臨床微生物與免疫發(fā)展

1、第一節(jié) 臨床微生物與免疫學(xué)發(fā)展史一、微生物、感染與免疫感染（infection）是指病原生物（包括致病性細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲(chóng)）入侵宿主，與宿主免疫防御系統(tǒng)相互作用，引起宿主不同程度病理變化的過(guò)程。AIDS，即獲得性免疫缺陷綜合癥，由美國(guó)疾病控制中心的流行病學(xué)家于1981年在美國(guó)首先發(fā)現(xiàn)。反轉(zhuǎn)錄病毒HIV感染人體后，選擇性吸附在靶細(xì)胞的CD4受體上，在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)環(huán)化、整合、轉(zhuǎn)錄及翻譯、裝配、成熟及出芽，形成成熟的病毒顆粒。機(jī)體產(chǎn)生抗HIV免疫，包括特異性免疫和非特異性免疫反應(yīng)，一特異性免疫反應(yīng)為主。人體免疫系統(tǒng)主要通過(guò)針對(duì)HIV蛋白的各種特異性抗體、特異性CD4+ T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)和CTL直

2、接或分泌各種細(xì)胞因子(如腫瘤壞死因子,干擾素等)，抑制病毒復(fù)制。 “白色瘟疫”結(jié)核病歷史悠久，與人類(lèi)同歲月。最早的證據(jù)可追溯到新石器時(shí)代。它曾在全世界廣泛流行，奪去了數(shù)億人的生命。目前全球大約1/3的人口已感染結(jié)核分枝桿菌，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人。人型結(jié)核分枝桿菌主要通過(guò)呼吸道、消化道和損傷的皮膚等多途徑感染機(jī)體，引起多種臟器組織的結(jié)核病，以肺結(jié)核多見(jiàn)，表現(xiàn)為咳嗽、咯血等癥狀。同時(shí)機(jī)體也會(huì)對(duì)結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生細(xì)胞免疫和遲發(fā)型超敏反應(yīng)。兩位合作多年的澳大利亞科學(xué)家巴里·馬歇爾與羅賓·沃倫（圖1），在發(fā)現(xiàn)了幽門(mén)螺桿菌及其導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍與十二指腸潰瘍等疾病的機(jī)理20多年后，終于收

3、到了一份遲來(lái)的“賀禮”，分享了2005年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。圖1 2005年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)得主巴里·馬歇爾與羅賓·沃倫幽門(mén)螺桿菌定植于胃竇部，借其特殊的螺旋體和端鞭毛穿過(guò)胃粘膜表面的黏液層和上皮細(xì)胞接觸，并且分泌脲酶分解尿素，產(chǎn)生氨中和菌體周?chē)奈杆帷Ｍ瑫r(shí)能誘導(dǎo)胃粘膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，引起炎癥細(xì)胞釋放多種酶類(lèi)使胃組織損傷。二、感染的證據(jù)感染性疾病總是和病原體聯(lián)系在一起，包括細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲(chóng)?？茖W(xué)、準(zhǔn)確的病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果是感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，各種病原體的生物學(xué)特征的不同、現(xiàn)有檢測(cè)方法和技術(shù)的限制、正常菌群和條件致病菌的干擾以及個(gè)體免疫狀態(tài)的差異均可能

4、構(gòu)成病原學(xué)診斷結(jié)果的偏倚。因此，臨床微生物工作者應(yīng)熟悉各種病原體的檢測(cè)流程，掌握各種檢測(cè)方法和技術(shù)的適應(yīng)癥，綜合分析病原學(xué)檢測(cè)的直接和間接證據(jù)，結(jié)合柯赫法則，使病原學(xué)診斷結(jié)果更加準(zhǔn)確。微生物和感染性疾病之間的關(guān)系，長(zhǎng)期以來(lái)一直被科學(xué)家們研究和關(guān)注，直到1876年，德國(guó)醫(yī)生羅伯特.柯赫（Robert Koch，1843-1910）才第一次用實(shí)驗(yàn)證明了炭疽桿菌和炭疽病之間的因果關(guān)系，并提出了著名的柯赫法則（Koch's postulates），作為判斷微生物和感染性疾病之間因果關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)。該法則包括如下內(nèi)容（圖2）：病原微生物一定存在于感染性疾病個(gè)體中，而在健康的個(gè)體中不存在；一定能分離和

5、純培養(yǎng)所懷疑的病原微生物；當(dāng)分離的病原微生物接種敏感的動(dòng)物模型時(shí)，可以導(dǎo)致相同的疾??；相同的病原微生物可再次從這種被感染的動(dòng)物模型中分離到。運(yùn)用該法則，柯赫先后發(fā)現(xiàn)了炭疽、結(jié)核和霍亂等感染性疾病的病原體。圖 2 柯赫法則模式圖然而，隨著微生物學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，人們對(duì)柯赫法則有了新的認(rèn)識(shí)，尤其是在以下幾個(gè)方面認(rèn)為柯赫法則還有待補(bǔ)充和發(fā)展：由于技術(shù)的限制，目前仍有一些微生物不能在體外獲得純培養(yǎng)，如麻風(fēng)病的病原菌麻風(fēng)分枝桿菌、洛磯山斑疹熱的病原菌立克次體等；有些感染目前仍然沒(méi)有建立相應(yīng)的動(dòng)物模型，如導(dǎo)致淋病的淋球菌感染至今缺乏很好的動(dòng)物模型；有些細(xì)菌本來(lái)不致病，但是當(dāng)菌群失調(diào)、獲得了外來(lái)的毒力因子、因

6、創(chuàng)傷或手術(shù)而到達(dá)無(wú)菌的深部組織以及宿主免疫缺陷時(shí)而變?yōu)橹虏【Ｓ绕涫?0世紀(jì)30年代，病毒感染性疾病深入研究和組織培養(yǎng)技術(shù)的快速發(fā)展，以洛克菲洛醫(yī)學(xué)研究所的托馬斯.瑞沃斯（Thomas Rivers）為代表的病毒學(xué)家發(fā)現(xiàn)，柯赫法則和許多病毒感染性疾病的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果不符，如脊髓灰質(zhì)炎患者組織中可以分離到鏈球菌，并可在體外獲得純培養(yǎng)，注射到猴子或兔子等感染模型時(shí)也引起麻痹癥狀，而且可以再次從感染動(dòng)物體內(nèi)分離到鏈球菌，這些均符合柯赫法則，但當(dāng)時(shí)的病毒學(xué)家們已經(jīng)熟悉脊髓灰質(zhì)炎病毒的形態(tài)與鏈球菌有著明顯的區(qū)別，而且知道多種微生物均可以引起麻痹癥狀。于是瑞沃斯對(duì)柯赫法則做了有益的補(bǔ)充，更適合病毒感染病原體

7、診斷的標(biāo)準(zhǔn)，也有人稱(chēng)之為瑞沃斯法則（Rivers postulates）：在所有患者體內(nèi)均應(yīng)該存在并可以分離到該病毒，而在健康者體內(nèi)并不存在；該病毒可以從患者體內(nèi)分離并可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)利用宿主細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)；可以通過(guò)微孔濾膜（即病毒大小的范圍內(nèi)）；當(dāng)原先宿主或相關(guān)生物體和分離的病毒共培養(yǎng)時(shí)，會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)感染性疾病的發(fā)生；共培養(yǎng)的宿主體內(nèi)可再次分離到該病毒；感染后的宿主體內(nèi)可以檢測(cè)到相應(yīng)的病毒免疫反應(yīng)。如2003年新出現(xiàn)的嚴(yán)重急性呼吸道癥候群（Severe Acute Respiratory Syndrome ，SARS），早期有關(guān)SARS的病原體可謂眾說(shuō)紛紜，包括流感病毒、副粘病毒、衣原體和支原體

8、等都曾被懷疑過(guò)，但這些病原體均因不完全符合柯赫或瑞沃斯法則而逐一排除，直到2003年3月底，香港、美國(guó)和德國(guó)的科學(xué)家終于找到了SARS的致病原因，他們?cè)赟ARS病人身上發(fā)現(xiàn)了一種新的冠狀病毒（coronavirus）。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)、電子顯微鏡觀察、聚合酶連反應(yīng)（PCR）及間接免疫熒光抗體檢驗(yàn)(indirect immunofluorescent antibody test)等實(shí)驗(yàn)證據(jù)，以及后來(lái)人工感染一種南美的猴子后，猴子也顯現(xiàn)出SARS間質(zhì)性肺炎的癥狀，并且在感染的猴腎組織中再次分離到該病毒。所有這些均符合柯赫或瑞沃斯法則，因此WHO在2003年4月16日宣布這種從未在人體與動(dòng)物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)的一

9、種全新的冠狀病毒是SARS的致病原因。三、臨床微生物與免疫學(xué)檢驗(yàn)的輝煌歷史（一）臨床微生物的發(fā)展歷程1.史前時(shí)期直觀應(yīng)用時(shí)期 自古以來(lái)，人類(lèi)在日常生活和生產(chǎn)實(shí)踐中，已經(jīng)覺(jué)察到微生物的生命活動(dòng)及其所發(fā)生的作用。中國(guó)利用微生物進(jìn)行釀酒的歷史，可以追溯到4000多年前的龍山文化時(shí)期。殷商時(shí)代的甲骨文中刻有“酒”字。春秋戰(zhàn)國(guó)時(shí)期，就已經(jīng)利用微生物分解有機(jī)物質(zhì)的作用，進(jìn)行漚糞積肥。北魏賈思勰的齊民要術(shù)中，有谷物制曲，釀酒、制醬、造醋和腌菜等方法。2.初創(chuàng)時(shí)期形態(tài)發(fā)展時(shí)期17世紀(jì)，荷蘭人列文虎克用自制的簡(jiǎn)單顯微鏡（圖3）可放大160260倍，觀察牙垢、雨水、井水和植物浸液后，發(fā)現(xiàn)其中有許多運(yùn)動(dòng)好

10、著的“微小動(dòng)物”，并用文字和圖畫(huà)科學(xué)地記載了人類(lèi)最早看見(jiàn)的 “微小動(dòng)物”。細(xì)菌的不同形態(tài)(球狀、桿狀和螺旋狀等)。過(guò)了不久，意大利植物學(xué)家米凱利也用簡(jiǎn)單的顯微鏡觀察了真菌的形態(tài)。圖3 列文虎克及其自制的簡(jiǎn)單顯微鏡3.奠基時(shí)期生理學(xué)發(fā)展時(shí)期微生物學(xué)的研究從19世紀(jì)60年代開(kāi)始進(jìn)入生理學(xué)階段。法國(guó)科學(xué)家巴斯德對(duì)微生物生理學(xué)的研究為現(xiàn)代微生物學(xué)奠定了基礎(chǔ)。千百年來(lái)普遍流傳著一種“自然發(fā)生說(shuō)”。該學(xué)說(shuō)認(rèn)為，不潔的衣物會(huì)滋生蚤虱，污穢的死水會(huì)自生蚊，骯臟的垃圾會(huì)自生蟲(chóng)蟻，糞便和腐臭的尸體會(huì)自生蠅蛆?？傊锟梢詮乃麄兯诘奈镔|(zhì)元素中自然發(fā)生，而沒(méi)有上代。1668年意大利宮廷醫(yī)生佛羅倫薩實(shí)驗(yàn)科學(xué)院成員F

11、.雷迪用實(shí)驗(yàn)證明腐肉生蛆是蠅類(lèi)產(chǎn)卵的結(jié)果，首先對(duì)自然發(fā)生說(shuō)提出異議。但由于他未能正確解釋蟲(chóng)癭與腸道蠕蟲(chóng)的來(lái)源，人們認(rèn)為低等動(dòng)物仍可自然發(fā)生。1745年英國(guó)天主教神甫、顯微鏡學(xué)家J.T.尼達(dá)姆用各種浸泡液經(jīng)消毒后，仍有微生物發(fā)生，而堅(jiān)持自然發(fā)生說(shuō)。1775年意大利生理學(xué)家L.斯帕蘭扎尼通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，證明J.T.尼達(dá)姆實(shí)驗(yàn)結(jié)果是由于加熱不夠和封蓋不嚴(yán)所造成，因而確信微生物是從空氣帶入的。但他的批評(píng)者宣稱(chēng)，由于他使浸出液在密閉管內(nèi)煮沸了45分鐘，殺死了管內(nèi)空氣中的“活力”，因而影響了自然發(fā)生。1837年T.A.H.施萬(wàn)改進(jìn)了斯帕蘭扎尼的實(shí)驗(yàn),通入事前經(jīng)過(guò)加熱或“焙燒”的空氣,并以青蛙仍能在其中生活

12、，證明并未影響“活力”的存在。但T.A.H.施萬(wàn)的實(shí)驗(yàn)由于存在某些技術(shù)問(wèn)題，結(jié)果并不穩(wěn)定。巴斯德根據(jù)自己的研究實(shí)踐，不相信微生物可以自然發(fā)生，認(rèn)為微生物肯定必有母體。他到處宣傳這一理論。這下子可激怒了自生論者。他們問(wèn)巴斯德：“酵母怎在地球的每一個(gè)角落里，在每一世紀(jì)的每一年里，不知道從什么地方出現(xiàn)，把葡萄汁釀成酒？這些從天南地北，處處把每個(gè)罐里的牛奶變酸，每瓶里的牛油變壞的小動(dòng)物來(lái)自什么地方？為了回答這些挑戰(zhàn)，巴斯德重做了斯帕蘭扎尼的實(shí)驗(yàn)。他在圓瓶里灌進(jìn)一些酵母湯，把瓶頸焊封，煮沸幾分鐘后擱置適當(dāng)時(shí)間。結(jié)果表明，瓶里并沒(méi)有微生物生長(zhǎng)。這一試驗(yàn)并不能徹底駁倒自生論者。他們坐在巴斯德的書(shū)房里吵吵鬧鬧

13、：“你在煮沸酵母湯時(shí)，把瓶里的空氣加熱了。酵母湯產(chǎn)生小動(dòng)物所需要的是自然的空氣。你不能把酵母湯和天然的未經(jīng)加熱的空氣放在一起而不產(chǎn)生酵母、霉菌、桿菌或小動(dòng)物！”面對(duì)對(duì)方的指責(zé)，巴斯德冥思苦想，決心設(shè)計(jì)一種只讓天然空氣進(jìn)入而不許其中的微生物進(jìn)入的儀器。在老教授巴拉的指導(dǎo)下，巴斯德終于設(shè)計(jì)、制作出了符合這一要求的儀器，即著名的曲頸瓶。實(shí)驗(yàn)取得了完全的成功。巴斯德著名的曲頸瓶實(shí)驗(yàn)（圖4）：曲燒瓶有一個(gè)彎曲的長(zhǎng)管與外界空氣相通。瓶?jī)?nèi)的溶液加熱至沸點(diǎn)，冷卻后，空氣可以重新進(jìn)入，但因?yàn)橛邢蛳聫澢拈L(zhǎng)管，空氣中的塵埃和微生物不能與溶液接觸，使溶液保持無(wú)菌狀態(tài)，溶液可以較長(zhǎng)時(shí)間不腐敗。如果瓶頸破裂，溶液就會(huì)很

14、快腐敗變質(zhì)，并有大量的微生物出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)得到了令人信服的結(jié)論：腐敗物質(zhì)中的微生物是來(lái)自空氣中的微生物。圖4 巴斯德曲頸瓶實(shí)驗(yàn)4.發(fā)展時(shí)期生物化學(xué)水平1897年德國(guó)人畢希納（E.Büchner）用無(wú)細(xì)胞酵母菌壓榨汁中的“酒化酶”，對(duì)葡萄糖進(jìn)行發(fā)酵獲得成功，從而開(kāi)創(chuàng)了微生物系列生化研究的新時(shí)代。1929年英國(guó)醫(yī)生弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉素能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，1928年7月下旬，弗萊明將眾多培養(yǎng)基未經(jīng)清洗就摞在一起，放在試驗(yàn)臺(tái)陽(yáng)光照不到的位置，就去休假了。9月3號(hào)，度假歸來(lái)的弗萊明，剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，其前任助手普利斯來(lái)串門(mén)，寒暄中問(wèn)弗萊明最近在做什么，于是弗萊明順手拿起頂層第一個(gè)培養(yǎng)基，準(zhǔn)備給他解釋時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)

15、基邊緣有一塊因溶菌而顯示的慘白色，因此發(fā)現(xiàn)青霉素，并于次年6月發(fā)表，最終使其獲諾貝爾獎(jiǎng)的論文。1943年，英、美合作研究開(kāi)發(fā)了青霉素的通氣攪拌部培養(yǎng)法，開(kāi)始了青霉素的大批量生產(chǎn)。5.成熟時(shí)期分子水平1926年漢斯·布什研制了第一個(gè)磁力電子透鏡。1931年厄恩斯特·盧斯卡和馬克斯·克諾爾研制了第一臺(tái)透視電子顯微鏡并于1986年盧斯卡獲得諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)。1938年他在西門(mén)子公司研制了第一臺(tái)商業(yè)電子顯微鏡。1952年，奧地利裔美國(guó)生物化學(xué)家查伽夫測(cè)定了DNA中4種堿基的含量，發(fā)現(xiàn)其中腺膘呤與胸腺嘧啶的數(shù)量相等，鳥(niǎo)膘呤與胞嘧啶的數(shù)量相等。1953年，沃森和克里克發(fā)現(xiàn)了DN

16、A雙螺旋的結(jié)構(gòu)，開(kāi)啟了分子生物學(xué)時(shí)代。1985年，凱利·穆利斯在美國(guó)Cetus公司工作期間，發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。在工作中，穆利斯需要合成DNA引物來(lái)進(jìn)行測(cè)序工作，但常常因?yàn)闆](méi)有足夠多的模板DNA而煩惱。一個(gè)星期五晚上，他開(kāi)車(chē)去鄉(xiāng)下別墅的路上，猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。隨后他用同位素標(biāo)記法看到了10個(gè)循環(huán)后的49bp長(zhǎng)度的第一個(gè)PCR片段，并申請(qǐng)了專(zhuān)利，從此全世界開(kāi)始學(xué)習(xí)PCR的方法，微生物也因此開(kāi)拓了分子診斷領(lǐng)域。（二）臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展歷程1.經(jīng)驗(yàn)免疫學(xué)階段天花是一種烈性傳染病，得病者死亡率非常高。嚴(yán)重?fù)p壞人容貌的麻子，就是感染天花后留下的點(diǎn)點(diǎn)疤痕。天花大約

17、在漢代由戰(zhàn)爭(zhēng)的俘虜傳入我國(guó)。長(zhǎng)期以來(lái)，人類(lèi)對(duì)于天花病一直沒(méi)有有效的防治方法。我國(guó)古代人民在同這種猖獗的傳染病不斷作斗爭(zhēng)的過(guò)程中，于明代發(fā)明了預(yù)防天花的方法人痘接種法。峨眉山神醫(yī)為王素種痘的故事，是目前發(fā)現(xiàn)的中國(guó)典籍上最早的種痘記載。宋真宗趙恒在位時(shí)，宰相王旦一連生了幾個(gè)子女，不幸都死于天花。待到老年他又得了一個(gè)兒子，取名王素。王旦擔(dān)心這個(gè)兒子再遭天花殘害，于是召集許多醫(yī)師商議防治痘瘡的方法。有人說(shuō)，四川峨嵋山有一個(gè)“神醫(yī)”能接種人痘預(yù)防天花，王旦聽(tīng)后心中大喜。就在峨眉山找到神醫(yī)道士給王素種痘，結(jié)果王素果然沒(méi)有感染天花，活到七十六歲。繼人痘苗之后，免疫學(xué)的一個(gè)重要發(fā)展首推牛痘苗的發(fā)明。它不但彌補(bǔ)

18、了人痘苗的不足，并且可在實(shí)驗(yàn)室大量生產(chǎn)。英國(guó)醫(yī)生愛(ài)德華·詹納觀察到擠奶女工在患過(guò)牛痘后不易得天花病的事實(shí)后，通過(guò)對(duì)牛痘苗人體的長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)，確證接種牛痘苗后可以預(yù)防天花，并對(duì)人體無(wú)害。1796年他用牛痘疹的濃漿首次試驗(yàn)給一名8歲兒童接種，預(yù)防天花獲得成功，為人類(lèi)傳染病的預(yù)防開(kāi)創(chuàng)了人工免疫的先聲，宣告了免疫學(xué)的誕生。2.科學(xué)免疫學(xué)階段德國(guó)細(xì)菌學(xué)家、免疫學(xué)家保羅·埃爾利希在1897年他首先提出了抗體生成的側(cè)鏈學(xué)說(shuō)，也是受體學(xué)說(shuō)的首創(chuàng)者。他認(rèn)為抗毒素分子存在于細(xì)胞表面上，當(dāng)外毒素進(jìn)入體內(nèi)后與之特異結(jié)合，并刺激細(xì)胞產(chǎn)生更多的抗毒素分子，自細(xì)胞表面脫落入血流即是抗毒素，認(rèn)為抗體和抗原如同

19、“鑰匙和鎖的匹配”，并發(fā)現(xiàn)了補(bǔ)體的效應(yīng)功能，被稱(chēng)為“體液免疫之父”。俄國(guó)科學(xué)家梅切尼科夫發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞和小噬細(xì)胞可以清除病原菌，提出了“細(xì)胞吞噬學(xué)說(shuō)”，被譽(yù)為“細(xì)胞免疫之父”，兩人于1908年被授予諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。體液免疫和細(xì)胞免疫學(xué)說(shuō)的形成，標(biāo)志著免疫學(xué)科理論構(gòu)架的形成。1984年德國(guó)科學(xué)家喬治斯·克勒和英國(guó)科學(xué)家色薩·米爾斯坦共同研究開(kāi)發(fā)了一套制造單克隆抗體的新技術(shù)，是20世紀(jì)70年代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域中的一次革命，對(duì)生命科學(xué)及醫(yī)學(xué)的幾乎所有領(lǐng)域都產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響。它使免疫學(xué)一些基礎(chǔ)理論的研究有了很大進(jìn)步，并被應(yīng)用于激素、酶和一些具有生物活性物質(zhì)的鑒定、純化以及腫瘤的早期診斷

20、和治療。隨著基因克隆和基因工程等先進(jìn)技術(shù)的發(fā)展，分子免疫學(xué)也獲得了飛速進(jìn)步。分子免疫學(xué)快速地把免疫分子的結(jié)構(gòu)與功能聯(lián)系起來(lái)進(jìn)行全面深入的研究，同時(shí)還可從DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯等多個(gè)層面研究免疫分子結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系。第二節(jié) 臨床微生物與免疫學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)范疇經(jīng)典的病毒學(xué)檢查方法包括病毒分離鑒定和血清學(xué)診斷（抗體的檢測(cè)）。由于分子病毒學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展，近年來(lái)又建立了許多診斷方法，包括電鏡直接觀察形態(tài)、檢查病毒抗原、核酸等，使得病毒感染的快速診斷成為可能。以乙型肝炎病毒為例，臨床主要用免疫學(xué)方法檢測(cè)血清中乙肝病毒表面抗原和抗體、病毒e抗原和抗體以及病毒核心抗體。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展以及PCR的廣

21、泛應(yīng)用，可以用分子診斷方法檢測(cè)乙型肝炎病毒的核酸，達(dá)到快速準(zhǔn)確的診斷。4.寄生蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的病原學(xué)診斷主要依靠對(duì)糞便、血液、活體組織和其他排泄物抽取物的檢測(cè)。以蟯蟲(chóng)為例，蟯蟲(chóng)的傳染主要在幼兒及兒童間傳染較為廣泛，當(dāng)宿主睡眠肛門(mén)括約肌松弛時(shí)，雌蟲(chóng)下移至肛門(mén)外，產(chǎn)卵于肛周周?chē)蜁?huì)陰皮膚皺褶處。由于此特殊的產(chǎn)卵習(xí)性，透明膠紙粘拭法陽(yáng)性率可達(dá)79.4%。透明膠紙粘拭法即在早晨排便前用透明膠紙粘拭肛門(mén)周?chē)つw，在顯微鏡低倍鏡下檢查，連續(xù)三次。（二）抗生素合理利用當(dāng)前，我國(guó)醫(yī)藥衛(wèi)生事業(yè)補(bǔ)償不足，大部分公里醫(yī)藥靠創(chuàng)收彌補(bǔ)不不足，其中藥品收入占了四成以上，形成了以藥養(yǎng)醫(yī)的機(jī)制。多年來(lái)，抗生素一直以其使用廣、利潤(rùn)高

22、、回扣豐，成為醫(yī)藥藥品收入中的“老大”。醫(yī)生的盲目誘導(dǎo)，往往讓患者只看到了抗生素的快速有效，卻忽視了其耐藥后果。在細(xì)菌耐藥日益嚴(yán)重的情況下，萬(wàn)古霉素曾一度作為抗感染治療的有效手段。2002年科學(xué)家在醫(yī)院中發(fā)現(xiàn)了“耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌（VRSA）”。它們擁有一個(gè)耐萬(wàn)古霉素的“基因盒”，可以改變?nèi)f古霉素在病菌細(xì)胞壁上的作用位點(diǎn)，使其無(wú)法與相應(yīng)位點(diǎn)結(jié)合，讓作為醫(yī)生手里“最后一張王牌”的萬(wàn)古霉素徹底失效。2013年3月5日美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心發(fā)布名為致命跡象的報(bào)告稱(chēng)，過(guò)去十年，一類(lèi)非常致命的超級(jí)細(xì)菌在美國(guó)醫(yī)護(hù)機(jī)構(gòu)的傳播數(shù)量不斷增多，其耐藥性也越來(lái)越強(qiáng)，即耐碳青霉烯類(lèi)腸桿菌屬（CRE），因?qū)χ委焽?yán)

23、重細(xì)菌感染的重要級(jí)武器碳青霉烯類(lèi)廣譜抗生素具有極強(qiáng)的耐藥性而得名。此類(lèi)細(xì)菌之所以被稱(chēng)為“超級(jí)細(xì)菌”是因?yàn)樗鼘?duì)很多新的抗生素都有耐藥性，如今最強(qiáng)的抗生素對(duì)它們已不管用，很多患者面臨無(wú)法治愈的感染，死亡率非常高。（三）院內(nèi)感染的監(jiān)測(cè) 院內(nèi)感染是指在醫(yī)院中獲得的感染，感染來(lái)源包括外源性和內(nèi)源性，外源性感染來(lái)自于另一感染者或環(huán)境；內(nèi)源性感染來(lái)自于患者自身，是由于正常菌群的遷徙至機(jī)體其他部位，或受損組織、抗菌藥物的不合理使用導(dǎo)致病原菌過(guò)度生長(zhǎng)。常見(jiàn)的院內(nèi)感染包括泌尿道感染、呼吸道感染、外科傷口感染、血液感染。有效的感染控制依賴(lài)于實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確檢測(cè)病原菌的能力，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室是感染控制計(jì)劃的重要組成部分，在

24、院內(nèi)感染監(jiān)測(cè)、暴發(fā)調(diào)查中起著重要的作用，提供微生物學(xué)證據(jù)以及調(diào)查線索。藥敏試驗(yàn)是臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)分析藥敏試驗(yàn)結(jié)果，能夠初步判斷菌株間差異；隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分析微生物特征性DNA越來(lái)越多的應(yīng)用于病原體分型，常用的技術(shù)包括凝膠電泳技術(shù)，PCR技術(shù)，Southern Blot技術(shù)，染色體原位雜交技術(shù)以及基因診斷技術(shù)等?？傊?，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室是感染控制計(jì)劃的重要組成部分，臨床實(shí)驗(yàn)室新技術(shù)的產(chǎn)生與應(yīng)用將大大增強(qiáng)感染控制效果。（四）新的抗感染藥物的發(fā)現(xiàn)與研究新抗生素的篩選仍然是新抗菌藥物發(fā)現(xiàn)的重要途徑。當(dāng)前各大類(lèi)抗生素均有所發(fā)展，-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素特別是頭孢菌素在抗生素領(lǐng)域仍占主

25、導(dǎo)地位。出現(xiàn)第四代頭孢菌素頭孢匹羅（Cefpirom）、頭孢吡肟（Ce鄄fepime）、頭孢唑蘭（Cefozopran）與頭孢噻利（Cefoselis）；碳青霉烯類(lèi)在保持對(duì)腎脫氫肽酶穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，其抗菌活性、安全性和藥代動(dòng)力學(xué)特征不斷得以改善。大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素已由第一代發(fā)展到第三代。當(dāng)前研究的主要?jiǎng)酉蚴抢^續(xù)采用化學(xué)與生物學(xué)等方法修飾結(jié)構(gòu)，以改善其耐藥性并研發(fā)其在抗菌以外的應(yīng)用。氨基糖苷類(lèi)抗生素通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾已明顯改善了耐藥性，近年又研制出抗耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的新氨基糖苷類(lèi)藥物。阿貝卡星（Arbekacin）和依替米星（Etimicin）對(duì)MRSA均較強(qiáng)作用。MRSA、PRSP、VRE是

26、目前臨床常見(jiàn)的幾種重要的耐藥革蘭氏陽(yáng)性菌。近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的對(duì)多重耐藥金葡球菌、MRSA、VRE等有較強(qiáng)作用的其它新抗生素包括了酮內(nèi)酯類(lèi)、脂肽類(lèi)、脂糖肽類(lèi)、長(zhǎng)鏈烯酸類(lèi)、含噻唑與唑的環(huán)肽等。過(guò)去的抗菌藥都是直接作用于細(xì)菌病原體。近年來(lái)的抗菌藥物開(kāi)發(fā)，除繼續(xù)致力于篩選對(duì)耐藥菌有效的、具有新抗菌譜和新作用機(jī)制或新作用靶位的抗菌藥之外，還注意尋找提高與保護(hù)抗菌藥效能、增強(qiáng)機(jī)體防御機(jī)能和衰減微生物病原性的物質(zhì)。近年來(lái)，其它如滲透性促進(jìn)劑、外排泵抑制劑、生體防御機(jī)能調(diào)節(jié)劑、微生物感染途徑阻斷與病原性衰減劑的研究也頗受重視。二、臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)的范疇1.細(xì)胞免疫的檢測(cè)與應(yīng)用細(xì)胞免疫，即T細(xì)胞受到抗原刺激后，分化增

27、殖，轉(zhuǎn)化為致敏T細(xì)胞。當(dāng)相同抗原再次進(jìn)入機(jī)體，致敏T細(xì)胞對(duì)抗原的直接殺傷作用及致敏T細(xì)胞所釋放的淋巴因子的協(xié)同殺傷作用。在抗感染免疫中，細(xì)胞免疫主要參與對(duì)胞內(nèi)寄生的病原微生物的免疫應(yīng)答及對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答，參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)和自身免疫病的形成，參與抑制排斥反應(yīng)及對(duì)體液免疫的調(diào)節(jié)。人體細(xì)胞免疫功能與T細(xì)胞的數(shù)量及功能密切相關(guān)。T細(xì)胞計(jì)數(shù)可以通過(guò)E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)。成熟的人T細(xì)胞表面表達(dá)CD2分子，及綿羊紅細(xì)胞受體，能和綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)（圖7），然后在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。圖7 E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)此外，外周血成熟的T細(xì)胞表達(dá)有特有的CD3和T細(xì)胞受體（TCR）表面抗原，將T細(xì)胞標(biāo)記特定的抗體，利用流式細(xì)胞流式細(xì)胞技術(shù)即可對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。同時(shí)可根據(jù)輔助性T細(xì)胞、細(xì)胞毒T細(xì)胞表面CD4和CD8抗原表達(dá)的差異，對(duì)T細(xì)胞亞型作