植物組織培養(yǎng)實驗報告(1)8頁

1、 實驗一 植物組織培養(yǎng)實驗報告一 實驗目的讓植物組織經(jīng)過脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。二 實驗原理植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至單個細胞，應用無菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來已經(jīng)分化停止生長的細胞，又能重新分裂，形成沒有組織結(jié)構(gòu)的細胞團，即愈傷組織。這一過程稱為“脫分化作用”，已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過程稱“再分化作用”。植物激素在此過程中起著重要的作用，吲哚乙酸（ IAA ）和

2、6 芐基氨基腺嘌呤（ 6 BA ）的比例，決定了根和芽的分化。 三 實驗器材（一）試劑 乙醇、IAA 或 2 ， 4 D 、HgCl 2 （或次氯酸鈉）、6- 芐基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） MS 培養(yǎng)基（二）儀器設備培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100mL ），燒杯，量筒，培養(yǎng)皿，超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀，橡皮筋等三 實驗步驟1. 配制培養(yǎng)基（ 1 ）愈傷組織誘導培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L ， 2,4 D 含量為 2 mg/L ，瓊脂 10 g/L ）。 （ 2 ）試驗培養(yǎng)基：在 MS 培養(yǎng)基中按表 33 1 加入 IAA 和 6BA 。 吲

3、哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。 2. 培養(yǎng)基滅菌 將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 pH 5.8 ，趁熱分裝于 100 mL 三角燒瓶中，每瓶約 20 mL 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，用兩層稱量紙包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 121 （ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出三角燒瓶放在臺子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時滅菌。3. 誘導產(chǎn)生愈傷組織 （ 1 ）取健壯的玫瑰、菊花莖數(shù)段，每段約 5

4、 cm 長，于燒杯中用 0.1% 氯化汞（升汞）浸泡 20 min ，取出用無菌水洗 3 4 次，置于無菌培養(yǎng)皿中，在接種箱中按無菌操作要求剝?nèi)ネ馄ぃń臃N箱事先用紫外燈滅菌 30 min ），用解剖刀切成 5 mm 厚的圓片（棄去開始一片和最后一片），用長鑷子將它接種在誘導培養(yǎng)基上，注意圓片的切口朝向培養(yǎng)基，每瓶接種 4 片，接種后扎好瓶口。 （ 2 ）將已接入植物組織（外植體）的三角燒瓶，培養(yǎng)在 25 溫室中，每星期檢查 l 2 次，剔除材料已被雜菌污染的三角燒瓶， 3 4 周后產(chǎn)生愈傷組織。（ 3 ）選取愈傷組織生長良好的三角燒瓶，用解剖刀將愈傷組織切下，轉(zhuǎn)移到含有不同激素的試驗培養(yǎng)基中（

5、也可以連同原來的外植體一起轉(zhuǎn)移），每瓶放 1 2 塊，仍培養(yǎng)在 25 溫室中，每周 1 2 次觀察不同處理的三角燒瓶中，愈傷組織分化情況，直至長出根和芽。長成的幼小植株即為“試管苗”，可移栽于花盆中。四 實驗結(jié)果植物分生組織培養(yǎng)室指對植物體的分生組織進行離體培養(yǎng)。 因為時間有限及實驗嚴密性等問題，大部分都失敗了，但是仍然有小部分分化發(fā)育了出來。已經(jīng)證明了植物組織能夠經(jīng)過脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。實驗 二 三 植物葉片與莖尖培養(yǎng)一 實驗目的離體葉培養(yǎng)是指包括幼葉片成熟葉片葉柄子葉葉鞘夜間組織葉原基等葉組織作為外植體的無

6、菌培養(yǎng)。由于葉片是植物進行光合作用的重要器官，又是某些植物的繁殖器官，因此離體培養(yǎng)在植物器官培養(yǎng)中占有重要地位。 二 實驗原理 很多植物的葉具有強大的再生能力能從葉片產(chǎn)生不定牙，在離體培養(yǎng)基中，水稻小麥油菜番茄楊樹菊花百合獼猴桃等百余種作物的葉組織已經(jīng)再生并形成完整植株。離體葉培養(yǎng)是指包括幼葉片成熟葉片葉柄子葉葉鞘夜間組織葉原基等葉組織作為外植體的無菌培養(yǎng)。三 實驗材料要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)，個體發(fā)育的早期幼嫩葉片較成熟葉片分化能力較高。例如，煙草成株期葉組織分化和再分化需要的時間較長，而且葉片膨大體積較大，多在刀口處形成大量的愈傷組織和分生細胞團。四 實驗步驟1 外植體的選取及預處理（1） 外植體的選取選取生長健壯 已發(fā)芽 長勢較好 無病害的生姜根莖作為外植體。（2） 材料的預處理取帶牙的枝條或鱗莖球莖，洗衣粉適量沖洗，然后用清潔剪刀剪取帶牙部分，頂芽和腋芽 大芽和小芽分開，繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時旭不停的晃動。再用自來水沖洗干凈，置空培養(yǎng)瓶備用。2 超干凈工作臺無菌操作準備3 外植體消毒4 材料的處理5 接入培養(yǎng)基培養(yǎng)基瓶放入工作臺中，將剝奪的材料分別用消毒的鑷子放入培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶蓋，置培養(yǎng)藍內(nèi)，寫上培養(yǎng)時間操作人及培養(yǎng)品