第四章 藥典中常見定量分析方法的概述

1、藥典中常見的定量分析方法概述藥物的定量分析 準(zhǔn)確測定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量是評價(jià)藥品質(zhì)量、判定藥物優(yōu)劣的重要手段優(yōu)點(diǎn)儀器設(shè)備簡單易于操作、速度較快成本低準(zhǔn)確度和精密度都較高?；瘜W(xué)分析法的特點(diǎn)缺點(diǎn)靈敏度低，藥物用量大不適合含量少的藥物專屬性不如儀器分析法（易受到干擾）在中外藥典中廣泛應(yīng)用于原料藥的含量測定；儀器分析法的特點(diǎn) 準(zhǔn)確度和精密度越來越高 專屬性也較強(qiáng) 色譜法：先分離后測定，適合組分復(fù)雜、干擾成分較多、難以用滴定分析法測定含量的品種 國內(nèi)外藥典儀器分析法占絕大部分 高效液相色譜、分光光度法化學(xué)分析法一、重量分析法 A揮發(fā)法 B萃取法 C沉淀法 取本品約0.3g，精密稱定，加水50

2、ml溶解后，加稀鹽酸l0ml，搖勻，用乙醚振搖提取5次，第一次100ml，以后每次各25ml，合并乙醚液，用水洗滌2次，每次5ml，合并洗液，用乙醚10ml振搖提取，合并前后兩次得到的乙醚液，置105恒重的蒸發(fā)皿中，低溫蒸去乙醚，并在105干燥至恒重，精密稱定，所得殘?jiān)亓颗c1.087相乘，即得供試品中含有藥物的重量。 請問該法是什么方法？二、酸堿滴定法 的弱酸都可用堿滴定液直接滴定； 的弱堿都可用酸滴定液直接滴定；精密稱取供試品適量，置于錐形瓶中，加入適當(dāng)?shù)娜軇┦蛊淙芙?，精密加入定量過量的酸（堿）滴定液待反應(yīng)完全后，加指示液數(shù)滴，再用酸（堿）滴定液滴定至規(guī)定的突變終點(diǎn)顏色，此為 ， 滴定法三

3、、氧化還原滴定法氧化還原滴定法有哪些方法？碘量法的指示劑是什么？剩余碘量法回滴定用的標(biāo)準(zhǔn)溶液是什么？亞硝酸鈉滴定法的標(biāo)準(zhǔn)溶液是什么？終點(diǎn)指示方法是什么？測定有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機(jī)酸鹽、以及有機(jī)酸堿金屬鹽類藥物的含量的方法是什么滴定法？ 高氯酸法的標(biāo)準(zhǔn)溶液是什么？指示劑是什么？溶劑是什么？ 應(yīng)用較廣的沉淀滴定法是什么？其指示劑是什么？ 配位滴定法的標(biāo)準(zhǔn)溶液是什么？指示劑是什么？紫外分光光度法基本原理單色光輻射穿過被測溶液時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層厚度成正比。 AECl應(yīng)用及注意事項(xiàng)分析對象：含有共軛體系或芳香環(huán)等發(fā)色基團(tuán)，或在一定條件下加入顯色劑或

4、經(jīng)過處理顯色后能對可見光產(chǎn)生吸收的藥物。測定方法：對照液：同批次的溶劑吸收池：1cm的石英池波長：在規(guī)定的吸收峰波長正負(fù)2nm以內(nèi)，測試幾個(gè)點(diǎn)，以吸收度最大的波長為測定波長。吸光度讀數(shù)：0.30.7狹縫寬度：小于吸收帶半寬度的十分之一含量測定方法標(biāo)準(zhǔn)品對照法 Cx（AxAR）CR卡馬西平含量測定取本品，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含10ug的溶液。照紫外可見分光光度法，在285nm波長處測定吸光度；另取卡馬西平對照品，同法測定，計(jì)算，即得。硫噴妥鈉含量測定取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水使硫噴妥鈉溶解并稀釋

5、至刻度，搖勻，精密量取適量，用0.4%氫氧化鈉溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄A），在304nm的波長處測定吸光度；另取硫噴妥鈉對照品適量，精密稱定，用0.4%氫氧化鈉溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。同法測定。根據(jù)每支的平均裝量計(jì)算。每1mg硫噴妥鈉相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaO2S吸光系數(shù)法鹽酸氟奮乃靜的含量測定：取本品，精密稱定，加鹽酸溶液（91000）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含10g的溶液，照分光光度法，在255nm的波長處測定吸收度，吸收系數(shù)為553593。貝諾酯片含量測定取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適

6、量（約相當(dāng)于貝諾酯片15mg），置100ml容量瓶中，加無水乙醇適量，振搖，微溫，使貝諾酯溶解后，放冷。加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，按照紫外可見分光光度法，在240nm得波長處測定吸光度，按C17H15NO5得吸光系數(shù)為745計(jì)算，即得。計(jì)算分光光度法比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線法波長吸光度雜散光儀器的校正和檢定對溶劑的要求截止波長：溶劑的截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器 中使用的最低波長,低于該波長后,溶劑會(huì)有紫 外吸收。高效液相色譜法基本原理高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將規(guī)定得流動(dòng)相泵入裝有填充劑得色譜柱進(jìn)行分離測定得色譜

7、分析方法。供試品經(jīng)進(jìn)樣閥注入，由流動(dòng)相帶動(dòng)通過色譜柱，各成分在柱內(nèi)被分離后，依次通過檢測器，其成分情況轉(zhuǎn)變?yōu)槠渖V信號(hào)情況，并由記錄儀、積分儀或計(jì)算機(jī)記錄、顯示而作為檢驗(yàn)成分得依據(jù)。應(yīng)用色譜柱：ODS檢測器：常用UV流動(dòng)相：有機(jī)相不低于5系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱得理論塔板數(shù) n5.54（tRWh2）2分離度 R2（tR2tR1）（W1W2）重復(fù)性 RSD 2.0%拖尾因子 TW0.05h2d1測定方法內(nèi)標(biāo)法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水(70:30)為流動(dòng)相，檢測波長為281nm 。理論板數(shù)按炔雌醇峰計(jì)算應(yīng)不低于1000，炔雌醇峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。內(nèi)

8、標(biāo)溶液的制備 取醋酸甲地孕酮約20mg，精密稱定，置10ml量瓶中，以無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法 取炔雌醇對照品約40mg，精密稱定，置5ml量瓶中，以無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各2ml ，置10ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10l 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量，同法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。外標(biāo)法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以庚烷磺酸鈉溶液(取庚烷磺酸鈉2.0g，加水900ml溶解后，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.9，加水至1000ml)乙腈甲醇(25:6:1)為流動(dòng)相；檢測波長為254nm。

9、理論板數(shù)按法莫替丁峰計(jì)算應(yīng)不低于1400。測定法 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于法莫替丁50mg），置50ml量瓶中，加甲醇適量，振搖使法莫替丁溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；取經(jīng)五氧化二磷80減壓4小時(shí)的法莫替丁對照品50ml，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取上述兩種溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。氣相色譜法基本原理采用氣體為流動(dòng)

10、相流經(jīng)裝有填充劑得色譜柱進(jìn)行分離測定得色譜方法。應(yīng) 用溶劑殘留量得檢查、乙醇檢查、揮發(fā)性雜質(zhì)檢查、維生素E及其制劑的含量測定。分析方法的驗(yàn)證 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求。 方法驗(yàn)證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。 分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容 （一）準(zhǔn)確度 （二）精密度 重復(fù)性、中間精密度 重現(xiàn)性 （三）專屬性 （四）檢測限 （五）定量限 （六）線性 （七）范圍 （八）耐用性（一）準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度 系指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度 一般用回收率（%）表示。 準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。1含量測定方法的準(zhǔn)確度 原料藥 可用已知純

11、度的對照品或供試品進(jìn)行測定 或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑 用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定。 可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定 用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法2雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。 本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較 應(yīng)明確表明 單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）3數(shù)據(jù)要求 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。 3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液 應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%） 或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。（二）精密度 精密度

12、系指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。 一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。 含量測定和雜質(zhì)的定量測定 重復(fù)性 在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度 中間精密度 在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度 重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度 9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。 3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液 或?qū)⑾喈?dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。1重復(fù)性2中間精密度 考察隨機(jī)變動(dòng)因素對精密度的影響 變動(dòng)因素為 不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。3重現(xiàn)性

13、法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。4數(shù)據(jù)要求 應(yīng)報(bào)告 標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。（三）專屬性 專屬性 系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。 鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測定方法（四）檢測限 檢測限 系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。 鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法 信噪比法 一般以信噪比為3 1或2 1。 （五）定量限 定量限 系指試樣中被測物能被定量測定的最低量 雜質(zhì)定量測定 信噪比法 一般以信噪比為10 1（六）線性 線性 系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 含量測定（七）范圍 范圍 系指能達(dá)到一定

14、精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 例如：原料藥和制劑含量測定，范圍應(yīng)為測試濃度的80%120%；（八）耐用性 耐用性 系指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。例如： 液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有： 流動(dòng)相的組成和pH值、不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱、柱溫、流速等； 項(xiàng)目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定溶出量測定定量限度準(zhǔn)確度-+-+精密度重復(fù)性-+-+中間精密度-+-+專屬性+檢測限-+-定量限-+-線性-+-+范圍-+-+耐用性+某研究擬建立以高效液相色譜法測定解郁安神片中甘草酸含量的方法 方法學(xué)考察 線性關(guān)系 標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=382206.54

15、x4139.33，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。 精密度試驗(yàn) RSD（%） 0.65 穩(wěn)定性試驗(yàn) 12小時(shí)內(nèi)供試品穩(wěn)定性良好 重現(xiàn)性試驗(yàn) 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.39%，表明方法重現(xiàn)性良好 回收率試驗(yàn) 平均回收率為99.61%，符合要求 通過以上方法學(xué)考察，說明甘草酸含量方法穩(wěn)定可行 定量分析有關(guān)計(jì)算 藥物的定量分析 準(zhǔn)確測定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量 原料藥與制劑含量表示方法不同 原料藥的含量用百分含量表示 制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示。原料藥的百分含量 制劑 標(biāo)示量的百分含量 一、原料藥百分含量的計(jì)算 （一）滴定分析法 （二）分光光度法 （三）色譜法（HPLC、GC）（一）滴定分析法1直接

16、滴定法 呋塞米含量測定：取本品0.4988g，加乙醇30ml，微溫使溶解，放冷，加甲酚紅指示液4滴與麝香草酚藍(lán)指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1003 mol/L）滴定至溶液顯紫紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于33.07mg的呋塞米。按干燥品計(jì)算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。2剩余滴定法 司可巴比妥鈉原料藥含量測定：取本品0.1041g，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.1

17、mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品計(jì)算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白實(shí)驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）25.02ml。（二）分光光度法1對照品對照法 奧沙西泮原料藥含量測

18、定：精密稱定0.0150g，置200ml量瓶中，加乙醇150ml，于溫水浴中加熱，振搖使奧沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，在229nm的波長處測定吸光度為0.480；另精密稱取奧沙西泮對照品0.0149g，同法操作，測得229nm的波長處測定吸光度為0.460；藥典規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含C15H11ClN2O2應(yīng)為98.0%102.0%。該供試品含量是否合格？2吸收系數(shù)法 對乙酰氨基酚原料藥含量測定：精密稱取對乙酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置

19、100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻。依照分光光度法，在257nm波長處測得吸收度為0.582。按C8H9NO2的百分吸收系數(shù)為719計(jì)算對乙酰氨基酚的百分含量。（三）色譜法（HPLC、GC）1外標(biāo)法 氫化可的松原料藥含量測定： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑甲醇-水（70 30）為流動(dòng)相；檢測波長為240nm。理論板數(shù)按氫化可的松峰計(jì)算不低于2000，氫化可的松峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求 內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取炔諾酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液，即得。 測定法：精密稱取供試品12.48mg，配成25ml，精密量取該溶液與

20、內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得數(shù)據(jù)如下： 內(nèi)標(biāo)溶液測得數(shù)據(jù)如下：保留時(shí)間峰面積供試品7.252989311內(nèi)標(biāo)物11.004020105 另取氫化可的松對照品13.75mg，配成25ml，同法測定。測得數(shù)據(jù)如下：保留時(shí)間峰面積對照品7.253381565內(nèi)標(biāo)物11.0040200002內(nèi)標(biāo)加校正因子法（1）計(jì)算校正因子：（2）計(jì)算供試品的百分含量： 氫化可的松原料藥含量測定： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑甲醇-水（70 30）為流動(dòng)相；檢測波長為240nm。理論板數(shù)按氫化可的松峰計(jì)算不低于2000

21、，氫化可的松峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求 內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取炔諾酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液，即得。 測定法：精密稱取供試品12.48mg，配成25ml，精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得數(shù)據(jù)如下： 內(nèi)標(biāo)溶液測得數(shù)據(jù)如下：保留時(shí)間峰面積供試品7.252989311內(nèi)標(biāo)物11.004020105 另取氫化可的松對照品13.75mg，配成25ml，同法測定。測得數(shù)據(jù)如下：保留時(shí)間峰面積對照品7.253381565內(nèi)標(biāo)物11.004020000 某藥廠用高效液相色譜法外標(biāo)法測定頭孢唑林鈉含量，取含量

22、為99.5%的頭孢唑林鈉對照品25.13mg，配成溶液，取此溶液10l注入液相色譜儀，測定峰面積，3次測定值分別為：2490189、2492796和2492178；另外稱取頭孢唑林鈉供試品3份，分別為28.13mg、29.35mg和27.10mg，按上法測定，分別取10l溶液注入液相色譜儀，測得峰面積分別為2634858、2763699和2536847，求供試品的百分含量。二、制劑標(biāo)示量的百分含量計(jì)算 （一）滴定分析法 （二）紫外-可見分光光度法 （三）色譜法（HPLC、PC）（一）滴定分析法 甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測定：取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為5.948g，研細(xì)，精密稱

23、取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉紅色，消耗量18.47ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.04ml的甲苯磺丁脲。中國藥典現(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105%。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百分含量，并判斷是否符合規(guī)定。 甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測定：取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為5.948g，研細(xì)，精密稱取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉紅色，消耗量18

24、.47ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.04ml的甲苯磺丁脲。中國藥典現(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105%。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百分含量，并判斷是否符合規(guī)定。 鹽酸普魯卡因注射劑（規(guī)格1ml 50mg）含量測定：精密量取鹽酸普魯卡因注射液2ml，加水40ml，鹽酸溶液（12）15ml，溴化鉀2克，照永停滴定法，用亞硝酸鈉滴定液（0.1032mol/L）滴定，消耗亞硝酸鈉滴定液（0.1032mol/L）滴定液3.50ml。每1ml亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.18mg的C13H2lN30HCI。 （二）紫外-可見分光光度法 1片劑 （1）對照品比較法： （2）吸收系數(shù)法：