殺蟲劑生物測(cè)定技術(shù)

1、第二章 殺蟲劑生物測(cè)定技術(shù) u標(biāo)準(zhǔn)試蟲u殺蟲劑生物測(cè)定方法u毒力的表示方法u殺螨劑生物測(cè)定方法u殺蟲劑田間藥效試驗(yàn)一、標(biāo)準(zhǔn)試蟲 標(biāo)準(zhǔn)試蟲是指數(shù)種被普遍采用的具有一定代表性和經(jīng)濟(jì)意義及耐藥能力較穩(wěn)定而均勻的昆蟲群體。標(biāo)準(zhǔn)試蟲的大量供應(yīng)與質(zhì)量均勻是影響生物測(cè)定結(jié)果正確、穩(wěn)定與可靠的最基本因子，同時(shí)也是保證順利地開展和完成生物測(cè)定最基本的條件之一。 （1）粘蟲（Leucania separate Walker），代表鱗翅目咀嚼式口器食葉性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（2）玉米螟（Ostrinia nubilalis），代表為害雜糧作物的鉆蛀性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（3）二化螟（Chilo suppressal

2、is）,代表鉆蛀性水稻害蟲。（可人工飼養(yǎng)）常用的供試?yán)ハx有：（4）還有三化螟、棉鈴蟲、地老虎農(nóng)業(yè)害蟲等。（5）衛(wèi)生害蟲（如蚊、蠅類）（6）倉(cāng)庫(kù)害蟲（米象、赤擬谷盜等）（7）刺吸性害蟲（蚜螨類）（1）在分類上或經(jīng)濟(jì)上有一定的代表性的不同種類的昆蟲；（2）對(duì)藥物敏感性符合要求；（3）容易飼養(yǎng)，能終年提供試材，使測(cè)定工作不受地區(qū)或季節(jié)的限制；（4）在試驗(yàn)中便于控制操作。供試?yán)ハx的要求供試?yán)ハx的要求二、殺蟲劑生物測(cè)定方法 （1）胃毒作用（2）觸殺作用（3）熏蒸作用（4）內(nèi)吸作用 u夾毒葉片法夾毒葉片法u液滴飼喂法液滴飼喂法 u口腔注射法口腔注射法 胃毒作用（胃毒作用（stomach action）的測(cè)

3、定方法）的測(cè)定方法 葉片夾毒法適合于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆蟲，如鱗翅目幼蟲、蝗蟲等。其基本原理是用2張葉片，中間均勻地分布一層殺蟲藥劑，飼喂試蟲，按吞食葉片的面積計(jì)算吞食藥量。夾毒葉片法夾毒葉片法（sandwich method）對(duì)于舐吸式口器的昆蟲不宜用夾毒葉片法，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲喜歡食糖液，可將一定量的殺蟲劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.0010.01ml），直接飼喂昆蟲。液滴飼喂法液滴飼喂法（Feeding of measured drops） 一般適用個(gè)體較大的咀嚼式昆蟲，如家蠶，鱗翅目幼蟲等，處理時(shí)，將藥劑溶解后用微量注射器或手細(xì)管點(diǎn)滴定量的藥液

4、注入試蟲口器中，昆蟲吞食藥液后，轉(zhuǎn)入放有新鮮飼料的容器中培養(yǎng)觀察。這種方法由于從口腔注入藥液時(shí)易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握。因此，應(yīng)用較少?？谇蛔⑸浞谇蛔⑸浞ㄓ|殺作用（觸殺作用（contact action）測(cè)定方法）測(cè)定方法u點(diǎn)滴法點(diǎn)滴法u藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法u浸液法浸液法 室內(nèi)定量測(cè)定觸殺毒力最常用的方法。在測(cè)定觸殺毒力時(shí)，應(yīng)盡量避免藥劑從口器或氣孔進(jìn)入蟲體。直接將藥液點(diǎn)滴到昆蟲的某一部位。多為幼蟲的前胸背板，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁上形成藥膜而侵入體內(nèi)。點(diǎn)滴法點(diǎn)滴法 用噴霧法及噴粉法將藥劑定量地分布于一定表面上，如濾紙、玻璃容器內(nèi)壁及植物葉片等而形成一層均勻的藥膜。使昆蟲在

5、藥膜上接觸一定時(shí)間（424h），檢查擊倒率或死亡率。求出藥劑對(duì)試蟲的毒力。藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法 對(duì)于水生昆蟲（蚊幼蟲、螨類和蚜蟲）將藥劑配成57個(gè)不同濃度有藥液，摘取有一定數(shù)量蚜蟲的豆苗葉片，在不同藥液中浸35s，取出后，用吸水紙吸去多余的藥液，統(tǒng)計(jì)葉片上的蚜蟲數(shù)量，對(duì)照用清水處理。保濕24h，檢查蚜蟲的死亡數(shù)，計(jì)算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法 某些藥劑有內(nèi)吸性如許多有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑可以通過(guò)植株的根、莖、葉等部位吸收到植株的內(nèi)部，隨著植物體液在體內(nèi)的傳導(dǎo)，當(dāng)害蟲取食或刺吸植物時(shí)，藥劑也隨之進(jìn)入害蟲的體內(nèi)并將其殺死。內(nèi)吸作用（內(nèi)吸作用（Systemic action

6、）的試驗(yàn)方法的試驗(yàn)方法 內(nèi)吸殺蟲劑毒力的測(cè)定方法分為直接測(cè)定法和間接測(cè)定法2種。直接法包括莖或葉的局部涂藥、根際施藥及種子處理等。間接法是用處理后的植物，取其葉片研磨成為水劑，加在水中，測(cè)定對(duì)水生昆蟲的毒力。定義定義殺蟲藥劑以氣體的方式通過(guò)害殺蟲藥劑以氣體的方式通過(guò)害蟲的呼吸系統(tǒng)進(jìn)入蟲體，而起到毒殺的作蟲的呼吸系統(tǒng)進(jìn)入蟲體，而起到毒殺的作用稱熏蒸作用。用稱熏蒸作用。目的目的熏蒸作用毒力的測(cè)定的目的主熏蒸作用毒力的測(cè)定的目的主要有要有2 2個(gè)：一是用鑒別殺蟲劑有無(wú)熏蒸作個(gè)：一是用鑒別殺蟲劑有無(wú)熏蒸作用；二是測(cè)定熏蒸劑的殺蟲毒力。用；二是測(cè)定熏蒸劑的殺蟲毒力。注意注意要求在一個(gè)密閉的條件下進(jìn)行，要

7、求在一個(gè)密閉的條件下進(jìn)行，且藥劑不與試蟲接觸。且藥劑不與試蟲接觸。熏蒸作用（熏蒸作用（fumigation action）測(cè)定方法測(cè)定方法毒力的表示方法及計(jì)算致死中量（LD50：Median lethal dose）或致死中濃度（LC50：Median lethal concentration）：藥劑殺死某種生物群體50所需的劑量（LD50）或濃度（LC50）。結(jié)果檢查與結(jié)果檢查與LDLD5050計(jì)算計(jì)算u胃毒作用u觸殺作用以?shī)A毒葉片法以?shī)A毒葉片法為例 昆蟲取食后放在干凈容器中，加入新鮮的植物葉片，在2472h后檢查死亡率。由于各昆蟲的取食量不同，因此必須單獨(dú)觀察記錄。根據(jù)取食面積、單位面積上

8、的著藥量（g/g），根據(jù)單位體重受藥量，由小至大順序排列，由于在取食量較小時(shí)試蟲無(wú)死亡；隨著取食量加大，出現(xiàn)死、活均有出現(xiàn)的劑量范圍；再加大取食量，試蟲全部死亡。這三種表現(xiàn)自然分成三組：（1）生存組（2）生死組（3）死亡組。如實(shí)驗(yàn)中三組數(shù)值均出現(xiàn)，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)成功，如缺其中一組，應(yīng)重做。生存組和死亡組是劃分生死組（中間組）界線的。 將中間組死蟲的每項(xiàng)單位體重藥量累加，除以總死蟲數(shù)得A；中間組活蟲的每項(xiàng)單位體重相加除以活蟲數(shù)得B。將AB除2即得致死中量（g/g），計(jì)算公式為 致死中量（LD50）（AB）/2 供試藥劑設(shè)計(jì)56個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度為一個(gè)處理，每個(gè)處理4060頭，重復(fù)46次，每個(gè)重復(fù)1

9、0頭。 用微量點(diǎn)樣器在供試?yán)ハx的前胸背板上點(diǎn)一定體積的藥量，2448h后檢查死亡蟲數(shù)。統(tǒng)計(jì)死亡率，計(jì)算LD50。 觸殺毒力結(jié)果檢查L(zhǎng)D50（LC50）的計(jì)算死亡率（%）死蟲數(shù)/供試蟲數(shù)X100% 校正死亡率（%）處理組死亡率對(duì)照組死亡度/100對(duì)照組死亡率X100 單位體重受藥量（g/g）處理濃度（ppm）X點(diǎn)滴藥量(l)/試蟲平均體重(g)X100LD50的計(jì)算方法u作圖法作圖法uExcelExcel法法u最小最小2 2乘法乘法 例：用點(diǎn)滴法測(cè)定辛硫磷對(duì)玉米螟5齡幼蟲的毒力，試蟲平均體重為0.046g/頭，每頭試蟲點(diǎn)滴0.8l藥劑丙酮液，48h檢查試蟲死亡率，結(jié)果如表1-1。試計(jì)算辛硫磷對(duì)玉

10、米螟5齡幼蟲的LD50。用計(jì)算器求毒力方程及LD50或LC50v打開計(jì)算器的開關(guān)，先按MODE2進(jìn)入“LR”v按INVAC 清除舊存數(shù)字v按INVMR清除貯存數(shù)字v將濃度的對(duì)數(shù)值作為X輸入到XD,YD，將死亡率查機(jī)率值作為Y輸入到RUNv順次輸入，輸完后，按Kout 3 檢查輸入數(shù)字的組數(shù)。按INV7顯示的數(shù)字為a值按INV8顯示的數(shù)字為b值按INV9顯示的數(shù)字為r值已知 a b ，就可寫出回歸方程y=a+bx求LC50或LD50、LC90、LC95 求LC50 ，按5INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為L(zhǎng)C50求LC90按6.2816 INV Y X ；再按INVLog，顯示的數(shù)字為L(zhǎng)

11、C90 LC95 按6.6449 INV Y X ；再按INVLog，顯示的數(shù)字為L(zhǎng)C95 （1）死亡率的校正：一般情況，若有對(duì)照死亡，需要校正，若對(duì)照死亡超過(guò)20%，應(yīng)重做；如對(duì)照死亡率小于5%時(shí)，也可不必校正。（2）死亡率的范圍：一般，至少有4個(gè)濃度處理試蟲的死亡率應(yīng)在1090%。這樣計(jì)算得到的LD50更可靠。 （3）相關(guān)系數(shù)R：一般應(yīng)在0.9以上。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)u葉片浸液法u玻片浸液法u葉片殘毒法 殺螨劑的毒力測(cè)定方法1 用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖葉螨（如棉葉螨），測(cè)定時(shí)用成螨，且發(fā)育時(shí)間（日齡）一致。2 將成螨轉(zhuǎn)到無(wú)蟲豆苗上，每株40頭左右。葉片浸液法3 將待測(cè)藥劑（乳油或可濕性粉劑）

12、用水稀釋成系列濃度，每一濃度可配4050ml，置于小燒杯中。4 將接上螨的豆苗浸入藥液6s，取出后用吸水紙吸去多余藥液。處理時(shí)先用清水處理對(duì)照 (CK)，再由低濃度至高濃度處理，每一濃度重復(fù)45次。5 處理后豆苗置于25恒溫箱中，保持24h后檢查死亡率。為了防止紅蜘蛛逃逸，可在葉柄基部涂上一圈凡士林。 6 將藥劑濃度取對(duì)數(shù)值，24h校正死亡率（或減退率）取機(jī)率值，用統(tǒng)計(jì)分析法求出毒力回歸式Y(jié)a+bx及LC50值。 本法適于測(cè)定各種雌成螨，飼養(yǎng)時(shí)必須將螨種鑒別、純化，使之為單一種類。以蘋果實(shí)生苗飼養(yǎng)山楂紅蜘蛛，以柑桔苗飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛，螨的齡期應(yīng)一致。浸玻片法1將雙面尼龍膠帶剪成2cm長(zhǎng)，貼在常用

13、的載玻片的一端。2用零毫毛筆挑起34日齡的雌成螨，將其背部粘在膠帶上，每行10頭，粘23行或用毛筆將雌成螨集中在一起。然后將貼在膠帶的玻片的膠面部分輕輕地壓向成螨背部，以粘著為準(zhǔn)，再用毛筆將重疊或不規(guī)則的或死亡的挑去，使其成行保留，這樣比較省時(shí)也省工。3用水將藥劑配成系列濃度，置于小燒杯中，用手持紙片無(wú)螨的一端，將粘有螨的一端置藥液中浸5秒鐘，取出后用吸水紙吸去多余藥液。對(duì)照用清水處理。各處理重復(fù)4次。 4取一白瓷盤，盤底鋪厚2cm的海綿，其上鋪一塊略小一點(diǎn)的藍(lán)布，再鋪一層塑料薄膜，然后加蒸餾水至藍(lán)布。將粘有螨的玻片平放在盤中，再用紗布罩住，置25，相對(duì)濕度85左右溫室中，經(jīng)24h檢查死亡率。

14、用毛筆尖輕輕觸動(dòng)螨足，以不動(dòng)者為死亡。求出毒力回歸式及LC50值。 編號(hào)濃度名稱日期。浸玻片法示意圖浸玻片法示意圖注：。表示為成螨葉片殘效法葉片殘效法此法適用于測(cè)定卵、若螨及背部剛毛過(guò)長(zhǎng)的雌成螨（不易用浸玻片法）。 1 在直徑為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入保溫的葉片2 在葉片上接20頭雌成雌成螨，讓其在葉片上產(chǎn)卵，24h后移去成螨，保留螨卵。3 將待測(cè)藥劑用水稀釋成5個(gè)系列濃度4 將有螨卵的葉片在待測(cè)藥液中浸5s，每一藥液濃度重復(fù)5次，對(duì)照用清水處理。5 將培養(yǎng)皿保持在22，相對(duì)濕度95恒溫箱內(nèi)，每天觀察記載卵的孵化數(shù)及若螨存活數(shù)，直至對(duì)照組全部孵化成若螨。6 計(jì)算藥劑各濃度的殺卵或殺死若蟲的效果。求

15、出藥劑殺卵或若蟲的毒方程及LC50。殺蟲劑田間藥效試驗(yàn) 100對(duì)照組生存率（）處理組生存率（）對(duì)照組生存率（）校正死亡率（）處理組死亡率對(duì)照組死亡率校正死亡率（%）1對(duì)照組死亡率X100注意：u自然死亡在20 以內(nèi)，可以用上面的公式計(jì)算，否則不行；u自然死亡在5以內(nèi)，不必校正死亡率。田間防治試驗(yàn)中最常用的是蟲口減退率：田間防治試驗(yàn)中最常用的是蟲口減退率：100處理前蟲口密度理后蟲口密度處理前的蟲口密度處蟲口減退率（）1001對(duì)照區(qū)蟲口減退率照區(qū)蟲口減退率處理區(qū)蟲口減退率對(duì)更正蟲口減退（）Henderson-Tilton（享德森（享德森遞爾頓）公式：遞爾頓）公式： %100*1aCbCTbaT防效（）Ta處理區(qū)防治后存活的個(gè)體數(shù)量；Tb處理區(qū)防治前存活的個(gè)體數(shù)量；Ca對(duì)照區(qū)防治后存活的個(gè)體數(shù)量；Cb對(duì)照區(qū)防治前存活的個(gè)體數(shù)量。一、填空1。