病毒感染的檢查方法和防治原則

1、病毒感染的病毒感染的檢查方法和防治原則檢查方法和防治原則 第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢測(cè)方法病毒感染的檢測(cè)方法一、病毒分離培養(yǎng)與鑒定：一、病毒分離培養(yǎng)與鑒定：1.標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與運(yùn)送 (1)急性期標(biāo)本；急性期標(biāo)本； (2)根據(jù)感染性質(zhì)取不同的標(biāo)本；根據(jù)感染性質(zhì)取不同的標(biāo)本； (3)標(biāo)本置于轉(zhuǎn)運(yùn)液中；標(biāo)本置于轉(zhuǎn)運(yùn)液中； (4)冷藏快運(yùn)。冷藏快運(yùn)。2. 病毒的分離培養(yǎng)病毒的分離培養(yǎng)動(dòng)物接種動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞株二倍體細(xì)胞株傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系絨毛尿囊膜痘病毒特異性損傷(1) 原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物或人組織直接用蛋白酶消化所得動(dòng)

2、物或人組織直接用蛋白酶消化所得的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長(zhǎng)；的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長(zhǎng)； (2)二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞株株 在體外連續(xù)培養(yǎng)在體外連續(xù)培養(yǎng)5060代仍保持其二倍染色代仍保持其二倍染色體數(shù)目的單型細(xì)胞。體數(shù)目的單型細(xì)胞。為生產(chǎn)人用疫苗的首選細(xì)胞株。為生產(chǎn)人用疫苗的首選細(xì)胞株。(3) 傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞系系 能在體外連續(xù)傳代、來自癌細(xì)胞或發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)能在體外連續(xù)傳代、來自癌細(xì)胞或發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化、突變的原代細(xì)胞或二倍體細(xì)胞株?；⑼蛔兊脑?xì)胞或二倍體細(xì)胞株。3.病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢測(cè)與鑒定病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢測(cè)與鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)：細(xì)胞病變效應(yīng)：cytopathic eff

3、ect，CPE 病毒感染宿主細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)的變化，如細(xì)病毒感染宿主細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)的變化，如細(xì)胞團(tuán)縮、腫大、融合等。胞團(tuán)縮、腫大、融合等。Negri Body*包涵體形成的觀察(2)紅細(xì)胞吸附：紅細(xì)胞吸附： 某些病毒感染的宿主細(xì)胞能吸附脊椎某些病毒感染的宿主細(xì)胞能吸附脊椎動(dòng)物的紅細(xì)胞而發(fā)生血吸現(xiàn)象。動(dòng)物的紅細(xì)胞而發(fā)生血吸現(xiàn)象。(3)干擾現(xiàn)象：干擾現(xiàn)象：(4)病毒蛋白、核酸的檢測(cè)：病毒蛋白、核酸的檢測(cè)：Fig HSV 熒光抗體法查抗原熒光抗體法查抗原4.病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定蝕斑測(cè)定蝕斑測(cè)定 plaque forming unit/PFU50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量

4、50% tissue culture infective doseTCID50TCID(50% tissue culture infective dose):在半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)板孔或試管內(nèi)引起細(xì)胞在半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)板孔或試管內(nèi)引起細(xì)胞病變（病變（CPE）的病毒量的病毒量空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)：在細(xì)胞培養(yǎng)表面覆蓋一層半固體：在細(xì)胞培養(yǎng)表面覆蓋一層半固體物質(zhì)使細(xì)胞病變形成空斑物質(zhì)使細(xì)胞病變形成空斑二、檢測(cè)病毒的基本組成二、檢測(cè)病毒的基本組成蛋白抗原蛋白抗原病毒核酸病毒核酸PCR cycler三、檢測(cè)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答：三、檢測(cè)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答：1、單份血清檢測(cè)：、單份血清檢測(cè)：IgMIgG2、雙份血清檢測(cè)：、

5、雙份血清檢測(cè)：IgG恢復(fù)期恢復(fù)期/早期早期 4:1Fig Identification of specific IgM antibody by capture and ELISA.第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原則病毒感染的防治原則一、抗病毒治療一、抗病毒治療1. 抗病毒藥物或制劑抗病毒藥物或制劑 核苷類藥物核苷類藥物 阻抑子代病毒結(jié)構(gòu)基因的合成與表達(dá)。阻抑子代病毒結(jié)構(gòu)基因的合成與表達(dá)。 病毒蛋白酶的抑制劑病毒蛋白酶的抑制劑 阻止大分子病毒蛋白的降解阻止大分子病毒蛋白的降解。 其他：其他：IFN、TNF、IL-2、中草藥等抑制病毒復(fù)制。中草藥等抑制病毒復(fù)制。 抗病毒基因治療：抗病毒基因治療：as

6、ODN、asON、ribozyme 策略：作用于病毒復(fù)制周期的不同環(huán)節(jié)策略：作用于病毒復(fù)制周期的不同環(huán)節(jié)2.免疫制劑免疫制劑吸附吸附擬受體制劑擬受體制劑擬配體制劑擬配體制劑中和抗體中和抗體穿入穿入金剛烷胺金剛烷胺脫殼脫殼生物合成生物合成裝配、釋放裝配、釋放核苷類似物核苷類似物干擾素干擾素反義技術(shù)等反義技術(shù)等Fig A) HIV attach to a CD4 receptor. B) A soluble synthetic version of the receptor can prevent attachment of the virus.mRNAProtein二、二、 病毒感染的預(yù)防病毒感染的預(yù)防傳統(tǒng)疫苗傳統(tǒng)疫苗 1.滅活疫苗滅活疫苗 2.減毒活疫減毒活疫苗苗Fig Edward Jenner vaccinating (inoculating) James Phipps with cowpox