整理獸醫(yī)傳染病試驗

1、精品文檔實驗二 病料的采集、保存及送檢一、目的 掌握被檢病料的采取、保存、送檢的方法。二、材料 實驗動物（雞）、瓷盤、剪子、鑷子、酒精燈、酒精、接種環(huán)、載玻片、 火柴棒等。三、病料的采取1. 采取病料的基本原則（1）采集最適病料 理想的病料，應(yīng)是無菌采取的含病原微生物量高的血液、器官組 織或分泌物和排泄物。因此要根據(jù)疾病的病性采取合適的病料，如無法估計是何種疾病 時，應(yīng)根據(jù)臨床癥狀和病理變化采集病料或全面采取病料。取材時應(yīng)注意病原微生物感 染所致疾病的類型 （ 如呼吸道感染疾病、胃腸道感染疾病、皮膚和粘膜性疾病、敗血性疾 病等 ） 、病原微生物的侵入部位、病原微生物感染的靶器官等。細菌檢驗病料

2、應(yīng)當(dāng)是采自 未經(jīng)抗菌藥物治療的患病動物，并且應(yīng)多做幾張涂片。（2）適時采集 采集病料的時間一般在疾病流行早期、典型病急性期，此時病原微生 物的檢出率高；后期由于體內(nèi)免疫力的產(chǎn)生，病原微生物減少，檢測病原微生物比較困 難，同時可能出現(xiàn)交叉感染，增加判斷的困難性。在采集供抗體測定用的血清時，可適 時地采集急性期和恢復(fù)期的兩份血清樣品，一般兩份血清的間隔時間為142ld。內(nèi)臟病料的采取，須于動物死后立即進行；夏季最遲不超過46h,冬天不超過24h，否則時間過長，由腸內(nèi)侵入其他細菌，致使尸體腐敗，有礙于病原菌的檢出。供做切片的樣品采 取后必須立即投入固定液，否則時間過長，會使細菌和組織細胞死亡、溶解，

3、影響檢驗 結(jié)果。有條件做現(xiàn)場培養(yǎng)時，剖開尸體后應(yīng)進行接種培養(yǎng)，然后采樣，最后剖檢。（3）無菌操作 采集病料所用的器械及容器要進行嚴(yán)格的消毒：刀、剪、鑷子等金屬用具可煮沸消毒30min，使用前最好用酒精擦拭，并在火焰上燒一下；器皿（玻制、陶制 及琺瑯制等） 在高壓滅菌器或干烤箱內(nèi)滅菌； 軟木塞和橡皮塞應(yīng)高壓滅菌； 載玻片用 2% 5%碳酸鈉煮沸消毒510min，煮沸后用清水沖洗干凈，拭干保存或浸泡于95%酉精中以備使用；注射器和針頭放于清潔水中煮沸30min即可，或用一次性注射器。病料采取過程都應(yīng)該無菌操作，盡量避免雜菌污染。采取一種病料，使用一套器械，或器械酒精擦拭火 焰滅菌后再采取另一種病料

4、；一種病料放入一種容器，不可混放。（4）剖前檢查 若有突然死亡或病因不明的尸體， 須先采取末梢血液制成涂片， 鏡檢， 觀察是否有炭疽桿菌存在。若疑似炭疽時，不得進行解剖；如需要剖檢并獲取病料時， 應(yīng)經(jīng)上級有關(guān)部門同意，選擇合適的場地，做好嚴(yán)格的防范工作，剖后要進行嚴(yán)格的消 毒處理。只有在確定不是炭疽后，方可進行剖檢。2. 病料采集的方法（ 1 ）液體材料 一般用滅菌棉拭子采取破潰的膿汁、鼻液、陰道分泌物與排泄物。 未破的膿腫、胸水、腹水在皮膚表面消毒后，用無菌注射器抽取。（ 2）血液 無菌采取血液，供病原培養(yǎng)、抗體檢測和血液檢查之用。體型較大的單 蹄和偶蹄類動物少量血樣可以從耳背靜脈采血；毛皮

5、動物少量采血可通過耳殼外側(cè)靜脈采??；鼠類可以通過尾尖、耳背靜脈、眼窩內(nèi)血管采血；兔可從耳背靜脈、頸靜脈、心 臟等處采血；鳥類可以從肘關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)的翅靜脈、跖部內(nèi)靜脈或心臟采血。（ 3）乳汁 乳房先用消毒藥水洗凈（取乳者的手也應(yīng)事先消毒），并把乳房附近的 毛刷濕，最初所擠的34股乳汁棄去，然后再采集 10ml左右乳汁于滅菌試管中。若僅供 顯微鏡直接染色檢查，則可于其中加入0.5%的福爾馬林液。（ 4）淋巴結(jié)及內(nèi)臟組織 應(yīng)在尸體解剖后立即采取。將淋巴結(jié)、肺、肝、脾及腎等 有病變的部位各采取12cm5的小方塊，分別置于滅菌容器中，并盡可能采取有病變及病 變交界處的部位。（ 5）胃腸及內(nèi)容物 可將胃腸剪下

6、，兩端扎好，送往實驗室。或用燒紅的器具燒烙 表面后穿一小孔，用滅菌棉拭子取其內(nèi)容物，放入無菌的器皿內(nèi)或放入裝有生理鹽水或 PBS勺試管內(nèi)。（ 6）腦、脊髓 按病理解剖方法取出腦、脊髓。取一部分放入10%福爾馬林溶液的瓶中，供組織學(xué)檢查；一部分放入50%甘油生理鹽水瓶中，供微生物學(xué)檢查?；蛘邔㈩^部取下，用塑料口袋包好直接送檢。（ 7）膽汁 先用燒紅刀片或鐵片燒烙膽囊表面，再用滅菌細管或注射器刺入膽囊內(nèi) 吸取膽汁，置于滅菌試管中。（8）皮膚 鹽水溶液中，或（9）骨頭 然后包于浸過 5%石炭酸水或 0.1%升汞液的紗布或麻布中，裝于木箱內(nèi)送到實驗室。去大小約10x10cm2的皮膚一塊，保存于 30%

7、甘油緩沖溶液中，或10%飽和 10%福爾馬林液中。需要完整的骨頭時， 應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去， 表面撒上食鹽，將流產(chǎn)胎兒及小動物尸體包入不透水塑料薄膜、油紙（10） 流產(chǎn)胎兒及小動物尸體 或油布中，裝于木箱內(nèi)送到實驗室。二、病料的保存1. 常用保存劑的配制（1）30%甘油緩沖溶液30ml100ml純中性甘油0.5g1.0g1.5mlNaCl堿性磷酸鈉0.02%酚紅 中性蒸流水加至混合分裝后，0.105Mpa高壓滅菌30min（ 2） 5 0%甘油緩沖鹽水溶液NaCl酸性磷酸鈉堿性磷酸鈉2.5g0.46g10.74g純中性甘油150ml中性蒸流水150ml混合分裝后，0.105Mpa高壓

8、滅菌30min(3) 10%畐爾馬林溶液取福爾馬林10ml加入蒸餾水90ml即成。(4) 飽和鹽水溶液取一定的蒸餾水加入純 NaCI，不斷攪拌至不能溶解為止(一般 為38%- 39滋右)，然后用濾紙過濾。( 5)雞蛋生理鹽水溶液 先將新鮮雞蛋的表面用碘酒消毒，然后打開內(nèi)容物傾入滅 菌的三角瓶中，加入滅菌鹽水(占總量的10%)，搖勻后，用無菌紗布過濾，然后加熱至5658C 30min，第2d及第3d按上法再加熱一次，即可應(yīng)用。2. 常用保存方法( 1)液體病料 檢查抗體用的血液，不加抗凝劑，待凝血后，分離血清放入青霉素小瓶中。供病原分離培養(yǎng)用的液體病料，同容器一起放入有冰的保溫瓶或4C冰箱內(nèi)。(

9、2) 供細菌學(xué)檢驗的實質(zhì)臟器 若12d內(nèi)能送到實驗室，可放在有冰的保溫瓶或 冰箱內(nèi)，也可放入滅菌液體石蠟或 30%甘油緩沖鹽水內(nèi)。如無冰，也可在保溫瓶內(nèi)放氯化 銨500g加水1500ml，使保溫瓶內(nèi)保持 OC左右達24h。( 3)供病毒學(xué)檢驗的實質(zhì)臟器 應(yīng)盡快送檢，如不能即刻送檢而需要保存時，必須 保持在冷的環(huán)境中，48h內(nèi)送到實驗室。一般放在 50%T油緩沖鹽水溶液或雞蛋生理鹽水 溶液中，4C保存最好，原因是凍化過程能使病毒破壞。如需保存較長時間才能進行檢查，最好放在一 20 C以下或干冰中保存。(4)病理組織病料 采取的病料立即放入 10倍體積的 10%福爾馬林溶液或 95%100% 酒精

10、中，如用10%畐爾馬林溶液固定組織時，經(jīng)24h應(yīng)重換新鮮液一次。神經(jīng)系統(tǒng)組織(腦、 脊髓等)，需固定于 10%中性福爾馬林溶液內(nèi)(福爾馬林溶液的總?cè)莘e中加入5%10%碳酸鎂) 。在寒冷季節(jié)， 為了避免病料凍結(jié)， 在運送前， 可將預(yù)先固定的病料置于含有 30% 50%甘油的 10%福爾馬林溶液中。三、病料的送檢 供細菌檢驗用的病料，要防止腐敗，必須及時送檢。一般可用有 冰塊的保溫瓶或其他低溫條件，以使病料不腐敗。最好由專人送檢，并帶好送檢的有關(guān) 病情、病例、剖檢等記錄，以供檢驗人員的參考。為避免散播病原，盛有病料的容器，瓶口要蓋緊，用膠布封好或石蠟封固，并用消 毒液充分擦拭容器的表面。瓶上加貼標(biāo)

11、簽，注明樣品來源、種類、保存方法、采集時間 等。為避免病料外漏，應(yīng)立放于金屬筒內(nèi)，填塞防震填充料 ( 木屑、紙渣、稻草、塑料泡 沫的渣屑等 ) 。精品文檔精品文檔實驗三 免疫接種一、目的 掌握免疫接種的方法和步驟，熟悉生物制劑的保存、運送和用前檢查方 法。二、內(nèi)容及方法（一）免疫接種的方法 按疫苗使用說明的方法接種，常用以下幾種方法。1. 注射免疫 操作簡單，劑量準(zhǔn)確。（1）皮下注射法部位：馬、牛等大家畜在頸側(cè)，豬在耳根后方，家禽在胸部、大腿內(nèi)側(cè)。先剪毛， 用酒精或碘酒消毒，然后注入藥液。優(yōu)點：操作簡單，吸收較皮內(nèi)快。 缺點：使用劑量多，反應(yīng)較皮內(nèi)大。用途：疫苗和免疫血清。（2）肌肉注射法 部

12、位：馬、牛、豬、羊在臀部和頸部，家禽在胸部。先剪毛，用灑精或碘酒消毒， 然后把針頭刺入肌肉，注入藥液。優(yōu)點：操作簡單，吸收快。 缺點：一個部位不能大量注射，臀部接種不當(dāng)時易引起跛行。 用途：疫苗和血清。（3）皮內(nèi)注射法 部位：馬在頸側(cè)、眼瞼，牛羊在頸側(cè)、尾根、肩胛中央，豬在耳根，雞在肉髯。 優(yōu)點：用量較少，反應(yīng)?。ǜ弊饔眯。?，免疫力高（同量與皮下相比） 。 缺點：比較麻煩。用途：痘苗和診斷液。（4）靜脈注射 部位：馬牛羊在頸靜脈，豬在耳靜脈，雞在翼下靜脈。 優(yōu)點：使用劑量大，見效快，可及時搶救病畜。 缺點：比較麻煩，易引起過敏反應(yīng)（接種異種動物血清時，即血清?。?。 用途：免疫血清。2. 皮

13、膚刺種法 雞新城疫、 雞痘疫苗常用此法接種， 選定翅內(nèi)側(cè)無血管處， 用刺種針 或鋼筆尖蘸取疫苗刺入。3. 滴鼻或點眼法 用滴管吸取疫苗滴在鼻孔內(nèi)或眼結(jié)膜。4. 口服法 用法：將疫苗混入飲水或拌入飼料通過飲水或采食經(jīng)口免疫。必須注意，飲水免疫前要停水46h,稀釋疫苗的水要純凈， 尤其不能用含有消毒劑的水稀釋疫苗；用于拌疫苗的飼料要新鮮，不宜用酸敗或發(fā)酵飼料，大小動物要分開喂，使其能均勻吃到含疫苗 的飼料；口服免疫前后 24h 不得飲用任何消毒藥物，用活菌制劑時不能應(yīng)用抗菌藥物。 優(yōu)點：省時、省力。精品文檔缺點：每頭（只）劑量不準(zhǔn)。5. 噴霧法（1 ）使用儀器 氣霧發(fā)生器。壓力為 2kg/cm2

14、（使70%的微粒在110um）。（ 2）分類室內(nèi)氣霧免疫 動物進入室內(nèi)，關(guān)閉門窗，噴頭由門窗縫伸入，與動物頭部同高， 持續(xù) 20 30min。室外氣霧免疫 四周有矮墻的圈內(nèi)，噴頭與動物頭同高，人員要走動，站上風(fēng)，數(shù) 分鐘。（ 3）注意 操作者要防護自己，帶大而厚的口罩穿工作服，膠靴，如出現(xiàn)癥狀，及 時就醫(yī)。（4）影響因素 霧化粒子大小110um，如過大被鼻粘膜阻止，過小吸入后被絨毛 運動排除；風(fēng)力、風(fēng)速；溫度、濕度。（ 5）優(yōu)點 省時、省力。適于大群動物免。（ 6）缺點 需要的疫苗數(shù)量多。（二）疫苗的保存、運送和用前檢查1疫苗的保存 按說明保存。一般弱毒疫苗保存在 一15C以下，滅活疫苗在41

15、0C。2. 疫苗的運送 要求包裝完善， 防止碰壞瓶子和散播活的弱毒病原體， 因此， 運送疫 苗，逐瓶包裝，然后裝箱。弱毒疫苗（活疫苗）一般要求“冷鏈”運送，即需要冷藏工 具如冷藏車、冷藏箱、保溫瓶等，以免其性能降低或喪失。嚴(yán)防在高溫和日光下運輸。 滅活苗運送中也要防止凍結(jié)和曝曬。3. 疫苗的用前檢查玻璃瓶或安瓿應(yīng)無破損， 瓶塞應(yīng)密封； 瓶簽上記載的名稱、 批號、有效期、容量、檢查號碼及使用方法等必須清楚；藥品色澤及其物理性狀必須和藥品說 明書上記載相符合，否則不得使用。（三）免疫接種的組織工作 接種時的組織工作是特別重要的，因為它可以決定全部措施的結(jié)果和成效。接種時 組織工作如下：1 .進行免

16、疫接種時， 應(yīng)事先取得當(dāng)?shù)貓觥?隊等領(lǐng)導(dǎo)的支持， 并商請給以人力物力等保 證。并向有關(guān)人員宣傳免疫接種的基本知識和注意事項等。2. 組織好接種人員，準(zhǔn)備好場地和保定工具。3. 編訂全部注射家畜的登記表冊，進行編號，避免錯亂而造成重復(fù)注射。（四）預(yù)防接種的注意事項1. 根據(jù)當(dāng)?shù)貍魅静〉陌l(fā)生和流行情況，選擇適合本地的有效疫苗。2. 接種前應(yīng)對接種畜群進行詳細檢查和了解，凡體質(zhì)過于瘦弱、年幼、孕母畜（尤其 是臨產(chǎn)母畜） 、泌乳期母畜或產(chǎn)卵期家禽及有慢性病的，一般情況下均不應(yīng)注射。3. 準(zhǔn)備好各種物品，如疫苗、注射器、針頭、酒精、碘酊、脫脂棉、煮沸消毒器、登 記表格等。注射針頭盡可能做到每注射一頭動物

17、換一個針頭，用完要經(jīng)消毒后再用。吸 取藥品時，先除去封口上的火膠或石蠟，用酒精棉擦凈瓶塞，然后把消過毒的針頭插入， 精品文檔精品文檔用注射器吸取藥液。一次不能吸完時，不要把針頭拔出，用酒精棉球包裹，以便繼續(xù)吸 取。不用已注射過的針頭吸取，以免污染。注射工具（注射器、針頭、鑷子等 ）用前要煮沸消毒。用畢后浸泡于消毒溶液內(nèi)，時間至少lh ，洗凈揩干用白布分別包好保存。4. 所用疫苗應(yīng)按規(guī)定的稀釋倍數(shù)用生理鹽水、蒸餾水或瓶簽上規(guī)定的稀釋液進行稀 釋。稀釋了的疫苗必須當(dāng)天用完，否則廢棄。5. 接種弱毒活菌苗前后 5 天，停止使用對菌苗菌株敏感的藥物。以免影響免疫效果。6. 要做好預(yù)防接種的詳細記錄，包

18、括接種日期、動物品種、年齡、數(shù)量、所用疫苗的 名稱、廠名、批號、生產(chǎn)日期及有效期、稀釋劑及稀釋倍數(shù)、接種方法、操作人員等。7. 接種后，要注意觀察畜群接種反應(yīng)（包括正常的及異常的反應(yīng)），如有不良反應(yīng)或發(fā)病等情況，應(yīng)根據(jù)具體情況采取適當(dāng)措施（如治療） ，疫苗接種經(jīng)過一定時間后，應(yīng)檢 查免疫效果，以便及時發(fā)現(xiàn)問題。8. 工作人員注意自己的防護， 需穿工作服及膠鞋， 必要時戴口罩。 工作前后均應(yīng)洗手 消毒，工作中不應(yīng)吸煙和吃食物。9. 針筒排氣溢出的藥液， 應(yīng)吸積于酒精棉花上， 并將其收集于專用瓶內(nèi)， 用過的酒精 棉或碘酒棉和未使用完的藥液等，應(yīng)集中后燒毀之。精品文檔實驗四 藥敏試驗一、目的 要求掌

19、握藥物敏感性試驗的操作技術(shù)，達到選擇最適合的抗菌藥物，用 于疾病的治療；了解某地致病菌的耐藥性的變遷情況；識別真假抗菌藥。二、原理 測定抗菌藥物在體外對病原微生物的生長有無抑制作用的方法，稱為藥 敏試驗，有的以抑制細菌生長為評定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)，有的則以殺滅細菌為標(biāo)準(zhǔn)。1. 稀釋法 以一定濃度的抗菌藥物與含有被試菌株的培養(yǎng)基進行一系列的不同倍數(shù) 稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后觀察最低抑菌濃度 （minimal inhibitory concentration 或 MIC） 。常用 試管法。2. 擴散法 將浸有抗菌藥物的紙片貼在涂有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi) 向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此敏感細菌在紙片周

20、圍一定距離內(nèi)的生長受到抑制， 形成一個抑菌圈。常用紙片法、挖洞法。三、材料與試劑1. 含細菌的病料2. 藥敏紙片 購買標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片；或自制藥敏紙片：取直徑 6mm 的無菌濾紙片，浸 于一定濃度的抗菌藥液（藥液配制見表 ，根據(jù)需要稀釋藥液）中。一般每毫升藥液中 浸濾紙片100片，浸泡12h后干燥備用，藥劑維持 12個月有效。3. 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂（或 SS瓊脂）。4. 其他 滅菌棉拭子、試管、平皿、酒精燈、鉑金耳、鑷子等。四、擴散法操作步驟（1 ）細菌分離、鑒定將病料直接接種到麥康凱瓊脂或營養(yǎng)瓊脂，培養(yǎng)24h，鑒別。（2） 增菌培養(yǎng)吊取12個菌落，接種于2ml液體培養(yǎng)基，3

21、7C培養(yǎng)16h或6h。（3） 稀釋培養(yǎng)物培養(yǎng)16h的用生理鹽水1000倍稀釋，6h的10倍稀釋或不稀釋。（ 4）涂菌 用滅菌的棉拭子蘸取細菌培養(yǎng)液或稀釋的菌液，擠壓，致密而均勻地涂 布到培養(yǎng)基表面。 （或用經(jīng)火焰滅菌的接種環(huán)， 挑取細菌的純培養(yǎng)物 （量要適當(dāng)多一點） ， 以劃線接種方式涂布到培養(yǎng)基表面。也可挑取待試驗細菌在少量生理鹽水中制成細菌混 懸液，再用滅菌的棉拭子蘸取菌液）。（ 5）貼藥敏紙片用滅菌尖頭鑷子，鑷取已制備好的各種干燥抗菌藥紙片，分別貼到培養(yǎng)基表面（為了貼緊可用鑷子按一下紙片）。紙片在培養(yǎng)基上的分布，一般在中央 貼一種紙片，這樣一只平板（90m禺可貼67個抗菌藥紙片。如果藥敏

22、紙片沒有標(biāo)記， 在每貼一種紙片后，應(yīng)在平板底的對應(yīng)部位上，用蠟筆藥品名或貼上標(biāo)簽。（6）作用 將貼紙片的平板底部向上，置37 C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,取出觀察結(jié)果。五、結(jié)果與判定標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)培養(yǎng)后，有抑菌能力的抗菌藥物，在紙片周圍出現(xiàn)一個無 菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。抑菌圈越大，說明該菌對藥敏感性越大，若無抑菌圈，則 說明該菌對此藥具有耐藥性。判定結(jié)果時，應(yīng)按抑菌圈直徑大?。╩r）來判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)。一般抑菌圈直徑20mm以上為極敏，1520mm為高敏，1015mm為中敏，10mm以下為低敏，無抑菌圈 為耐藥。精品文檔實驗五 布氏桿菌病檢疫一、目的 掌握平板和試管凝集實驗的操作方法和結(jié)果的判定。二

23、、試劑和材料 抗原：由獸醫(yī)生物藥品廠供給。使用時用稀釋液按說明書稀釋，長霉或出現(xiàn)凝集塊 的抗原不能使用。待檢血清：必須新鮮，無嚴(yán)重溶血和明顯蛋白凝塊， 無腐敗氣味。血清采集后應(yīng)在1 2d內(nèi)送到實驗室，不能按期送達者，需加入石炭酸防腐，每0.9m1血清加5%石炭酸0.1ml ,立即震蕩混合。陽性血清和陰性血清：由獸醫(yī)生物藥品廠供給。稀釋液： 0.5%石炭酸生理鹽水，用化學(xué)純石炭酸與氯化鈉配制，經(jīng)高壓滅菌后備用。 檢疫羊時用0.5%石炭酸10%NaC溶液。其他 試管、吸管、玻璃板、火柴棒。三、操作方法1 .試管凝集反應(yīng)(1 )加稀釋液于試管架上置7支小試管，第1管加2.3ml、第25管加0.5ml

24、 0.5%石炭酸生理鹽水。(注：第一管理加 0.5ml 稀釋液，待檢血清直接是 1： 6.25 的濃度。)(2)稀釋待檢血清及加陽、陰性血清吸取待檢血清 0.2ml 加入第 1管中，吸吹混合3次后棄去1.5ml，再吸0.5ml移于第2管中，如前法吸吹混合 3次吸出0.5m1加入第3管，此 法稀釋至第 4管，混勻后棄去 0.5ml 。第五管不加血清為抗原對照。第六管加 1:12.5 的陽 性血清 0.5ml 。第七管加 1:12.5 的陰性血清 0.5ml 。( 3)加稀釋抗原每管加入 0.5%石炭酸生理鹽水稀釋抗原 0.5m1 ，充分振搖混合。第1 4管待檢血清的稀釋倍數(shù)依次為1:25、 1:

25、50、 1:100、 1:200。(4) 作用 置37 C溫箱中感作4h，再移出放室溫下1824h,然后觀察并記錄結(jié)果。( 5)判定標(biāo)準(zhǔn)及結(jié)果判定根據(jù)各管中液體的清朗程度和管底沉淀物的形狀可予判定。+：液體完全透明，菌體完全凝集呈傘狀沉于管底，為100%凝集。+：液體基本透明，略有混濁，菌體大部分被凝集沉于管底，為75%凝集。+：液體半透明，管體有明顯的凝集沉淀，為50%凝集。+： 液體透明度不明顯或不透明，管底有不甚顯著的沉淀或僅有沉淀的痕跡，為25%凝集。- ：液體不透明，管底無沉淀，不凝集。 根據(jù)試驗結(jié)果，可以確定血清的凝集價，以出現(xiàn)“+”以上凝集的最高血清稀釋度為血清的凝集價。鹿、駱駝

26、、牛等大動物凝集價 1:100 以上，狐、犬、羊等中小動物凝集 價1:50以上為陽性。大動物 l:50 、中小動物 1:25為可疑?？梢烧甙朐潞蟛裳貦z，2次可疑者判為陽性。精品文檔精品文檔( 6 )注意事項待檢血清稀釋時：牛、馬、駱駝等大動物為1:50 ，1:100 ，1:200,l:400 四個稀釋度；豬、羊、犬等中小動物為 1:25 ，1:50 ，1:100 ，1:200 四個稀釋度。大規(guī)模檢疫時也可用 兩個稀釋度，即牛、馬、駱駝等大動物為 1:50和1:100 ；豬、羊、犬等中小動物為 1:25 和 1:50 。2. 平板凝集反應(yīng)(虎紅平板凝集試驗)(1) 取潔凈玻板一塊。(2) 吸取

27、虎紅抗原0.03m1和待檢血清，用牙簽混勻。(3) 4-5min 觀察結(jié)果。(4) 結(jié)果判定+:出現(xiàn)大的凝集塊，液體完全透明，即100%凝集。+: 有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明，即75%凝集。+：可見有凝集片，液體不甚透明，即 50%凝集。 +：液體混濁，有少量凝集顆粒，即25%凝集。- ：液體均勻混濁。精品文檔實驗六 雞新城疫（ ND ）抗體檢測（微量血凝試驗（ HA ）和血凝抑制試驗（ HI）一、目的 掌握病毒的紅細胞凝集試驗和凝集抑制試驗的操作方法。二、材料 96 孔型微量反應(yīng)板、微量移（加）液器（或滴管） 、稀釋棒、微型混合振 蕩器、雞新城疫抗原、待檢血清（或卵黃液） 、生理鹽水、

28、 0.5%雞紅細胞懸液。三、方法（一）微量血凝試驗1. 加生理鹽水 用微量移液器， 吸取生理鹽水 0.025m1 加入各孔。 或用滴管每孔加 1 滴（ 0.025ml ）生理鹽水。2. 稀釋抗原 吸取 0.025ml 抗原，滴于第 1孔中，用移液器擠 3次混和后，吸至第 2孔， 依次倍比稀釋到第 10孔，棄去0.025m1，第11、12兩孔作對照?；蛴孟♂尠粽喝】乖?.025ml）,放入第1孔中稀釋，然后把稀釋棒放入第2孔，依次倍比稀釋到第10孔。3. 加紅細胞懸液 吸取0.5%紅細胞懸液，每孔滴加0.025ml?；蛴玫喂苊靠准?1滴（0.025ml）?；旌匣蛘袷巐min。4作用 放入37C

29、恒溫箱中1530min，取出觀察結(jié)果。5. 結(jié)果判定 以 100%紅細胞凝集的抗原最大稀釋度為抗原的血凝滴度。（二）微量法 每排孔檢查 1 份血清樣品。1. 加生理鹽水 用移液器在各孔中滴加 0.025m1 生理鹽水?；蛴玫喂苊靠准?1 滴（0.025ml）生理鹽水。2. 稀釋待檢血清 吸取 0.025m1 待檢血清,滴加于第 1 孔中,然后倍比稀釋至第 10孔，棄去0.025m1，第11孔為病毒凝集對照，第12孔為生理鹽水對照?；蛴孟♂尠粽喝⊙澹?.025ml）,放入第1孔中稀釋，然后把稀釋棒放入第2孔，依次倍比稀釋到第10孔。血清的稀釋倍數(shù)依次為1:2、1:4、1:8 1:1024。3.

30、 加4個單位抗原 吸取4個單位抗原，滴加于111孔，每孔中0.025m1?；蛴玫?管每孔加1滴（0.025ml）,第12孔加0.025ml生理鹽水，混合或振蕩 lmin。4. 加紅細胞懸液 在每孔中各滴加 0.5%的紅細胞懸液0.025m1，混合或振蕩lmin。5. 作用 置于37C恒溫箱中1530min。取出，觀察結(jié)果。6. 判定結(jié)果 以完全抑制紅細胞凝集的血清最大稀釋倍數(shù)為該血清的 HI 效價,以 lg2 表示,或用 2 的指數(shù)表示。每次試驗均設(shè)陽性、陰性血清對照孔。四、判定標(biāo)準(zhǔn)+：紅細胞完全凝集,呈云霧狀均勻分布于孔底。+：孔底紅細胞呈薄層,但面積較上者小,孔中央略有下沉。+：孔底的紅細胞呈薄層,但面積較小,中心較致密,邊緣較松散。+：紅細胞大部分沉于孔底中央,周圍有散在的凝集紅細胞顆粒。- ：