免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測課件

1、免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學實驗室檢測河北省疾病預防控制中心免疫規(guī)劃管理所免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測概述 1、乙肝表面抗原和乙肝表面抗體 2、麻疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測 3、風疹I(lǐng)gG抗體和IgM抗體檢測 4、白喉和破傷風凝集抗體檢測 5、百日咳凝集抗體和IgG抗體檢測 6、其它還包括乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎三型抗體檢測等免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測從檢測類別上分類 1、免疫成功率檢測 （初免兒童抗體水平檢測） 2、人群抗體水平檢測 （涉及到多個年齡組） 3、疾病和疫情的實驗室（血清學）診斷 包括麻疹、風疹等發(fā)熱岀疹性疾

2、病診斷、白喉和破傷風以及百日咳的實驗室診斷等。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測初免和健康人群檢測樣品的獲得 1、一般情況下都應通過抽樣獲得被調(diào)查對象，然后，對調(diào)查對象采集靜脈血。 2、常見的抽樣方法： 單純隨機出樣抽簽法和隨機數(shù)字表法 系統(tǒng)抽樣 整群抽樣 分層抽樣 多階段抽樣免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測常用的抽樣方法 多階段抽樣 組群抽樣 批質(zhì)量保證抽樣 接種率調(diào)查抽樣方法按容量比例概率抽樣(PPS)與批質(zhì)量檢驗抽樣（LQAS）相結(jié)合的方法 特點：分層多階段抽樣；先抽鄉(xiāng)級單位，再抽村級單位，最后再抽調(diào)查對象，采集血標本。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測回避 1、隨意確定一個鄉(xiāng)或村； 2、在鄉(xiāng)級接種門診等候隨

3、便采血； 3、在村級由村醫(yī)帶領(lǐng)（隨意）到幾個家庭采血； 4、到學校任意找一個班級或幾個班級隨意采集血； 5、以上這樣做，既浪費資源，結(jié)果也無代表性。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測制定采血調(diào)查表 按照調(diào)查目的制定采血登記表，一般采用過錄表。有時使用個案表，如病例調(diào)查。 調(diào)查時，一定要注意被調(diào)查者信息的收集和保持完整。 有時為了達到某一目的，按照過去調(diào)查時掌握的情況，人為確定某些“好的”和“不好的”鄉(xiāng)或村進行血清學調(diào)查。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測血標本的采集 現(xiàn)一般多采用靜脈采血，采血量一般3-5ml，能滿足1.5-2.5ml的血清量，一個人份可以同時能滿足檢測多項指標的要求。同時，對于有重大意義的血

4、清標本，還同時能夠滿足備份的要求。 尤其是對于2-5歲以下幼兒的采血，每個縣級單位一定要有2-3名技術(shù)數(shù)量的人員，才能夠保證血標本的采集。 采血時一定要制定編號規(guī)則，統(tǒng)一編號，血標本采集后及時標號。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測血清標本的收集和保存 血標本采集后一定要及時分離血清，切不可長時間在常溫下放置，否則可能會導致污染，廢棄。 血標本采集后最好是放在室溫凝集，及時離心后，分離出血清，血清標本-20保存。血標本采集后4 保存可能要在一定程度上會降低抗體滴度。 如果需要過夜最好是放在4 保存。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測血清標本的收集和保存 1、血清標本盡量避免反復凍融，反復多次凍融也會降低抗體滴

5、度； 2、必要時將分成幾份分別保存，可避免反復凍存。 3、血清標本分離后，及時將血標本上的號碼轉(zhuǎn)移至血清標本上，避免號碼混淆，并及時與采血單核對。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測采血和血清收集用品 1、采血現(xiàn)多用一次性采血針（針連著管）和采血管（無菌）； 2、收集血清多用1.5ml尖底、旋蓋、管體尖底、旋蓋、管體和旋蓋帶鏈接和旋蓋帶鏈接的離心管盛放血清。 3、當血清較多時，也可使用2-3ml凍存管。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測血清學檢測環(huán)境條件及設(shè)備 1、生物安全二級實驗室。 2、儀器設(shè)備： 培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜、酶標儀（405nm、450nm、490nm、650nm)、洗板機、加樣器（移液器）。 3、

6、加樣器：單道和多道（8道和12道） 單道：1-10l、1-20l、5-50l、5-200l 多道：5-50l、5-200l等。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測血清學檢測的其它用品 1、振蕩器、離心機、水浴箱、天平、高壓鍋 2、吸管、燒杯、量筒等 3、常用化學試劑免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測免疫監(jiān)測及其評價 詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測ELISA實驗的質(zhì)量控制 詳見pdf文件。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測 1、國內(nèi)多家試劑公司生產(chǎn)，靈敏度和特異度、重復性等指標各不相同。 2、國內(nèi)多數(shù)公司生產(chǎn)的試劑大多是過關(guān)的，我們現(xiàn)多使用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的。

7、3、考察一家公司生產(chǎn)的試劑可以從靈敏度和特異度、重復性三個指標來考察。 4、制備自己的質(zhì)控血清，以檢查不同廠家、不同批次的試劑的穩(wěn)定性和可用性。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測 1、結(jié)果影響因素 試劑穩(wěn)定性； 取樣和血清本身如融血、脂類成分、藥物成分等； 操作者人為誤差和誤操作； 儀器設(shè)備穩(wěn)定性； 不遵守操作規(guī)程，等 實驗中影響結(jié)果最多見的就是血脂。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測乙肝表面抗原和乙肝表面抗體檢測 2、HBsAg陽性結(jié)果的對待 對于HBsAg陽性結(jié)果一定要謹慎； 檢查血清（肉眼觀察的）狀態(tài)； 查看其HBsAb結(jié)果； 雙份（孔）重復檢測； 必要時更換試劑重復檢測；

8、 相隔一定時間再次采血雙孔雙項目重復檢測。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測麻疹I(lǐng)gG抗體檢測 麻疹I(lǐng)gG抗體檢測原始試劑： 指中國CDC國家麻疹實驗室生產(chǎn)的自己包被酶標板的半定量的試劑； 試劑主要成分：麻疹病毒抗原、細胞對照抗原、酶標記抗抗體、底物（鄰苯二胺，OPD）； 其他：無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、檸檬酸、雙氧水、吐溫-20、硫酸等。 檢測方法：詳見Word文檔免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測麻疹I(lǐng)gG抗體檢測 麻疹I(lǐng)gG抗體檢測試劑盒： 國內(nèi)過關(guān)的試劑盒不多，且多為定性試劑，結(jié)果只能提供抗體陽性率，不能計算免疫水平，結(jié)果提供的信息較少； 目前，過關(guān)的國外試劑，而且國內(nèi)常使用的是德國維

9、潤賽潤公司生產(chǎn)的試劑盒，實驗只需要一孔既可以定性和定量檢測麻疹抗體水平，結(jié)果以mIU/ml表示；免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測維潤賽潤麻疹I(lǐng)gG結(jié)果 1、抗體150mIU/ml沒有保護水平； 抗體200mIU/ml達到保護水平； 抗體在150200之間為可疑結(jié)果。 2、既可以計算陽性率，亦可以計算GMT-抗體幾何平均低度（平均水平）。 3、試劑重復性與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑相當； 4、結(jié)果水平與上面介紹的國內(nèi)（nmlab)試劑亦相當； 5、但GMT的計算較麻煩，但借助于計算機還是比較容易的。 6、試劑價格較高，96T一般要1800元。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測麻疹I(lǐng)gM抗體檢測1、原始試

10、劑來自nmlab，試劑需要自己包被，整個實驗需要2-3天，實驗者要求經(jīng)過正規(guī)培訓，結(jié)果不好控制，難度較大，現(xiàn)已不再使用，但熟悉整個實驗操作對于使用試劑盒來說是有很大幫助的。2、現(xiàn)多使用試劑盒檢測，國產(chǎn)和進口的都有，但價格懸殊。3、現(xiàn)國內(nèi)麻疹實驗室網(wǎng)絡（國家、省、市級）多使用的有：廣東珠海海泰、北京貝爾試劑；進口德國維潤賽潤試劑等免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測麻疹I(lǐng)gM抗體檢測 4、從檢測原理上來劃分： 捕獲法和間接法兩種。 捕獲法應該是優(yōu)于間接法，只是間接法在實驗時加入了非特異性因子吸附劑，以去除血清中的類風濕因子非特異性因子。 國內(nèi)試劑都是捕獲法，維潤賽潤是間接法。 5、來自nmlab的原始試劑

11、檢測方法詳見Word講稿。 6、來自珠海海泰的試劑檢測方法詳見Word講稿。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測風疹I(lǐng)gM抗體檢測 風疹I(lǐng)gM抗體檢測試劑： 1、原來是原始狀態(tài)的試劑；現(xiàn)多采用試劑盒進行檢測； 2、目前國產(chǎn)試劑盒據(jù)我所知只有深圳科潤達公司生產(chǎn)的試劑盒可以使用；進口的試劑就是德國維潤賽潤的試劑。目前這兩家公司的試劑在全國麻疹風疹實驗室網(wǎng)絡中廣泛使用。 3、風疹I(lǐng)gG試劑我沒有使用過，大家感興趣可以自己去篩選。如德國維潤賽潤的試劑。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測風疹I(lǐng)gM抗體檢測 4、風疹I(lǐng)gM抗體檢測與麻疹I(lǐng)gM抗體檢測一樣，也有間接法和捕獲法?，F(xiàn)將深圳科潤達公司生產(chǎn)的試劑檢測方法簡述如下。

12、5、風疹I(lǐng)gM抗體檢測主要用于麻疹疑似病例麻疹I(lǐng)gM抗體陰性血清的檢測，以及高度懷疑為風疹暴發(fā)流行疫情的實驗室診斷。 6、詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測白喉、破傷風凝集抗體檢測 1、白喉、破傷風凝集抗體檢測方法一樣，只是致敏血球不一樣。 2、目前，國內(nèi)只有北京生研所流行病室和中國藥品生制品鑒定所生產(chǎn)該試劑，但每年非常不規(guī)范，時常斷貨。不能保證正常血清學監(jiān)測之需要。 3、試劑主要是白喉類毒素和破傷風類毒素致敏的致敏血球和對照血球，致敏血球是兩種，對照血球是一種，一般都以綿羊紅細胞作為載體。 4、檢測方法詳見Word文檔。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測百日咳凝集抗體檢測方法 1、百日咳凝

13、集抗體檢測方法現(xiàn)在多使用微量凝集實驗，這主要是針對以前全細胞百白破疫苗，即針對百日咳菌體抗原所涉及的實驗。 2、隨著無細胞百白破疫苗的廣泛推廣和使用，其相應的抗原和抗體也隨之發(fā)生改變，所以檢測方法也要發(fā)生改變，只是目前實驗方法和檢測試劑需要篩選。 3、有關(guān)微量凝集試驗方法和酶標實驗方法詳見Word講稿。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測 1、乙型腦炎IgG、流行性腦脊髓膜炎IgG、脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測是2008年國家要求省級考核市級績效考核的內(nèi)容。 2、有關(guān)三類抗體的詳細檢測方法，在績效考核中沒有做出詳細規(guī)定，對于前兩種抗體現(xiàn)多采用ELISA方法進行檢測，國內(nèi)有多家試劑公司生產(chǎn)，只是質(zhì)量各不相同，大家可以自己進行篩選。兩種檢測方法都是定性檢測。 3、結(jié)合自己所掌握的實驗技術(shù)和方法，以及對調(diào)查對象的詳細的接種情況，結(jié)果情況等綜合進行考察。免疫規(guī)劃相關(guān)疾病血清學檢測脊髓灰質(zhì)炎抗體檢測 1、這方面的檢測做的比較少，目前常常使用的方法有兩種：脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）和ELISA法檢測三型IgG抗體。 2、脊髓灰質(zhì)炎中和抗體（三型）檢測比較復雜，需要培養(yǎng)細胞，對人員和設(shè)備要求較高。該方法是定量檢測。 3、 ELISA法檢測三型IgG抗體相對要簡單得多，目前國內(nèi)有成品試