氣相液相歸一法

1、氣相、液相色譜儀里常說的面積歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法等分別是什么意思？面積歸一化法，以總面積為100%,計算純度多用；外標(biāo)法,需單獨用標(biāo)準(zhǔn)品作成一標(biāo)準(zhǔn)曲線,用于分析供試品；內(nèi)標(biāo)法,除標(biāo)準(zhǔn)品外，還需引入一種合適的內(nèi)標(biāo)物，以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值的比 值作標(biāo)準(zhǔn)曲線,求解供試品與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值的比值所對應(yīng)的供試品的量 .氣相色譜準(zhǔn)歸一化法或相對歸一化法以及該方法的應(yīng)用條件定量測量時，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法，測定雜質(zhì)含量時須采用峰面積法。1、內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量（1）按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子

2、測定用的對照溶液。 取一定量注入儀器，記錄色 譜圖。測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：As/ Cs校正因子（f）=AR/ CR式中As 一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；AR 一對照品的峰面積或峰高；Cs一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CR一對照品的濃度。再取各品種項下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算含量：Ax含量（C x） =fxAs內(nèi)/Cs內(nèi)式中Ax 供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高；C x 供試品（或其雜質(zhì)）的濃度；As內(nèi)一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；Cs內(nèi)一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；f 一較正因子當(dāng)配制校正因子測定用的

3、對照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，使用同一濃度的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。（2）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)是樣品中部含有的組分，否則會使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物 質(zhì)的峰面積。 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的保留時間應(yīng)與待測成分接近，并達到完全分離，即分離度R>1.5。 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)是純度符合要求的化合物，若非純品，無十?dāng)_峰也可使用，已知 含量的較蠢物質(zhì)也可使用，但須扣除內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的重量。2、外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取 一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高）。按下

4、式計算含量：Ax含量（C x） =CAR由于微量注射器不易精確控制進樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測定供試品中某雜質(zhì)或主成 分含量時，以定量或或自動進樣器進樣為好。3、加校正因子的主成分自身對照法4、不加校正因子的主成分自身對照法5、面積歸一化法由于峰面積歸一化法測定誤差大,因此,本法通常只能用于粗略考察供試品中的 雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測量各雜質(zhì)峰 的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積， 計算各峰面積占總峰面積的白 分率。實驗十氣相色譜歸一化定量分析一、實驗?zāi)康?、進一步掌握氣相色譜儀的操作要點2、了解氣相色譜各種定量方法的優(yōu)缺點3、進一步熟練掌握根據(jù)保留值，用

5、已知物對照定性的分析方法4、掌握用歸一化法測定混合物中各組分的含量二、實驗原理氣相色譜的定量分析：峰面積百分比法、歸一化法、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法等。峰面積百分比法 適用于分析響應(yīng)因子十分接近的組分的含量，要求樣品中所有組分均出峰。歸一化法定量準(zhǔn)確， 但它不僅要求樣品中所有組分均出峰，而且要求具備所有組分的標(biāo)準(zhǔn)品，以便于測定校正因子。 內(nèi)標(biāo)法是精密度最高的色譜定量方法，但要選擇一個或幾個合適的內(nèi)標(biāo)物并不總是易事，而且在分析樣品前必須將內(nèi)標(biāo)物加入樣品中。外標(biāo)法簡便易行， 定量精密度相對較低， 而且對操作條件的重現(xiàn)性要求較嚴(yán)。本實驗采用歸一化法。定量分析的依據(jù)：被測組分的質(zhì)量與其色譜峰面積成正比。即峰面積

6、a的測量：A= 1.06hW1/2 ； fi為比例常數(shù)，是定量校正因子，一般色譜手冊中提供有許多物質(zhì)的相對校正因子，可直接使用。定量分析的步驟：第一步，先進行定性分析：化合物在一定的色譜操作條件下，每種物質(zhì)都有一確定的保留值，故作為定性分析的依據(jù)； 在相同的色譜條件下對已知樣品和待測試樣進行色譜分析，分別測量各組分峰的保留值，若某組分峰與已知樣品相同，則可認(rèn)為二者是同一物質(zhì)。從而確定各個色譜峰代表的組分。第二步，歸一化法測定含量：若試樣中含有n個組分，且各組分均能洗出色譜峰，則其中某個組分i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 Wi可按照下式計算：歸一化法的優(yōu)點是簡便、準(zhǔn)確，定量結(jié)果與進樣量無關(guān)，操作條件對結(jié)果影響較

7、??；缺點 是試樣中所有組分必須全部出峰，某些不需要定量的組分也要測出其校正因子和峰面積。三、儀器和試劑1、 儀器：GC-9790氣相色譜儀(溫嶺福立分析儀器有限公司)； FID;毛細管柱，微量進樣 器2、試劑：己烷，庚烷，辛烷，壬烷四、實驗步驟1、氣相色譜儀的基本操作流程(1) 開啟：a、開啟載氣 N2鋼瓶的閥門；b、將氣體凈化器打到“開”的位置；c、打開色譜儀的電源；d、打開色譜工作站；(2) 實驗條件如下：柱溫 100C,汽化室溫度：150 C，檢測器溫度：180C；Na 流速：45mL/min ； H2 40mL/min ;空氣：450mL/min ;紙速：10cm/min(3) 待檢測

8、器FID溫度達到的時候，開啟H2鋼瓶的閥門及打開空氣源的電源，點燃FID;(4) 運行程序一次并用丙酮進樣清洗色譜柱；(5) 進樣，運行；(6) 結(jié)束時，再用丙酮進樣清洗色譜柱，設(shè)置程序。輔助I : 50C； column : 50C； FID : 50 C 先關(guān)閉氫氣、空氣源。等到溫度降至該設(shè)置溫度時，方可關(guān)閉色譜儀電源，最后關(guān)閉載氣閥門。2、混合物的分析(1) 純樣保留時間的測定分別用微量注射器移取純樣(己烷到壬烷)溶液 0.2卬L,依次進樣分析，分別測定出 各色譜峰的保留時間tRo(2) 混合物試液的分析用微量注射器移取 0.2卬L混合物試液進行分析，連續(xù)記錄各組分色譜峰的保留時間， 記

9、錄各色譜峰的峰面積。五、結(jié)果處理1、將混合物試液各組分色譜峰的調(diào)整保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品進行對照，對各色譜峰所代表的組分作出定性判斷。. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ' .2、 根據(jù)峰面積和校正因子，用歸一化法計算混合物試液中各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。各組分的fi值見下表:組分己烷庚烷辛烷壬烷'fi保留時間峰面積質(zhì)里分?jǐn)?shù)3、實驗完畢，按照要求關(guān)閉色譜儀。六、注意事項1、測定時，取樣準(zhǔn)確，進樣要求迅速，瞬間快速取出注射器；注入試樣溶液時，不應(yīng)有氣泡。2、進樣后根據(jù)混合物溶液中各組分出峰高低情況，調(diào)整進樣量，使得出峰最高的約占記錄紙寬

10、度的80%左右。3、測定時，嚴(yán)格控制實驗條件恒定，這是實驗成功的關(guān)鍵。4、為了保護色譜柱，要求載氣首先打開，然后開機，結(jié)束時先關(guān)機，后關(guān)載氣；嚴(yán)格按照要求 的順序開啟和關(guān)閉色譜儀。七、思考題1、進樣操作應(yīng)注意哪些事項？在一定的條件下進樣量的大小是否會影響色譜峰的保留時間和半峰寬度？2、色譜定量方法有哪幾種，各有什么優(yōu)缺點？3、色譜歸一化法有何特點，使用該方法應(yīng)具備什么條件？附：進樣操作(1) 進樣時要求注射器垂直于進樣口，左手扶著針頭以防彎曲，右手拿著注射器，右手食指卡在注射器芯子和注射器管的交界處，這樣可以避免當(dāng)針進到氣路中由于載氣壓力較高把芯子頂 出，影響正確進樣。(2) 注射器取樣時，應(yīng)

11、先用被測試液洗滌56次，然后緩慢抽取一定量試液，并不帶有氣泡。(3) 進樣時，要求操作穩(wěn)當(dāng)、連貫、迅速，進針位置及速度，針尖停留和拔出速度都會影響進樣重現(xiàn)性。(4) 要經(jīng)常注意更換進樣器上的硅橡膠密封墊片，防止漏氣。儀器專場展示：液相色譜色譜柱制備液相色譜關(guān)鍵詞：液相面積歸一法我是做新產(chǎn)品的，基本沒有法定的方法與對照品，所以我們一般都用面積歸一法測定純度與雜質(zhì)等.但越做越發(fā)現(xiàn)有很多問題，如：重現(xiàn)性差的問題，在不同儀器上做的可能不一樣， 不同濃度樣品的結(jié)果不一樣(既使在線性范圍內(nèi))，甚至可能燈能量不一樣檢出的結(jié)果也有差異，有的我覺得理論上不太想得通。所以在此提出來討論，希望大家提出好的意見與經(jīng)驗

12、， 還有些什么地方要特別注意，或者說都有些什么影響因素。謝謝！基本上是粗略的算法。 重現(xiàn)性差很正常。 做定量時該方法沒有意義。 除非你明白樣品中含有 的所有物質(zhì)。謝謝！我也明白這道理。但現(xiàn)在我們的質(zhì)量控制手段只有這樣。測有對照品就沒辦法做外標(biāo)內(nèi)標(biāo)法。雜質(zhì)定不了性也得不到，只有用面積歸一法，這一般倒是客戶認(rèn)可的。只是在做的 時候發(fā)現(xiàn)有重現(xiàn)性的問題。而我們的分析方法是由研發(fā)Q C建立的。我們使用時肯定相應(yīng)的如儀器狀況等條件要變。所以常有麻煩事。我也想將這方法盡量做準(zhǔn)確些啊。歸一化法的優(yōu)點是：簡便、準(zhǔn)確、定量結(jié)果與進樣量重復(fù)性無關(guān)(在色譜柱不超載的范圍內(nèi))、 操作條件略有變化時對結(jié)果影響較小。缺點是

13、：必須所有組分在一個分析周期內(nèi)都流出色譜柱，而且檢測器對它們都產(chǎn)生信號。不適于微量雜質(zhì)的含量測定。歸一法是個沒有辦法的辦法，實屬無奈之舉，目前在沒有對照品之前為止只有如此了。液相一般是不推薦用歸一法定量的，所以還是外購標(biāo)準(zhǔn)品吧！還有建議你們研發(fā)的，要建立外標(biāo)或內(nèi)標(biāo)的方法進行定量，不要貪圖方便給下面的工作找來麻煩！用歸一法也只能這樣了 .要克服你說的弊端，只有換方法，用外標(biāo)法了請你們研發(fā)的人員盡量提純樣品，通過多種方法確定樣品含量，如滴定，分光等，確定樣品的貯存條件和有效期等，再建立準(zhǔn)確的定量方法。主要雜質(zhì)還是可能確定的，請研發(fā)的檢查 一下工藝鏈，一定能發(fā)現(xiàn)主要的副產(chǎn)物，歸一法時，你所選的波長一般都是樣品的吸引波長， 但它并不一定是雜質(zhì)的最佳波長，在雜質(zhì)量不多的情況下很難進行限量的研究，一般可以用自身對照來進行限量。面積歸一化法，就是譜圖中所有峰的按照每個峰面積占總面積的百分比就是該峰的含量，是個相對的含量，不是絕對含量。若想準(zhǔn)確定量可以采用內(nèi)標(biāo)法，外標(biāo)法這個很簡單吧，就是說