弱D C B A比較它們酸性的強(qiáng)弱比較它們酸性的強(qiáng)弱C A B D酸性酸性極性極性比較其酸性和極性的大小：比較其酸性和極性的大?。篈 C B D；D C B A。 用硅膠柱色譜分離下列一組化合物，用用硅膠柱色譜分離下列一組化合物，用CHClCHCl3 3-MeOH-MeOH進(jìn)行洗脫，進(jìn)行洗脫，這四個(gè)化合物流出順序?yàn)檫@四個(gè)化合物流出順序?yàn)镃 A B DOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOHOOOHOHOHOH

10、CH3CH3 以聚酰胺柱色譜分離下列化合物，以濃度遞增的乙醇以聚酰胺柱色譜分離下列化合物，以濃度遞增的乙醇液洗脫時(shí)的洗脫先后順序：液洗脫時(shí)的洗脫先后順序： A AC CB BC A BB BA AC COOOHHOOHOHOOOHOHHOOHO葡萄糖甙OOOHHOOHOH 以聚酰胺柱色譜分離下列化合物，以濃度遞增的乙醇以聚酰胺柱色譜分離下列化合物，以濃度遞增的乙醇液洗脫時(shí)的洗脫先后順序：液洗脫時(shí)的洗脫先后順序： B A C 用硅膠柱層析，以不同濃度的氯仿用硅膠柱層析，以不同濃度的氯仿- -甲醇進(jìn)行梯度洗脫，流出柱甲醇進(jìn)行梯度洗脫，流出柱外的順序是外的順序是 ( )( )( )( ).( )(

11、)( )( ). 用聚酰胺柱層析，以不同濃度的乙醇用聚酰胺柱層析，以不同濃度的乙醇- -水進(jìn)行梯度洗脫，流出柱水進(jìn)行梯度洗脫，流出柱外的順序是外的順序是 ( )( )( )( ). ( )( )( )( ). OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOGlcOOHOOHOHOGlcRhaABCDA AA AB BB BC CC CD DD DOOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOGlcOOHOOHOHOGlcRhaABCD在硅膠柱色譜上的出柱順序?yàn)樵诠枘z柱色譜上的出柱順序?yàn)?（ ） （ ） （ ）在聚酰胺柱色譜上的出柱順序?yàn)樵诰埘０分V上的出柱順序

12、為 （ ） （ ） （ ）在葡聚糖凝膠柱色譜上的出柱順序?yàn)樵谄暇厶悄z柱色譜上的出柱順序?yàn)?（ ） （ ） （ ）OHOOOHO-GlcOHOHAOOHHOOOHOHBOOHHOOOHC分析比較分析比較以下三個(gè)化合物以下三個(gè)化合物A AA AB BB BC CC CA AB BC C第第5 5節(jié)節(jié) 黃酮類化合物的檢識(shí)黃酮類化合物的檢識(shí) 一、理化檢識(shí)一、理化檢識(shí)1.1.性狀性狀 黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，少數(shù)（如黃酮苷類）為黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，少數(shù)（如黃酮苷類）為無(wú)定形粉末。無(wú)定形粉末。 2.2.顏色顏色 多呈黃色多呈黃色（一）物理檢識(shí)（一）物理檢識(shí)3.3.旋光性旋光性 游離的各種苷元

13、母核中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃游離的各種苷元母核中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷及黃烷醇有族光性外，其余則無(wú)光學(xué)活性。苷類由于在結(jié)烷及黃烷醇有族光性外，其余則無(wú)光學(xué)活性。苷類由于在結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。 4.4.溶解度溶解度 黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷和苷元、黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷和苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。 母核檢識(shí)：母核檢識(shí)： 鹽酸鹽酸- -鎂粉反應(yīng)鎂粉反應(yīng) 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮

14、醇 四氫硼鈉反應(yīng)四氫硼鈉反應(yīng) 二氫黃酮（醇）類二氫黃酮（醇）類 五氯化銻反應(yīng)五氯化銻反應(yīng) 查耳酮類查耳酮類取代基團(tuán)檢識(shí)：取代基團(tuán)檢識(shí)： 鋯鹽鋯鹽- -枸櫞酸反應(yīng)枸櫞酸反應(yīng) 3-OH3-OH、 5-OH5-OH黃酮鑒別黃酮鑒別 氨性氯化鍶反應(yīng)氨性氯化鍶反應(yīng) 鄰二酚羥基鄰二酚羥基（二）化學(xué)檢識(shí)（二）化學(xué)檢識(shí) 紙色譜適合分離檢識(shí)各種類型黃酮類化合物，包括苷紙色譜適合分離檢識(shí)各種類型黃酮類化合物，包括苷和苷元。雙向紙色譜能檢識(shí)植物粗提物中黃酮類化合物存和苷元。雙向紙色譜能檢識(shí)植物粗提物中黃酮類化合物存在的最好方法之一。在的最好方法之一。 原理：原理：分配原理分配原理適用范圍：適用范圍：游離黃酮（苷元）

15、及黃酮苷的分離鑒別游離黃酮（苷元）及黃酮苷的分離鑒別 二、色譜檢識(shí)二、色譜檢識(shí)（一）紙色譜（一）紙色譜雙向雙向PCPC 苷元的反相色譜行為苷元的反相色譜行為: : 平面型分子水溶性平面型分子水溶性 非平面型分子非平面型分子平面型分子平面型分子: : 黃酮黃酮( (醇醇) )、查耳酮的、查耳酮的RfRf小小, , 幾乎留在幾乎留在 原點(diǎn)不動(dòng)原點(diǎn)不動(dòng)(R(Rf f 0.02); 單糖苷雙糖苷一般:苷元在0.70以上，而苷則小于0.7。ABCDABCD（二）薄層色譜（二）薄層色譜（TLC）： 用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。 展開(kāi)劑：甲苯展開(kāi)劑：甲苯- -甲酸甲酯

16、甲酸甲酯- -甲酸甲酸(5:4:1)(5:4:1)， 苯苯- -甲醇，氯仿甲醇，氯仿- -甲醇等。甲醇等。： 適合于含游離酚適合于含游離酚OHOH的黃酮及其苷類的分析。的黃酮及其苷類的分析。 聚酰胺對(duì)黃酮類化合物吸附能力強(qiáng)，大多數(shù)展開(kāi)劑中聚酰胺對(duì)黃酮類化合物吸附能力強(qiáng)，大多數(shù)展開(kāi)劑中含有醇、酸或水。含有醇、酸或水。陳皮提取物薄層層析，氯化鋁顯色陳皮提取物薄層層析，氯化鋁顯色獨(dú)活提取物薄層層析獨(dú)活提取物薄層層析黃芪提取物薄層層析熒光檢識(shí)黃芪提取物薄層層析熒光檢識(shí) 紅移：紅移：吸收峰位置向長(zhǎng)波方向移動(dòng)吸收峰位置向長(zhǎng)波方向移動(dòng)紫移：紫移：吸收峰位置向短波方向移動(dòng)吸收峰位置向短波方向移動(dòng)紫外光譜圖提供

17、兩個(gè)重要的數(shù)據(jù)：紫外光譜圖提供兩個(gè)重要的數(shù)據(jù)： 吸收峰的吸收峰的位置（橫坐標(biāo)位置（橫坐標(biāo)- -波長(zhǎng)）波長(zhǎng)）和吸收光譜的和吸收光譜的吸收強(qiáng)度吸收強(qiáng)度。 紫外光譜圖紫外光譜圖第第6 6節(jié)節(jié) 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究 一、一、UVUV光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 測(cè)定樣品在甲醇中的測(cè)定樣品在甲醇中的UVUV譜以了解母核類型；譜以了解母核類型； 在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測(cè)在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測(cè)UVUV譜和可見(jiàn)譜和可見(jiàn)光譜以了解光譜以了解3,5,7,3,43,5,7,3,4有無(wú)羥基及鄰二酚羥基；有無(wú)羥基及鄰二酚羥基； 苷

18、類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測(cè)苷苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測(cè)苷元的元的UVUV譜以了解糖的連接位置。譜以了解糖的連接位置。 可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基?？捎糜诖_定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。 一般程序：一般程序：母核結(jié)構(gòu)（交叉共軛系統(tǒng)）是產(chǎn)生紫外吸收的基礎(chǔ)，其中母核結(jié)構(gòu)（交叉共軛系統(tǒng)）是產(chǎn)生紫外吸收的基礎(chǔ)，其中: : 由苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶由苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶II 240II 240280nm280nm； 由桂皮酰系統(tǒng)電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶由桂皮酰系統(tǒng)電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶I 300I 3004

19、00nm400nm。 （1）母核光譜特征）母核光譜特征： 不同母核的黃酮類化合物由于共軛系統(tǒng)（交叉共軛系統(tǒng)）不同母核的黃酮類化合物由于共軛系統(tǒng)（交叉共軛系統(tǒng)）的不同，由交叉共軛系統(tǒng)產(chǎn)生的帶的不同，由交叉共軛系統(tǒng)產(chǎn)生的帶I I或帶或帶IIII的峰位、峰形、吸收的峰位、峰形、吸收峰的強(qiáng)度也不相同，因此，據(jù)此可用于黃酮母核類型的判斷。峰的強(qiáng)度也不相同，因此，據(jù)此可用于黃酮母核類型的判斷。（一）黃酮類在甲醇中的（一）黃酮類在甲醇中的UV特點(diǎn)特點(diǎn)黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定不同類型黃酮的UV基本特征a. b. 共性：兩者共性：兩者UV光譜圖形相似，帶光譜圖形相似，帶、帶、帶均較強(qiáng)均較強(qiáng)區(qū)別：帶區(qū)別：帶位置不同

20、位置不同 黃酮：黃酮：304350nm 黃酮醇（黃酮醇（3-OH游離）：游離）：358385nm 黃酮醇（黃酮醇（3-OH取代）：取代）：328357nm1.黃酮及黃酮醇類黃酮及黃酮醇類 利用在利用在MeOH中的中的UV區(qū)別黃酮區(qū)別黃酮和和黃酮黃酮醇醇類類Band I黃酮黃酮黃酮醇（黃酮醇（3-O3-O被取代）被取代）黃酮醇（黃酮醇（3-OH3-OH游離）游離）328357304350358385 黃酮類黃酮類在在MeOH中中B環(huán)氧環(huán)氧代代對(duì)對(duì)Band I的影的影響響OOOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOH3,5,7-3,5,7,4-3,5,7,3,4-三羥基黃酮四羥基黃酮

21、五羥基黃酮高良姜素山奈酚槲皮素359367370紅移紅移紅移紅移OOOHOOOHOHOOOHOHOH7-5,7-5,6,7-羥基黃酮二羥基黃酮三羥基黃酮252262274紅移紅移 黃酮類在黃酮類在MeOH中中A環(huán)氧代對(duì)環(huán)氧代對(duì)Band II的影響的影響252268274紅移紅移紅移紅移OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOH c.d.共性：帶共性：帶為主峰，帶為主峰，帶很弱，常在主峰的長(zhǎng)波方向有一肩峰。很弱，常在主峰的長(zhǎng)波方向有一肩峰。區(qū)別：帶區(qū)別：帶峰位不同峰位不同 異黃酮：異黃酮： 245270nm 二氫黃酮（醇）：二氫黃酮（醇）：270295nm2.異黃酮、二氫黃酮（醇）類異黃酮、二

22、氫黃酮（醇）類OOOOHOOHHOe. f.共性：帶共性：帶很強(qiáng)，為主峰，很強(qiáng)，為主峰， 帶帶較弱，為次強(qiáng)峰，帶較弱，為次強(qiáng)峰，帶:220270nm區(qū)別：帶區(qū)別：帶峰位不同峰位不同 查爾酮：查爾酮：340390nm 橙酮：橙酮： 370430nm 3.查爾酮及橙酮類查爾酮及橙酮類OHOHOOHOHOOCHOHOH（二）（二）加入診斷試劑的加入診斷試劑的UV光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOMeNaOMe -

23、 -OOOHHOOHOHOglc 61rha+50nm,+50nm,強(qiáng)度增加（不降）強(qiáng)度增加（不降）有有4 4 -OH -OH 1.NaOMeOOOHOOHOCH3OHrha200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOMeNaOMe - -+50nm+50nm，強(qiáng)度降低，強(qiáng)度降低有有3-OH3-OH，無(wú)，無(wú)4 4 -OH -OH 1.NaOMe堿性較弱，酸性強(qiáng)的堿性較弱，酸性強(qiáng)的Ar-OH解離解離帶帶，+520nm 示有示有7-OHOOOHHOOHOHOglc 61rha2.NaOAc（未熔融）（未熔融）200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOAcNaOAc

24、 - -+12nm+12nm3. NaOAc/H3BO3：用于用于鑒鑒定定鄰鄰二二酚酚OH。 在醋酸在醋酸鈉堿鈉堿性下，性下，鄰鄰二二酚酚OH與與硼酸硼酸絡(luò)絡(luò)合，引起峰合，引起峰帶紅帶紅移。移。3. NaOAc/H3BO3OOOOBOHOHOOBHOHOAB帶帶 ，+510nm A環(huán)有鄰二環(huán)有鄰二Ar-OH帶帶，+1230nm B環(huán)有鄰二環(huán)有鄰二Ar-OH3. NaOAc/H3BO34. AlCl3 5. AlCl3 /HCl： 分子中有分子中有3-OH，5-OH，鄰二酚，鄰二酚OH時(shí)，可與時(shí)，可與Al3+絡(luò)合，絡(luò)合，引引 起吸收峰紅移。起吸收峰紅移。： 黃酮醇黃酮醇3-OH 黃酮黃酮5-OH

25、 二氫黃酮二氫黃酮5-OH 鄰二酚鄰二酚OH 二氫黃酮醇二氫黃酮醇3-OHAlCl3 和和AlCl3 /HClOOOOAl2+OOOHOHHOHCl/H2OOOOHOHHOHOOHOAlOAl2+2+AlCl3OOOOAl+OAlOOOHOHOHHO2+HCl/H2OOOOHOHOAl2+HOHOAlCl3OOOOAl2+OOOHOHHOHOHCl/H2OAlCl3AlCl3 和和AlCl3 /HClOOOHHOOHOHOglc 61rhaAlCl3 AlCl3/HCl-43nm-43nmB B環(huán)有鄰二環(huán)有鄰二ArAr-OH-OHAlCl3 和和AlCl3 /HCl 黃酮（醇）： 帶 II、帶

26、I均強(qiáng)母核光譜特征 二氫黃酮類、異黃酮類：帶 II強(qiáng)、 帶I弱 母核的推斷母核的推斷 （甲醇） 查耳酮、橙酮：帶 II弱、帶I強(qiáng) 取代基：OH等，為助色團(tuán) 依紅移規(guī)律推斷取代基團(tuán)依紅移規(guī)律推斷取代基團(tuán)甲醇鈉：強(qiáng)堿，所有酚羥基解離醋酸鈉：堿性弱，酸性強(qiáng)的酚羥基解離 醋酸鈉/硼酸：鄰二酚羥基絡(luò)和三氯化鋁：3-OH，4-羰基 5-OH，4-羰基 絡(luò)和 鄰二酚羥基加入診斷試劑加入診斷試劑相應(yīng)吸收峰紅移相應(yīng)吸收峰紅移實(shí)例實(shí)例P.107OOOHOHOHOH木犀草素木犀草素 4357 二、二、1 1H-NMRH-NMR譜在黃酮結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用譜在黃酮結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 常用溶劑有常用溶劑有CDClCDCl3

27、3，適用于測(cè)定極性較小的黃酮苷元。極性，適用于測(cè)定極性較小的黃酮苷元。極性較大的黃酮類化合物應(yīng)用較大的黃酮類化合物應(yīng)用DMSO-dDMSO-d6 6（全氘代的二甲亞砜）或?qū)ⅲㄈ亩讈嗧浚┗驅(qū)悠废戎瞥扇谆杳蜒苌?，用樣品先制成三甲基硅醚衍生物，用CClCCl4 4作為測(cè)定溶劑作為測(cè)定溶劑，但不能，但不能顯示羥基質(zhì)子特征，目前已基本不被采用。顯示羥基質(zhì)子特征，目前已基本不被采用。 用用DMSO-dDMSO-d6 6作為溶劑，對(duì)黃酮苷及苷元均能溶解，能測(cè)定作為溶劑，對(duì)黃酮苷及苷元均能溶解，能測(cè)定- -OHOH質(zhì)子信號(hào)，但質(zhì)子信號(hào)，但DMSO-dDMSO-d6 6沸點(diǎn)高，樣品不易回收。沸點(diǎn)

28、高，樣品不易回收。(一一) C環(huán)質(zhì)子環(huán)質(zhì)子1. 黃酮黃酮: H-3, d dH 6.3, s (尖尖單單峰峰)OOH2. 異黃酮異黃酮H-2受受 C=O 影響，影響，d dH 7.67.8, sOHO 3. 二二氫黃酮?dú)潼S酮(醇醇)OOHAHBHX二氫黃酮二氫黃酮ABXABX系統(tǒng)系統(tǒng) 二氫黃酮醇二氫黃酮醇OOOHHAHB4. 查查耳耳酮酮及橙及橙酮類酮類OHH2345623456OCHO1234561234567芐氫S,6.50 6.70H-H-H-H-d, J = 17.0 Hz6.70 7.407.00 7.701) 5,7-二二OH取代取代 A環(huán)上只有環(huán)上只有H-6, H-8;為為間位偶

29、合間位偶合, d dH 5.706.90,d峰峰, H-6 較高場(chǎng)較高場(chǎng)OOH8OHHOH6（二）（二）A環(huán)質(zhì)子環(huán)質(zhì)子 2) 7-OH取代取代 H-5: C=O去屏蔽去屏蔽 ，d dH =8.0OOH8H5HOH6 H-5 H-6 H-8 d dd dJ5,6=Jo=9.0Hz J6,5=Jo=9.0Hz J8,6=Jm=2.5Hz J6,8=Jm=2.5Hz (三三) B環(huán)質(zhì)子環(huán)質(zhì)子1) 4-OR取代取代 為為AABB系統(tǒng)系統(tǒng) 四重峰四重峰d dH 6.57.9ORBABABORBOR 2) 3,4-二二OR H-6 H-2 H-5 d dH 7.27.9 6.77.1 dd d d Jo=

30、8.5Hz Jm=2.5Hz Jo=8.5Hz Jm=2.5Hz 3) 3,4,5-三三OR H-2,6d dH 6.57.5, sORORORB(四四) 糖上的質(zhì)子糖上的質(zhì)子黃酮苷類化合物上糖的質(zhì)子信號(hào)（端基質(zhì)子）黃酮苷類化合物上糖的質(zhì)子信號(hào)（端基質(zhì)子） 黃酮醇黃酮醇-3-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 5.70 6.00 黃酮醇黃酮醇-3-O-鼠李糖苷鼠李糖苷 5.00 5.10 黃酮類黃酮類 -7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 4.80 5.20 黃酮類黃酮類-4-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黃酮類黃酮類 -5-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黃酮類黃酮類-6 及及 8-C-糖苷糖苷甲氧基質(zhì)子甲氧基質(zhì)子甲甲氧基質(zhì)子信號(hào)一

31、般在：氧基質(zhì)子信號(hào)一般在：d dppm 3.50 4.10 (四四) 其他質(zhì)子其他質(zhì)子6-及及8-CH3dHdH 2.0且且6-CH3質(zhì)質(zhì)子子較較8-CH3質(zhì)質(zhì)子稍高子稍高場(chǎng)場(chǎng)0.2ppm三、三、1313C-NMRC-NMR譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 利用利用1313C-NMRC-NMR譜中黃酮類化合物的中央三個(gè)譜中黃酮類化合物的中央三個(gè)碳核信號(hào)的位置以及它們?cè)谄舱袢ヅ甲V中的碳核信號(hào)的位置以及它們?cè)谄舱袢ヅ甲V中的裂分情況裂分情況 。黃酮類化合物骨架類型的判斷黃酮類化合物骨架類型的判斷178.4163.2153.6133.7129.0126.3OO131

32、.8131.6125.2125.7124.0118.1107.6129.0126.3利用黃酮類化合物中芳香碳原子利用黃酮類化合物中芳香碳原子（A-A-環(huán)碳原子、環(huán)碳原子、B-B-環(huán)碳原子）的信號(hào)特征環(huán)碳原子）的信號(hào)特征確定取代基的取代圖式確定取代基的取代圖式黃酮母核黃酮母核1313C-NMRC-NMR信號(hào)歸屬信號(hào)歸屬四、質(zhì)譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用四、質(zhì)譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用方法：方法：EI-MSEI-MS（電子轟擊質(zhì)譜）、（電子轟擊質(zhì)譜）、FD-MSFD-MS（場(chǎng)解吸質(zhì)譜）、（場(chǎng)解吸質(zhì)譜）、FAB-MSFAB-MS（快原子轟擊質(zhì)譜）（快原子轟擊質(zhì)譜）苷元：苷元：EI-MSEI

33、-MS可得到分子離子峰可得到分子離子峰( (強(qiáng)強(qiáng), , 往往為基峰往往為基峰) )；苷：苷：用用FD-MSFD-MS、FAB-MSFAB-MS或?qū)⑦白鞒杉谆蛉谆杳鸦驅(qū)⑦白鞒杉谆蛉谆杳鸦苌?，再測(cè)衍生物，再測(cè)EI-MSEI-MS。黃酮類化合物黃酮類化合物MSMS特征特征 測(cè)定分子量（測(cè)定分子量（M+M+）苷元（極性?。┸赵O性?。〦I-MS（以前）：苷看不到（以前）：苷看不到,須制備成衍生物須制備成衍生物PM等）方能等）方能測(cè)得很弱的測(cè)得很弱的M+、苷元峰為基峰。、苷元峰為基峰。 FD-MS、FAB-MS、ESI-MS（目前）：可測(cè)得分子離子（目前）：可測(cè)得分子離子峰峰M+

34、或準(zhǔn)分子離子峰或準(zhǔn)分子離子峰M+1、M+23等。等。EI-MSEI-MS裂解規(guī)律裂解規(guī)律1 1分子離子峰為基峰分子離子峰為基峰M +M +用于測(cè)定分子；用于測(cè)定分子；2 2主要碎片離子峰為裂解途徑主要碎片離子峰為裂解途徑I I 產(chǎn)生的產(chǎn)生的A1A1和和B1B1及裂及裂解途徑解途徑IIII產(chǎn)生的產(chǎn)生的 B2B2+ +。取代基團(tuán)推斷（碎片離子峰）取代基團(tuán)推斷（碎片離子峰）苷（極性大、難氣化、與熱不穩(wěn)定）苷（極性大、難氣化、與熱不穩(wěn)定）裂解途徑裂解途徑I I（RDARDA裂解）：裂解）：OOAB+.+.+.+.+.MOCOCHCA1B1裂解途徑裂解途徑IIII：OOAB+.+.+.+.MCOB2OC

35、HC+ 通常，上述兩種基本裂解途徑是相互競(jìng)爭(zhēng)、相互制約的。并且，途通常，上述兩種基本裂解途徑是相互競(jìng)爭(zhēng)、相互制約的。并且，途徑徑I I裂解產(chǎn)生的碎片離子豐度大致與途徑裂解產(chǎn)生的碎片離子豐度大致與途徑IIII裂解產(chǎn)生的碎片離子的豐度裂解產(chǎn)生的碎片離子的豐度互成反比?；コ煞幢?。m/z=222m/z=105m/z=222m/z=102m/z=120 兩種途徑裂解得到的碎片離子兩種途徑裂解得到的碎片離子A1A1、B1B1、B2B2等，等，保留著保留著A-A-環(huán)、環(huán)、B-B-環(huán)的基本骨架，且碎片環(huán)的基本骨架，且碎片A1A1與相應(yīng)與相應(yīng)的的B1B1碎片的質(zhì)荷比之和等于分子離子碎片的質(zhì)荷比之和等于分子離子M

36、+M+的質(zhì)荷的質(zhì)荷比。比。根據(jù)結(jié)果推斷結(jié)構(gòu)：根據(jù)結(jié)果推斷結(jié)構(gòu)： 母核推斷母核推斷 A A、B-B-環(huán)取代情況確定環(huán)取代情況確定 槐米為豆科植物槐（槐米為豆科植物槐（SophoraSophora japonica L. japonica L.）的花蕾。其主要有效）的花蕾。其主要有效成分為蕓香苷（又稱蘆?。芯S生素成分為蕓香苷（又稱蘆?。?，有維生素P P樣作用，能保持和恢復(fù)毛細(xì)血樣作用，能保持和恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性，臨床上常作為治療高血壓的輔助藥和毛細(xì)血管脆性所致管的正常彈性，臨床上常作為治療高血壓的輔助藥和毛細(xì)血管脆性所致出血的止血藥。出血的止血藥。第第7 7節(jié)節(jié) 含黃酮類化合物的中藥實(shí)例含

37、黃酮類化合物的中藥實(shí)例 蕓香苷為淡黃色的粉末或細(xì)微針狀結(jié)晶，常含蕓香苷為淡黃色的粉末或細(xì)微針狀結(jié)晶，常含3 3分分子結(jié)晶水，加熱至子結(jié)晶水，加熱至185185以上熔融繼而分解。以上熔融繼而分解。 在冷水中溶解度為在冷水中溶解度為1:100001:10000，沸水中，沸水中 1:2001:200，冷乙，冷乙醇中醇中1:6501:650，沸乙醇中，沸乙醇中1:601:60，可溶于乙醇、丙酮、乙酸，可溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶和堿性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿乙酯、吡啶和堿性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿及乙醚中及乙醚中槐米粉末加約6倍水及硼砂適量，煮沸，在攪拌下加入石灰乳至pH89。在保持該pH條件下，微沸2030min，隨時(shí)補(bǔ)充失去的水分，趁熱抽