免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)課件

1、免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)河北省疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃管理所免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)概述 1、乙肝表面抗原和乙肝表面抗體 2、麻疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測(cè) 3、風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測(cè) 4、白喉和破傷風(fēng)凝集抗體檢測(cè) 5、百日咳凝集抗體和IgG抗體檢測(cè) 6、其它還包括乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎三型抗體檢測(cè)等免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)從檢測(cè)類別上分類 1、免疫成功率檢測(cè) （初免兒童抗體水平檢測(cè)） 2、人群抗體水平檢測(cè) （涉及到多個(gè)年齡組） 3、疾病和疫情的實(shí)驗(yàn)室（血清學(xué)）診斷 包括麻疹、風(fēng)疹等發(fā)熱岀疹性疾

2、病診斷、白喉和破傷風(fēng)以及百日咳的實(shí)驗(yàn)室診斷等。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)初免和健康人群檢測(cè)樣品的獲得 1、一般情況下都應(yīng)通過抽樣獲得被調(diào)查對(duì)象，然后，對(duì)調(diào)查對(duì)象采集靜脈血。 2、常見的抽樣方法： 單純隨機(jī)出樣抽簽法和隨機(jī)數(shù)字表法 系統(tǒng)抽樣 整群抽樣 分層抽樣 多階段抽樣免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)常用的抽樣方法 多階段抽樣 組群抽樣 批質(zhì)量保證抽樣 接種率調(diào)查抽樣方法按容量比例概率抽樣(PPS)與批質(zhì)量檢驗(yàn)抽樣（LQAS）相結(jié)合的方法 特點(diǎn)：分層多階段抽樣；先抽鄉(xiāng)級(jí)單位，再抽村級(jí)單位，最后再抽調(diào)查對(duì)象，采集血標(biāo)本。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)回避 1、隨意確定一個(gè)鄉(xiāng)或村； 2、在鄉(xiāng)級(jí)接種門診等候隨

3、便采血； 3、在村級(jí)由村醫(yī)帶領(lǐng)（隨意）到幾個(gè)家庭采血； 4、到學(xué)校任意找一個(gè)班級(jí)或幾個(gè)班級(jí)隨意采集血； 5、以上這樣做，既浪費(fèi)資源，結(jié)果也無代表性。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)制定采血調(diào)查表 按照調(diào)查目的制定采血登記表，一般采用過錄表。有時(shí)使用個(gè)案表，如病例調(diào)查。 調(diào)查時(shí)，一定要注意被調(diào)查者信息的收集和保持完整。 有時(shí)為了達(dá)到某一目的，按照過去調(diào)查時(shí)掌握的情況，人為確定某些“好的”和“不好的”鄉(xiāng)或村進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)血標(biāo)本的采集 現(xiàn)一般多采用靜脈采血，采血量一般3-5ml，能滿足1.5-2.5ml的血清量，一個(gè)人份可以同時(shí)能滿足檢測(cè)多項(xiàng)指標(biāo)的要求。同時(shí)，對(duì)于有重大意義的血

4、清標(biāo)本，還同時(shí)能夠滿足備份的要求。 尤其是對(duì)于2-5歲以下幼兒的采血，每個(gè)縣級(jí)單位一定要有2-3名技術(shù)數(shù)量的人員，才能夠保證血標(biāo)本的采集。 采血時(shí)一定要制定編號(hào)規(guī)則，統(tǒng)一編號(hào)，血標(biāo)本采集后及時(shí)標(biāo)號(hào)。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)血清標(biāo)本的收集和保存 血標(biāo)本采集后一定要及時(shí)分離血清，切不可長時(shí)間在常溫下放置，否則可能會(huì)導(dǎo)致污染，廢棄。 血標(biāo)本采集后最好是放在室溫凝集，及時(shí)離心后，分離出血清，血清標(biāo)本-20保存。血標(biāo)本采集后4 保存可能要在一定程度上會(huì)降低抗體滴度。 如果需要過夜最好是放在4 保存。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)血清標(biāo)本的收集和保存 1、血清標(biāo)本盡量避免反復(fù)凍融，反復(fù)多次凍融也會(huì)降低抗體滴

5、度； 2、必要時(shí)將分成幾份分別保存，可避免反復(fù)凍存。 3、血清標(biāo)本分離后，及時(shí)將血標(biāo)本上的號(hào)碼轉(zhuǎn)移至血清標(biāo)本上，避免號(hào)碼混淆，并及時(shí)與采血單核對(duì)。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)采血和血清收集用品 1、采血現(xiàn)多用一次性采血針（針連著管）和采血管（無菌）； 2、收集血清多用1.5ml尖底、旋蓋、管體尖底、旋蓋、管體和旋蓋帶鏈接和旋蓋帶鏈接的離心管盛放血清。 3、當(dāng)血清較多時(shí)，也可使用2-3ml凍存管。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)環(huán)境條件及設(shè)備 1、生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室。 2、儀器設(shè)備： 培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜、酶標(biāo)儀（405nm、450nm、490nm、650nm)、洗板機(jī)、加樣器（移液器）。 3、

6、加樣器：單道和多道（8道和12道） 單道：1-10l、1-20l、5-50l、5-200l 多道：5-50l、5-200l等。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)的其它用品 1、振蕩器、離心機(jī)、水浴箱、天平、高壓鍋 2、吸管、燒杯、量筒等 3、常用化學(xué)試劑免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)免疫監(jiān)測(cè)及其評(píng)價(jià) 詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)ELISA實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制 詳見pdf文件。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測(cè) 1、國內(nèi)多家試劑公司生產(chǎn)，靈敏度和特異度、重復(fù)性等指標(biāo)各不相同。 2、國內(nèi)多數(shù)公司生產(chǎn)的試劑大多是過關(guān)的，我們現(xiàn)多使用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的。

7、3、考察一家公司生產(chǎn)的試劑可以從靈敏度和特異度、重復(fù)性三個(gè)指標(biāo)來考察。 4、制備自己的質(zhì)控血清，以檢查不同廠家、不同批次的試劑的穩(wěn)定性和可用性。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測(cè) 1、結(jié)果影響因素 試劑穩(wěn)定性； 取樣和血清本身如融血、脂類成分、藥物成分等； 操作者人為誤差和誤操作； 儀器設(shè)備穩(wěn)定性； 不遵守操作規(guī)程，等 實(shí)驗(yàn)中影響結(jié)果最多見的就是血脂。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測(cè) 2、HBsAg陽性結(jié)果的對(duì)待 對(duì)于HBsAg陽性結(jié)果一定要謹(jǐn)慎； 檢查血清（肉眼觀察的）狀態(tài)； 查看其HBsAb結(jié)果； 雙份（孔）重復(fù)檢測(cè)； 必要時(shí)更換試劑重復(fù)檢測(cè)；

8、 相隔一定時(shí)間再次采血雙孔雙項(xiàng)目重復(fù)檢測(cè)。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)麻疹I(lǐng)gG抗體檢測(cè) 麻疹I(lǐng)gG抗體檢測(cè)原始試劑： 指中國CDC國家麻疹實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)的自己包被酶標(biāo)板的半定量的試劑； 試劑主要成分：麻疹病毒抗原、細(xì)胞對(duì)照抗原、酶標(biāo)記抗抗體、底物（鄰苯二胺，OPD）； 其他：無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、檸檬酸、雙氧水、吐溫-20、硫酸等。 檢測(cè)方法：詳見Word文檔免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)麻疹I(lǐng)gG抗體檢測(cè) 麻疹I(lǐng)gG抗體檢測(cè)試劑盒： 國內(nèi)過關(guān)的試劑盒不多，且多為定性試劑，結(jié)果只能提供抗體陽性率，不能計(jì)算免疫水平，結(jié)果提供的信息較少； 目前，過關(guān)的國外試劑，而且國內(nèi)常使用的是德國維

9、潤賽潤公司生產(chǎn)的試劑盒，實(shí)驗(yàn)只需要一孔既可以定性和定量檢測(cè)麻疹抗體水平，結(jié)果以mIU/ml表示；免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)維潤賽潤麻疹I(lǐng)gG結(jié)果 1、抗體150mIU/ml沒有保護(hù)水平； 抗體200mIU/ml達(dá)到保護(hù)水平； 抗體在150200之間為可疑結(jié)果。 2、既可以計(jì)算陽性率，亦可以計(jì)算GMT-抗體幾何平均低度（平均水平）。 3、試劑重復(fù)性與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑相當(dāng)； 4、結(jié)果水平與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑亦相當(dāng)； 5、但GMT的計(jì)算較麻煩，但借助于計(jì)算機(jī)還是比較容易的。 6、試劑價(jià)格較高，96T一般要1800元。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)麻疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)1、原始試

10、劑來自nmlab，試劑需要自己包被，整個(gè)實(shí)驗(yàn)需要2-3天，實(shí)驗(yàn)者要求經(jīng)過正規(guī)培訓(xùn)，結(jié)果不好控制，難度較大，現(xiàn)已不再使用，但熟悉整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作對(duì)于使用試劑盒來說是有很大幫助的。2、現(xiàn)多使用試劑盒檢測(cè)，國產(chǎn)和進(jìn)口的都有，但價(jià)格懸殊。3、現(xiàn)國內(nèi)麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)（國家、省、市級(jí)）多使用的有：廣東珠海海泰、北京貝爾試劑；進(jìn)口德國維潤賽潤試劑等免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)麻疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè) 4、從檢測(cè)原理上來劃分： 捕獲法和間接法兩種。 捕獲法應(yīng)該是優(yōu)于間接法，只是間接法在實(shí)驗(yàn)時(shí)加入了非特異性因子吸附劑，以去除血清中的類風(fēng)濕因子非特異性因子。 國內(nèi)試劑都是捕獲法，維潤賽潤是間接法。 5、來自nmlab的原始試劑

11、檢測(cè)方法詳見Word講稿。 6、來自珠海海泰的試劑檢測(cè)方法詳見Word講稿。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè) 風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)試劑： 1、原來是原始狀態(tài)的試劑；現(xiàn)多采用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)； 2、目前國產(chǎn)試劑盒據(jù)我所知只有深圳科潤達(dá)公司生產(chǎn)的試劑盒可以使用；進(jìn)口的試劑就是德國維潤賽潤的試劑。目前這兩家公司的試劑在全國麻疹風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)中廣泛使用。 3、風(fēng)疹I(lǐng)gG試劑我沒有使用過，大家感興趣可以自己去篩選。如德國維潤賽潤的試劑。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè) 4、風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)與麻疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)一樣，也有間接法和捕獲法?，F(xiàn)將深圳科潤達(dá)公司生產(chǎn)的試劑檢測(cè)方法簡述如下。

12、5、風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)主要用于麻疹疑似病例麻疹I(lǐng)gM抗體陰性血清的檢測(cè)，以及高度懷疑為風(fēng)疹暴發(fā)流行疫情的實(shí)驗(yàn)室診斷。 6、詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)白喉、破傷風(fēng)凝集抗體檢測(cè) 1、白喉、破傷風(fēng)凝集抗體檢測(cè)方法一樣，只是致敏血球不一樣。 2、目前，國內(nèi)只有北京生研所流行病室和中國藥品生制品鑒定所生產(chǎn)該試劑，但每年非常不規(guī)范，時(shí)常斷貨。不能保證正常血清學(xué)監(jiān)測(cè)之需要。 3、試劑主要是白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素致敏的致敏血球和對(duì)照血球，致敏血球是兩種，對(duì)照血球是一種，一般都以綿羊紅細(xì)胞作為載體。 4、檢測(cè)方法詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)百日咳凝集抗體檢測(cè)方法 1、百日咳凝

13、集抗體檢測(cè)方法現(xiàn)在多使用微量凝集實(shí)驗(yàn)，這主要是針對(duì)以前全細(xì)胞百白破疫苗，即針對(duì)百日咳菌體抗原所涉及的實(shí)驗(yàn)。 2、隨著無細(xì)胞百白破疫苗的廣泛推廣和使用，其相應(yīng)的抗原和抗體也隨之發(fā)生改變，所以檢測(cè)方法也要發(fā)生改變，只是目前實(shí)驗(yàn)方法和檢測(cè)試劑需要篩選。 3、有關(guān)微量凝集試驗(yàn)方法和酶標(biāo)實(shí)驗(yàn)方法詳見Word講稿。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測(cè) 1、乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測(cè)是2008年國家要求省級(jí)考核市級(jí)績效考核的內(nèi)容。 2、有關(guān)三類抗體的詳細(xì)檢測(cè)方法，在績效考核中沒有做出詳細(xì)規(guī)定，對(duì)于前兩種抗體現(xiàn)多采用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，國內(nèi)有多家試劑公司生產(chǎn)，只是質(zhì)量各不相同，大家可以自己進(jìn)行篩選。兩種檢測(cè)方法都是定性檢測(cè)。 3、結(jié)合自己所掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法，以及對(duì)調(diào)查對(duì)象的詳細(xì)的接種情況，結(jié)果情況等綜合進(jìn)行考察。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學(xué)檢測(cè)脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測(cè) 1、這方面的檢測(cè)做的比較少，目前常常使用的方法有兩種：脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）和ELISA法檢測(cè)三型IgG抗體。 2、脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）檢測(cè)比較復(fù)雜，需要培養(yǎng)細(xì)胞，對(duì)人員和設(shè)備要求較高。該方法是定量檢測(cè)。 3、 ELISA法檢測(cè)三型IgG抗體相對(duì)要簡單得多，目前國內(nèi)有成品試