生物技術(shù)實踐(選修一)復習提綱

1、生物技術(shù)實踐（選修一）復習提綱【考點一】果酒、果醋的制作1、 果酒制作的原理（ 1）微生物：（單細胞真核生物）生活習性：，在有氧條件下進行有氧呼吸，大量繁殖；無氧條件下能進行酒精發(fā)酵。反應(yīng)方程式：有氧呼吸（場所：）無氧呼吸（場所：）實際應(yīng)用在釀酒工業(yè)中， 通常 先通氣后密封 。先 通氣 的目的是促進酵母菌的有氧呼吸，有利于酵母菌的大量繁殖； 密封 使酵母菌進行無氧呼吸，產(chǎn)生酒精，所以制酒階段裝置必須密封。在家庭制作果酒中，葡萄汁裝瓶留有 1/3 的空間 ，然后密封（不是無O2）。一方面為酵母菌的大量繁殖提供適宜的氧氣，同時 防止發(fā)酵旺盛時，汁液溢出而引起雜菌污染。（ 2）溫度控制酵母菌繁殖的最

2、適溫度是20，所以酒精發(fā)酵一般將溫度控制在。（ 3）菌種來源葡萄酒的自然發(fā)酵， 酵母菌來自于 附著在葡萄皮上的野生型酵母菌，所以用清水沖洗葡萄時，不要反復多次沖洗。葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的原因是隨著酒精度數(shù)的增加，紅葡萄皮的色素進入發(fā)酵液 。釀酒工業(yè)中，常通過接種優(yōu)良酵母菌菌種，提高果酒品質(zhì)。為了分離純凈的酵母菌，可利用酵母菌在缺氧、呈酸性（真菌的最適PH=5.0-6.0 ，而細菌的最適 PH=6.5-7.5 ）的發(fā)酵液中大量生長繁殖， 而絕大多數(shù)其他微生物因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受抑制的活性，進行篩選。2、 果醋制作的原理（ 1）微生物：（生物）生活習性：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解

3、成醋酸；當缺少糖源 時，醋酸菌將 乙醇氧化成醋酸。所以，沒有喝完的葡萄酒因打開瓶蓋適宜的溫度下，放置久了會變酸。反應(yīng)方程式：（ 2）溫度控制：醋酸菌的最適生長溫度是3、 果酒和果醋的制作（ 1） 制作果酒和果醋的實驗流程挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵果酒果醋（ 2）設(shè)計果酒和果醋的實驗方案：發(fā)酵設(shè)備的清洗和消毒：對發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機、盛葡萄汁的器皿等實驗用具進行清洗并消毒（先用溫水反復沖洗，再用70%酒精查實消毒，晾干待用）選擇新鮮的葡萄（500g）：先用清水 沖洗 ，再去除枝梗 晾干榨汁，將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶，蓋上瓶蓋或封閉充氣口：（注意發(fā)酵瓶留有1/3 的空間 ）1將發(fā)酵瓶置于18-25

4、 的溫度下發(fā)酵，每天擰松瓶蓋2-4 次排氣（嚴格控制溫度，及時排氣，但 不要打開瓶蓋） 10d 后開始取樣檢查：酒味、酒精含量、酵母菌數(shù)量等（這是觀察的指標）果酒制成后，在發(fā)酵瓶中繳入醋酸菌或醋曲，將裝置移至30-35 的條件下發(fā)酵，適時向發(fā)酵瓶中 充氣 （嚴格控制溫度，適時充氣）觀察檢查： 菌膜的形成、 嗅味和品嘗進行鑒定， 再通過顯微鏡檢醋酸菌的數(shù)量做進一步的鑒定（這是觀察的指標）（ 3）比較課本P4，圖 1-4a 和 1-4b 實驗裝置，哪個裝置更好？還有什么不足？1-4a1-4b4a 裝置用帶蓋的塑料瓶制葡萄酒， 在發(fā)酵過程中每天要 擰松瓶蓋 2-4 次，但不打開蓋子 ，以放出 CO2

5、 ，并防止發(fā)酵液被污染 ； 10 天可取樣檢驗，如酒味、酒精含量、酵母菌鏡檢；果酒制成后，可在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲，再將裝置移到30-35 的條件下發(fā)酵，適時充氣或?qū)⑵可w打開，但在瓶口上蓋上紗布（減少空氣中灰塵等的污染）。不足：制果酒排氣和取樣時擰松瓶蓋，容易受雜菌污染；制果醋沒有充氣裝置。4b 裝置中充氣口在醋酸發(fā)酵時，鏈接充氣泵，進行充氣（不是沖O2），制酒加料后關(guān)閉；排氣口用于酒精發(fā)酵時排CO2，通過一個 長而彎曲的膠管與瓶身鏈接，可防止空氣中的微生物污染 ，果醋發(fā)酵時 排出多余的空氣、CO2 （有氧呼吸產(chǎn)生的） ；出料口用于取樣檢驗。（ 4）操作注意事項：選擇新鮮的葡萄，榨汁前應(yīng)先

6、沖洗，然后再去除枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會。防止發(fā)酵液被污染：榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈，嚴格消毒；裝入葡萄汁后，及時封閉充氣口；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋控制發(fā)酵條件：葡萄汁裝入發(fā)酵瓶后，要留有 1/3 的空間，既保證酵母菌大量繁殖對微量氧的需求，又防止發(fā)酵旺盛時汁液溢出；制酒應(yīng)將溫度嚴格控制在18-25，因為 20左右最適合酵母菌繁殖、生活力強；制醋應(yīng)將溫度嚴格控制在30-35，因為醋酸菌是嗜溫菌，最適溫度在30-35 。注意葡萄汁中糖的濃度對發(fā)酵產(chǎn)生的影響：葡萄汁中加糖的主要目的是提高葡萄酒的酒精度。但不是糖的濃度越高越好， 發(fā)酵時要注意測定葡

7、萄汁中 糖的濃度 ，過高 會引起酒精積累而抑制發(fā)酵 ；濃度 過低會因酒精含量低而 引起雜菌生長 。（ 5） 結(jié)果與評價：結(jié)果：隨著發(fā)酵程度的加深，液體密度會逐漸變低。因為發(fā)酵時糖被消耗，一部分產(chǎn)生了水和 CO2，大部分產(chǎn)生了酒精和 CO2，水和酒精的密度比糖水低。評價：果酒：發(fā)酵后取樣， 通過嗅味和品嘗進行初步鑒定；還可用顯微鏡觀察酵母菌，并用檢驗酒精的存在與否（在酸性 條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)）果醋：先觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進行初步鑒定；再通過檢測盒比較發(fā)酵前后的PH 作2進一步的鑒定；還可以通過顯微鏡檢查是否有醋酸菌，并統(tǒng)計其數(shù)量。（ 6） 課題延伸如何證實葡萄汁轉(zhuǎn)化成葡萄酒，是

8、由于酵母菌的發(fā)酵作用？將葡萄汁 煮沸后冷卻 ，重復實驗，進行對照。在葡萄酒等果酒的生產(chǎn)中，廣泛使用果膠酶和蛋白酶的酶制劑，為什么？果膠酶的應(yīng)用有利于葡萄的壓榨、葡萄汁的澄清、色素的提取和酒的陳釀化。蛋白酶的應(yīng)用主要是為了促進蛋白質(zhì)水解，使酒精清澈透明?！究键c二】腐乳的制作一、腐乳制作的原理1、參與腐乳發(fā)酵的微生物有，其中起主要作用的微生物，這些微生物都是真菌，進行孢子生殖。2、經(jīng)過毛霉菌的發(fā)酵，豆腐營養(yǎng)成分發(fā)生的變化：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶將脂肪分解成甘油和和脂肪酸。 （注意是胞外分解）二、腐乳制作實驗1、寫出腐乳制作的流程：讓豆腐上長出毛霉加

9、鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制2、 根據(jù)腐乳制作流程和有關(guān)資料設(shè)計實驗，制作腐乳（ 1）將豆腐切成 3cm*3cm*1cm的若干塊 （豆腐含水量為 左右， 水分過多則豆腐不易成型，過少不利于毛霉的生長，因為毛霉的代謝離不開水）（ 2） 將豆腐塊平放在鋪有干粽葉的盤內(nèi)，上面再覆蓋干凈的粽葉，若氣候干燥，可覆蓋保鮮膜。（粽葉能提供菌種、保濕，注意 豆腐塊間留有空隙 ，保持合適的濕度，毛霉是需氧型微生物）（ 3）將平盤放入的地方， 約 5 天。（此溫度不適合細菌、酵母菌和曲霉的生長，而適于毛霉慢慢生長；表面叢生白色的直立菌絲）（ 4）毛霉生長旺盛呈淡黃色時，去除上面的粽葉和包裹平盤的保鮮膜，約36h 以上

10、。（散失熱量、水分和霉味）（ 5）將培養(yǎng)毛坯逐塊分層放在容器中，分層加鹽，約腌制8d。（靠平盤的一邊未長菌絲靠玻璃瓶邊，毛坯與鹽量的比為5:1，隨層數(shù)加高鹽量，瓶口表面鹽要鋪厚些，以防止）（ 6）將料酒和糖按口味不同而而配以各種香辛料混合制成鹵湯。（鹵湯酒精含量控制在為宜，酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關(guān)系：酒精含量過高，抑制蛋白的活性， ；含量過低， ，可能導致豆腐腐敗）（ 7） 將干凈的廣口瓶用高壓鍋在100蒸汽滅菌 30min ，將咸坯擺入瓶中， 加入鹵湯和輔料后，將瓶口用酒精燈加熱滅菌，用膠條密封，常溫下六個月。 （容器嚴格滅菌、封口防止雜菌進入）3、豆腐長白毛是毛霉的，

11、現(xiàn)代腐乳生產(chǎn)是在嚴格無菌的條件下，將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣做的目的是。4、 吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外面有一層致密的皮。這層皮是前期發(fā)酵時在豆腐表面生長的菌絲，它能形成腐乳的體，使腐乳成型，皮對人體無害。5、 腐乳制作過程中，加鹽腌制的目的是：（ 1）可以析出豆腐中的水分，使豆腐變硬；3（ 2）能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)；（ 3）使豆腐具有可口的口味；（ 4）抑制蛋白酶的活性，防止豆腐腐敗變質(zhì)。6、 在腐乳制作的過程中，防止雜菌污染的措施：（ 1）用于制作的設(shè)備要清洗干凈，腌制豆腐的瓶子要高溫嚴格滅菌沸水消毒；（ 2）加鹽腌制、鹵湯中的酒精和香辛料可抑制微生物的生長；（

12、3）裝瓶時，操作要迅速小心，加鹵湯后用膠條將瓶口密封，最好在酒精燈旁操作；（ 4）發(fā)酵溫度控制在 15-18 ，此溫度不適于細菌、酵母菌和曲霉的生長，而適于毛霉慢慢生長。7、 會影響腐乳的風味和質(zhì)量的因素：鹽的用量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、鹵湯的配料等。【考點三】探討加酶洗衣粉的洗滌效果1、常用的酶制劑種類，作用和適用范圍種類作用適用范圍蛋白酶使蛋白質(zhì)水解成氨基酸或小分子催化水解肉、蛋、奶漬和血漬多肽脂肪酶使脂肪水解成甘油和脂肪酸催化水解油脂及皮脂腺分泌物、化妝品污垢淀粉酶使淀粉水解成麥芽糖催化水解醬、粥等污漬纖 維 素使纖維素水解成葡萄糖使絲織物增艷， 過量會損傷棉、 麻等天然纖維酶織物2、比較

13、加酶洗衣粉和普通洗衣粉去污原理的異同：相同：表面活性劑可以產(chǎn)生泡沫，可以將油脂分子分散開；水軟化劑可以分散污垢等；不同：酶可以將大分子有機物分解成易于溶于水的小分子有機物，從而與纖維分開。3、在洗衣粉中添加的酶最主要是堿性蛋白酶，使用這種洗衣粉的注意事項：（ 1）蛋白質(zhì)類纖維（羊毛、蠶絲）織物不能用加酶洗衣粉洗滌： （使蛋白質(zhì)水解，纖維受到損傷）（ 2）注意洗滌用水的溫度（堿性蛋白質(zhì)在35-50時活性最強）（ 3）不宜長期存放（時間過長會導致酶活力損失）（ 4）避免長時間接觸皮膚（可分解人體皮膚表面蛋白質(zhì)）4、影響加酶洗衣粉中酶活性的因素有：溫度、酸堿度和表面活性劑、有機溶劑等5、為了防止溫度

14、、酸堿度和表面活性劑對酶活性的影響，通過一定技術(shù)、生產(chǎn)出能耐酸、耐堿、 忍受表面活性劑和較高溫度的酶， 這種工程技術(shù)是 基因工程 。加酶洗衣粉中的酶是用特殊的化學物質(zhì)包裹的， 遇水后包裹層很快溶解， 釋放出來的酶迅速發(fā)揮催化作用。 這里 未運用酶的固定化技術(shù)，因為酶未固定在不溶于水的載體上，也不能重復利用。6、加酶洗衣粉的使用在環(huán)境保護方面使洗滌劑向低磷方向發(fā)展，減少對環(huán)境的污染7、影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有哪些？水溫；水量（水量不宜過多，但應(yīng)該讓布料充分浸泡在水中，過多的水會使酶濃度降低，影響洗滌效果） ；水質(zhì)（如自來水、蒸餾水，一般使用自來水，因為實際生活中使用的是自來水）；洗衣粉的用

15、量（用天平稱比用勺量好）；衣物的質(zhì)料、大小、顏色（人為在衣物上增加污物，如血漬、油漬等，令人難以接受，選用布料做實驗材料比較可行；在作對照實驗時，嚴格控制布料的大小、顏色及污物的量，待污物干燥后再進行實驗）；浸泡的時間和洗滌時間要相同；洗滌的方式（小型全自動洗衣機機洗比手洗好；實驗中，通常用玻棒攪拌）8、在本課題中可以使用下列方法和標準判斷洗滌效果：（檢測指標）可在 相同洗滌時間后比較污物的殘留狀況，如：已消失、顏色變淺、面積大小；去除相同污4漬所需時間的長短。9、 探究實驗（一）不同溫度條件下加酶洗衣粉的洗滌效果的探討：（ 1） 實驗原理：溫度影響酶的活性，酶有最適溫度（ 2） 自變量：（

16、3） 因變量：（ 4） 無關(guān)變量：水量、水質(zhì)、洗衣粉用量、洗衣粉種類、衣物質(zhì)料、大小、浸泡時間、洗滌時間、洗滌方式等。10、探究實驗（二）探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉對衣物污漬的洗滌效果：（ 1） 自變量：（ 2） 因變量：（ 3） 無關(guān)變量：水量、水質(zhì)、水溫、洗衣粉用量、衣物質(zhì)料、大小、浸泡時間、洗滌時間、洗滌方式等。（ 4） 實驗組處理：污物 +加酶洗衣粉對照組處理：等量的污物+等量的普通洗衣粉11、探究實驗（三）不同種類的加酶洗衣粉對同一污漬的洗滌效果（ 1） 實驗原理：酶的專一性（ 2） 自變量：（ 3） 因變量：（ 4） 無關(guān)變量：水量、水質(zhì)、水溫、洗衣粉用量、衣物質(zhì)料、大小、浸泡時間

17、、洗滌時間、洗滌方式等?！究键c四】酵母細胞的固定化1、 請根據(jù)酶的特性，思考為什么酶廣泛應(yīng)用于食品、化工等領(lǐng)域？催化效率高，低耗能，低污染2、 在工業(yè)生產(chǎn)酶的過程中，存在哪些實際問題？有什么解決的辦法？對環(huán)境（強酸、強堿、高溫和有機溶劑等）條件非常敏感，容易失活；溶液中酶很難回收，提高了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會混合在產(chǎn)物中，影響產(chǎn)品質(zhì)量。設(shè)想：將酶固定在不溶于水的載體上（固定化酶）3、 固定化酶的使用有什么優(yōu)點？存在哪些不足？優(yōu)點： 固定化酶既能與反應(yīng)物接觸，又容易分離，提高了產(chǎn)物質(zhì)量；固定在載體上的酶可以反復利用。不足：一種酶只能催化一種化學反應(yīng)，而在生產(chǎn)實際中，很多產(chǎn)物的形成都是通過一系列的酶

18、促反應(yīng)才能得到的。4、 固定化細胞使用有什么優(yōu)點和不足？優(yōu)點： 成本低、操作容易（細胞比酶分子大），對酶的活性影響小、可以催化一系列反應(yīng)（固定了一系列酶） 、容易回收 。不足：大分子物質(zhì)難以自由通過細胞膜，應(yīng)用受到限制； 固定后的細胞與反應(yīng)物不易接近，可能導致反應(yīng)效果下降等。5、 將酶或細胞固定化的方法（ 1）包埋法：多用于固定化細胞 （酶分子很小，容易從包埋材料中漏出）（ 2）化學結(jié)合法：用于固定化酶 （細胞個大，難以結(jié)合）（ 3）物理吸附法：多用于固定化酶 （細胞個大，難以被吸附）6、 從操作角度思考，固定化細胞與固定化酶相比，固定化細胞更容易，對酶的活性影響小 ：因為微生物產(chǎn)生的酶分為胞

19、外酶和胞內(nèi)酶，利用胞內(nèi)酶時，需要經(jīng)過細胞破5碎、酶的提取和純化的過程，提取后酶的活性和穩(wěn)定性往往會受到很大影響。將微生物制成 固定化細胞后 ，可作為固體催化劑 在多步酶促反應(yīng)中發(fā)揮連續(xù)催化作用 ，同時催化反應(yīng)結(jié)束后又 能被回收和重復利用 。7、如果反應(yīng)物是大分子物質(zhì)， 應(yīng)采用固定化酶技術(shù)， 因為大分子物質(zhì)難以自由通過細胞膜，所以固定化細胞的應(yīng)用受到限制。8、本課題使用的是包埋法固定化細胞，即將微生物細胞均勻包埋在不溶于水的多孔載體中。常用的載體有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。9、酵母細胞固定化技術(shù)的基本步驟：酵母細胞的活化配置 CaCl2 配置海藻酸鈉溶液將海藻酸鈉溶液與酵

20、母細胞的混合固定化細胞沖洗凝膠珠酒精發(fā)酵10、酵母細胞活化的原因：在缺水狀態(tài)下，微生物會處于休眠狀態(tài)，活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)。活化酵母細胞用蒸餾水而不用微生物培養(yǎng)液的原因：培養(yǎng)液中的溶質(zhì)顆粒會一并包埋，影響產(chǎn)品質(zhì)量。11、溶解海藻酸鈉， 應(yīng)該用酒精燈，邊加熱邊攪拌，直至海藻酸鈉溶化。12、配置海藻酸鈉溶液是最重要的一環(huán)，海藻酸鈉濃度過高，將（不是圓形或橢圓形） ；濃度過低，凝膠珠呈白色，。13、將海藻酸鈉與酵母細胞混合前，需將海藻酸鈉溶液冷卻至室溫：14、海藻酸鈉與酵母細胞的混合物滴入CaCl2 溶液中，以恒定速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到 0.05mol/L

21、CaCl2 溶液中；其中CaCl2 的作用是。15、形成拖尾的凝膠珠的原因：海藻酸鈉濃度過高 ，注射器口離 CaCl2溶液過近 ，注射器滴加 速度過快 等。16、將固定的酵母細胞凝膠珠用蒸餾水沖洗2-3 次的目的：使凝膠珠充分定型17、用固定化酵母發(fā)酵過程中錐形瓶密封的原因：酵母菌發(fā)酵需要無氧環(huán)境18、如何觀察固定化酵母發(fā)酵的效果？觀察氣泡的產(chǎn)生、測酒精的生成情況19、為了使固定化酵母細菌能反復利用，操作要注意20、使用固定化細胞應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)，對發(fā)酵液的濃度的要求： 發(fā)酵液的濃度 不宜過高 ，濃度過高， 細胞因失水死亡 。【考點五】 DNA 的粗提取與鑒定1、在真核生物的細胞中， DNA 主

22、要分布在細胞核中，可以用甲基綠將細胞染色，細胞核呈綠色。2、細胞核中的DNA 是游離存在的嗎？細胞核中的DNA 與蛋白質(zhì)和少量的RNA 結(jié)合后呈染色質(zhì)，染色質(zhì)是遺傳物質(zhì)的主要載體。3、提取 DNA 的思路是什么？ DNA 與蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)有哪些不同？思路：利用 DNA 和 RNA 、蛋白質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)等方面的差異，提取DNA, 去除其他成分理化性質(zhì)：（ 1）在不同濃度的 NaCl 溶液中的溶解度不同（方法：選擇適當?shù)柠}濃度，使DNA 充分溶解或沉淀，而使雜質(zhì)沉淀或溶解）（ 2）DNA 不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精（在溶有DNA 的溶液中加入等量的體積分數(shù)為95%的冷酒

23、精，提取含雜質(zhì)較少的DNA ）（ 3）DNA 對酶、高溫和洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但對DNA 沒有影響；大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60-80 的高溫， 而 DNA 在 80以上才會變性； 洗滌劑能瓦6解細胞膜，但對 DNA 沒有影響（在含有 DNA 的濾液中加能嫩肉粉水解蛋白直或?qū)V液放在 60-75 的恒溫水浴箱中保溫）4、 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度曲線如右圖：DNA 在 0.14mol/L 的 NaCl 溶液中，溶解度最小， 在 2mol/L 和 0.015mol/L的 NaCl 溶液中， 溶解度最大。（所以通過加鹽和加水的方法，使 DNA 溶解和析出）5、 DNA 在的

24、條件下，遇會被染成6、 DNA 的粗提取的步驟及目的（ 1） 材料的選取：一定要選取DNA 含量較高的生物材料，否則會由于實驗過程中過多過少的損失而造成檢測的困難雞血 ：細胞核的 DNA 的含量豐富； 雞血細胞容易吸水漲破 （注意：含 DNA 的是雞的血細胞，而不是雞全血）豬血 ：哺乳動物紅細胞內(nèi)的細胞核和線粒體都消失，沒有DNA ，所以不能選用豬血細胞做實驗材料提取 DNA （因為哺乳動物成熟的紅細胞沒有核膜和眾多的細胞器，即沒有核膜和細胞器的膜的混雜，所以是 制備細胞膜的好材料 ）豬肝：肝細胞含有細胞核，有DNA ，但需要勻漿、離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長，不是理想的實驗材料。

25、植物細胞（菜花、洋蔥）：需要切碎，再加入洗滌劑和食鹽，進行攪拌和研磨，過濾收集濾液（洗滌劑溶解細胞膜，食鹽有利于研磨，還能溶解DNA ）（ 2） 破碎細胞，獲取濾液：在雞血細胞中加入蒸餾水，攪拌，過濾收集濾液；若在植物細胞中加入洗滌劑盒食鹽，充分攪拌和研磨，過濾收集濾液（ 3） 去除濾液中的雜質(zhì)根據(jù) DNA 的溶解性、對酶及高溫耐受性的不同等特性，最大限度的將DNA 與雜質(zhì)分開。（ 4） DNA 的純化加入等體積的95%的冷酒精，靜置2-3min ，再用玻棒沿一個方向攪拌（沿一個方向攪拌的目的是防止DNA 斷裂），從而析出含雜質(zhì)較少的DNA 。7、若用雞血做實驗材料，通常不直接用雞全血，而是在

26、索取雞血前，在燒杯中提前放入抗凝劑檸檬酸鈉，經(jīng)離心取雞血細胞進行實驗，因為DNA 存在于血細胞中，血漿中沒有，這樣可以獲得更多的DNA 。檸檬酸鈉是抗凝劑，具有防止血液凝固的作用。8、為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？雞血細胞在低滲溶液（蒸餾水）中吸水漲破，釋放出DNA 。9、提取洋蔥的DNA ，主要包括哪幾個步驟？加入洗滌劑和食鹽的作用是什么？步驟：稱量、剪碎、研磨、過濾洗滌劑：能溶解細胞膜，有利于 DNA 的釋放 （注意：纖維素酶能溶解細胞壁，洗滌劑能溶解細胞膜）食鹽：既有利于充分研磨，也有利于溶解DNA10、提取洋蔥的DNA ，如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？提取的 DNA

27、少，看不到絲狀沉淀物，用二苯胺鑒定不顯藍色。11、破碎細胞后， 獲取的 DNA 濾液中，DNA 和 RNA 往往與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，所以 DNA濾液中可能有核蛋白、多糖和RNA 等成分。方法一：在濾液中加入NaCl（或 2 倍體積的 2mol/LNaCl 溶液），使 NaCl 溶液的濃度為2mol/L（ DNA的溶解度最大） ，過濾收集濾液，除去不溶的雜質(zhì)，再調(diào)節(jié)靜置2-3min ，再用玻棒沿一個方向攪拌 （沿一個方向攪拌的目的是防止DNA 斷裂），NaCl 的濃度為0.14mol/L（方7法：加水稀釋） ，析出 DNA （DNA 的溶解度最?。?，過濾 取紗布上的黏稠物（不用過濾的方法，采用

28、離心的方法會更好） ，去除溶于溶液中的雜質(zhì)。再用NaCl 溶液的濃度為 2mol/L 溶液溶解 DNA （簡述步驟：濾液加濃鹽水過濾 加水過濾）方法二：直接在濾液中 加嫩肉粉 （含木瓜蛋白酶，能使蛋白質(zhì)水解成小分子肽，使DNA 和蛋白質(zhì)分離開來） ，反應(yīng) 10-15min方法三：將濾液在 60-75 的恒溫水浴箱中保溫10-15min（蛋白質(zhì)因變性析出與DNA 分離），過濾取濾液12、 DNA 與蛋白質(zhì)分離或蛋白質(zhì)被分解后，加入等體積的95% 的冷酒精 ，靜置 2-3min ，再用玻棒沿一個方向攪拌 （沿一個方向攪拌的目的是防止DNA 斷裂）13、在 DNA 提取過程中，兩次析出DNA 的方法

29、的比較：第一次析出是利用0.14mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，析出DNA 粘稠物， 通過紗布過濾；第二次析出是利用DNA 不溶于酒精 溶液，用玻棒卷起白色的絲狀物。14、粗提取的 DNA 是白色絲狀物15、 DNA 鑒定如何設(shè)計對照？為什么要設(shè)計對照？取兩支試管，各加入2mol/L （最好是 0.015mol/L ）的 NaCl 溶液 5ml ，在其中一支試管中加入絲狀物，攪拌使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml 的二苯胺試劑， 混勻后沸水浴加熱，冷卻后比較顏色的變化。設(shè)計對照的目的 排除 NaCl 對鑒定結(jié)果的影響 ?！究键c六】微生物的實驗室培養(yǎng)和分離1、培養(yǎng)基（ 1）

30、分類：按物理性質(zhì)分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。（ 2）成分：一般都含有，除此之外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對 PH，特殊營養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的要求。如在培養(yǎng)乳酸桿菌 時，需要在培養(yǎng)基中添加維生素 ；培養(yǎng) 霉菌 時需將培養(yǎng)基的 PH調(diào)至 酸性；培養(yǎng)細菌 時需將 PH調(diào)至中性或微堿性 ；培養(yǎng)厭氧微生物是則需要提供無氧條件。2、無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，重點是：（ 1）消毒（對實驗操作的空間、操作者的衣著和手）煮沸消毒法（在100煮沸 5-6min 可以殺死微生物細胞和一部分芽孢） 巴氏消毒法 （適用于 不耐高溫的液體，如牛奶，在 70-75 或在 80煮 15min，可以殺死牛奶

31、中的微生物，使牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞）化學藥劑消毒（用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源）（ 2）滅菌實驗室常用方法：灼燒滅菌，干熱滅菌，高壓蒸汽滅菌。灼燒滅菌： 接種環(huán)、 接種針或其他金屬用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底的滅菌；試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌。干熱滅菌：在160-170 加熱 1-2 小時可達到目的，能耐高溫、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等。高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋后，把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后，將鍋密閉，繼續(xù)加熱使鍋內(nèi)氣壓逐步上升，溫度也隨之升到100。為達到良好的滅菌

32、效果，一般在壓力為100kpa，溫度為121，維持15-30min 。3、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：8（ 1）稱量時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋，因為牛肉膏和蛋白胨容易吸潮。（ 2）溶化時將稱好的牛肉膏 連同稱量紙 一同放入燒杯，加入少量水，加熱。當牛肉膏溶化并與稱量紙分離后， 用玻棒取出稱量紙。 溶解過程中， 不斷用玻棒攪拌 ，防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。（ 3）培養(yǎng)基利用高壓蒸汽滅菌法，培養(yǎng)皿一般利用干熱滅菌法。（ 4）待培養(yǎng)基冷卻至左右時在酒精燈火焰附近倒平板。錐形瓶的 瓶口通過火焰的目的是： 防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基 ；平板冷凝后將 平板倒置 的原因是： 可以使培養(yǎng)基表面的水分更

33、好的揮發(fā)，防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。4、純化大腸桿菌常用的微生物接種的方法有和。（ 1） 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。灼燒的目的：A 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；B 每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來自上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增多，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。C 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細污染環(huán)境和感染操作者。灼燒接種環(huán)后等其冷卻 后劃線的原因：

34、防止高溫殺死菌種第二次及以后劃線操作時從上一次末端開始劃線的原因：劃線后， 線條末端細菌數(shù)目比起始處要少， 每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目通過劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。（ 2）稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。注意事項：所有操作都要保證無菌。附：培養(yǎng)基的分類和應(yīng)用劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)理半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動，分類和性鑒定質(zhì)固體培養(yǎng)基微生物 分離，鑒定 ，活菌計數(shù)根選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入了抑制或培養(yǎng)， 分離出特定微生物據(jù)促進微生物生長的化學用物質(zhì)途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種指示鑒別 不同種類的微生物劑或化學藥品（ 4） 土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)（一）課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥， 尿素不能直接被農(nóng)作物吸收， 土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因：土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶3、常見的分解尿素的微生物9芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。4、課題目的從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌（二）研究思路1、篩選菌株實驗室中微生物的