PBS緩沖液的配制方法

1、PBS緩沖液的配制方法PBSg沖液配方不管是免疫組化，還是細(xì)胞培養(yǎng)中，常用到PBSS沖液，下面是我們實(shí)驗(yàn)室的配方，供大家參考。我們實(shí)驗(yàn)室的配方：A液:0.1mol/L 磷酸二氫鉀：磷酸二氫鉀(KH2PO4 MW136.09)1.361g,加雙蒸水至 100ml。B 液:0.1mol/L 磷酸氫二鈉：酸酸氫二鈉(Na2HPO4.2H2O MW177.99)1.78g,加雙蒸水至100ml。 或者酸酸 氫二鈉(Na2HPO4.12H2OMW358.14)3.58g,力口雙蒸水至 100ml。pH , A 液(ml) , B 液(ml)5.60 , 9.50 , 0.255.91 , 9.00 ,

2、1.006.24 , 8.00 , 2.006.47 , 7.00 , 3.006.64 , 6.00 , 4.006.81 , 5.00 , 5.006.98 , 4.00 , 6.007.17 , 3.00 , 7.007.38 , 2.00 , 8.007.73 , 1.00 , 9.008.04 , 0.50 , 9.50般免疫組化用 PBS只包含Na2HPO4?12H2O酸氫二鈉）NaH2PO4?2H2珊酸二氫鈉)Nacl用于細(xì)胞培養(yǎng)的PBS需含有氯化鉀稱取 8g NaCl、0.2g KCl、 1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸儲(chǔ)水中，用HC

3、l調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸儲(chǔ)水定容至1L即可0.01MPBSS沖液稱取 NaCl 8g, KCl 0.2g , Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g 溶于 900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4,加水定容至1L,常溫保存?zhèn)溆?。PBS是最普遍不過的實(shí)驗(yàn)室緩沖液，但其配方各異。以下是我的總結(jié) ：母液的配制：0.2M Na2HPO4稱取 71.6g Na2HPO4-12H2Q 溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4:稱取31.2g NaH2PO4-2H2Q 溶于1000ml水 各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.

4、4 , 100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4 81ml0.2mol/L 的 Na2HPO4,即可。然后 只需將0.2M PB (pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋 即可，如：0.1M PB(PH=7.4):取 500ml 0.2M PB ,加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB (PH=7.4):取 50ml 0.2M PB ,加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB (PH=7.4):取 100ml 0.2 M PB ,加水稀釋至 1000ml 即可。若需要NaCL的話，加入NaCL至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各種另PH值的0.2M

5、PB(100ml)配方：pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 87.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.518.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.57.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7磷酸鹽緩沖液(P

6、hosphate Buffer, PB),磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉緩沖 液配方磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer, PB)試齊ij: NaH2PO4?2H2O Na2HPO4?12H2O配制方法：配制時(shí)，常先配制 0.2mol/L的NaH2PO本口 0.2mol/L的Na2HPO4兩者按一定比例混合即成 0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液(PB), 根據(jù)需要可配制不同濃度的 PB和PBS(1)0.2mol/L 的 Na2HPO4稱取 Na2HPO4.12H2O 31.2g或NaH2PO4?H2O 27.6g)口重蒸水至 1000ml 溶解。(2)0.2mol/L 的 Na2HPO4稱取

7、NaHPO4.?12H2O 71.632談Na2HPO4?7H2O 53.6或 Na2HPO4?2H2O 35.6g加重蒸水至 1000ml 溶解。(3)0.2mol/L pH7.4 的 PB的配制：取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4?12H2班分混合即為 0.2mol/L 的 PB (pH約為7.4,7.5) o若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來(lái) 加以調(diào)整，室溫保存即可。0.2mol/L 磷酸鹽緩沖液(pH5.7,8.0)pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 5.7

8、93.5 6.5 5.8 92.08.0 5.9 90.0 10.0 6.0 87.7 12.3 6.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.5 6.3 77.522.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51.07.2 28.0 72.0 7.3 23.0 67.0 7.4 19.0 81.0 7.5 16.0 84.0 7.6 13.087.0 7.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7.0 93.0 8.0 5.3 94.7關(guān)于磷酸緩沖溶液的知識(shí)，我在網(wǎng)上搜索了好多帖子，但

9、是還是不能確定正確的答案?，F(xiàn)在把他們鏈接過來(lái)，希望有高手們參與討論，我會(huì)把最終的正確解答整理出來(lái)，提供給大家。PBS可以為三種溶液的英文縮寫，分別是1 .磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution) 、2 .磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline) 及3 .磷酸鹽緩沖鈉(phosphate buffered sodium) ,其配制方法不同，pH值不同，發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不完全相同。如無(wú)特殊說明，生物學(xué)上常用的 PBS是中性磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution) 。無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水(PBS)(0.1

10、5Mol/L PH 7.2)NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g(如為 Na2HPO4?12H2OU為 2.89g)KH2PO4 0.2g將上述試劑依次溶于1 000ml去離子水中，完全溶解后，115?高壓滅菌10min15min,存在4?冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì) 胞培養(yǎng)物。我們用的都是第二種問題1:磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered sodium),為什么用第三種或第 一種呢：這么多年以來(lái)我都以為PBS就是磷酸鹽緩沖溶液，其他兩種說法的英語(yǔ)名稱常 見到，不過我一直都以為他們是差不多的東西。不同的漢語(yǔ)翻譯倒是第一次聽說。我們

11、公司用的PBST很多種，抗體組用的中和 PBS配方就比較簡(jiǎn)單，沒有K譙 子， 只起至IJ緩沖PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4按照不同比例混勻，可以得到不同 PH的緩沖液，用于不同目的，這個(gè)在分子 生物學(xué)中用得很多；用于活細(xì)胞或者細(xì)菌處理的，為了保持滲透壓，會(huì)加入其他的 溶液，最常見的就是NaCl和KCl調(diào)節(jié)離子濃度。以上是個(gè)人的理解，歡迎批評(píng)。：?jiǎn)栴}2:既然抗體組的PBS是起到緩沖PH的作用，那加入80G的NACL乍用是什 么，需要平衡滲透壓?jiǎn)?，還有加入K離子的是不是因?yàn)榧?xì)胞上 NA-K泵的原因啊，血 清里面又沒有細(xì)胞，何來(lái)NA-K泵一說啊，我覺得之所以這么配，其實(shí)就是對(duì)血清中緩沖環(huán)

12、境的一種模擬罷了，血清里面又沒有細(xì)胞，何來(lái)NA-K泵一說啊，我沒說血清撒。我們用的又沒加K,我是說加了 K的的 問題3:不加NACL怎么樣啊，多省錢啊在中和磷酸鹽緩沖液中，NaCl的主要作用應(yīng)當(dāng)是保持一定的離子濃度，以維持 抗體的活性。在離子濃度過高或過低的情況下，蛋白質(zhì)都會(huì)變性，抗體當(dāng)然不例 外。ps:哺乳類需用生理鹽水濃度是0.9%。稱取0.9克氯化鈉，溶解在少量蒸儲(chǔ)水 中，稀釋到100毫升。鳥類需用的生理鹽水濃度是0.75%。稱取0.75克氯化鈉，溶解后用蒸儲(chǔ)水稀釋 到100毫升兩棲類需用的生理鹽水濃度是 0.65%。稱取0.65克氯化鈉，溶解后用蒸儲(chǔ)水稀釋到 100 毫升。/size/font1)4%聚甲醛固定液:4g多聚甲醛加入雙蒸水50mL中，加熱至60?,攪拌并加 入lmol/L氫氧化鈉數(shù)滴，直至溶液變清，冷卻后用o.lmol/L PBS(pH7.4)加至100mL(2)0.lmol/LPBs 緩沖液:SL雙蒸水中溶入40G氯化鈉、1G氯化鉀、7.2G磷酸氫二鈉、1.2G磷酸二氫