金銀花多糖提取工藝和含量測定探究

1、金銀花多糖提取工藝和含量測定探究【摘要】目的：優(yōu)化金銀花多糖的提取工藝并對多 糖的含量測定進行研究。方法：采用苯酚-硫酸法測定多糖 含量，水提醇沉法制備粗多糖，sevag去蛋白法對多糖進行 精制，以金銀花總多糖提取率為指標，優(yōu)選最佳提取工藝， 并采用正交試驗法對優(yōu)選的最佳工藝參數(shù)進行優(yōu)化。結(jié)果： 影響金銀花多糖提取率的各因素關(guān)系為：提取溫度溶劑倍 量提取時間提取次數(shù)；最佳提取工藝為：提取溫度90°c, 提取時間為1.5h,提取次數(shù)為2次，溶劑倍量為15倍量， 多糖提取率為9.61%o結(jié)論：優(yōu)選的工藝操作簡便，多糖提 取率高?！娟P(guān)鍵詞】金銀花多糖；提取工藝；含量測定【中圖分類號ir28

2、2.4【文獻標識碼】a【文章編號】 1004-7484 (2012) 12-0011-02金銀花為忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb. 的干燥花蕾或帶初開的花1-2 o已有報道稱多糖是金銀花 中有效成分之一，并有抗癌、抗腫瘤、提高人體免疫力等多 種作用3,目前國內(nèi)對金銀花多糖方面的研究仍較少。金 銀花的多糖提取工藝及含量測定研究有利于新的藥效部位 的開發(fā)，為金銀花多糖的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。1材料與儀器ab135-s型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；uv-1100型雙光束紫外-可見分光光度儀（上海天美科學儀器 有限公司）；r1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申順生物科技有

3、限公 司）；tdl-5-a型臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；金銀 花藥材購自濟南建聯(lián)中藥有限公司，經(jīng)鑒定為忍冬科植物忍 冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾；d-無水葡萄糖（中 國藥品生物制品檢定所，批號110833-200503）；苯酚、硫酸 等試劑均為分析純，水為去離子水。2方法與結(jié)果2. 1金銀花多糖含量測定2. 1. 1含量測定方法d-無水葡糖糖作為標準品配制標準品溶液，采用苯酚- 硫酸法4測定金銀花提取物中總多糖的含量。金銀花總多糖提取率二提取物中總多糖含量/樣品中總 多糖含量x100%2. 1.2標準曲線的繪制精密稱定105£干燥至恒重的無水葡萄

4、糖10.25 mg置 looml容量瓶中，加純凈水稀釋至刻度，備用。分別精密量 取葡萄糖標準溶液 0.0, 0. 1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. oml 置loml具塞試管中，加入1. 6 ml5%苯酚溶液，再加入7ml 濃硫酸于溶液表面，搖勻，沸水浴加熱15 min,冷卻20min 后再加蒸憎水定容至相同體積，放置30 min,于最大吸收波 長下測定吸光度a,以吸光度a為縱坐標，葡萄糖標準液濃 度c為橫坐標繪制標準曲線，得到回歸方程 a=48. 1375c+0. 1172, r=0. 9995。2. 1.3多糖的含量測定精密稱取制得的多糖適量，置于looml容量瓶中，精密

5、 量取5ml于50ml容量瓶中，加蒸館水稀釋至刻度，搖勻。 精密量取供試液0. 6ml于loml具塞試管中，按2. 1.2方法 測定吸光度，并計算多糖含量。2.2金銀花多糖的制備采用本試驗優(yōu)選的最佳提取工藝提取金銀花多糖。即向 金銀花藥材中加入15倍量的水9（tc提取2次，每次1.5ho 提取液過濾，濾液濃縮至體積適量后，加入95%乙醇使含醇 量達75%,靜置過夜，沉淀用無水乙醇沖洗、干燥即得多糖 粗品。對制得的粗多糖采用sevag法去蛋白：將粗多糖溶于 10倍量蒸館水中，加入sevag試劑（氯仿-正丁醇，25： 5） 萃取，重復操作至兩相界面無變性蛋白產(chǎn)生為止。將萃取后 的多糖溶液濃縮至適當體積，醇沉、洗滌、干燥得精制多糖。2.3金銀花多糖提取工藝參數(shù)正交優(yōu)選在單因素考察的基礎(chǔ)上，以多糖提取率為指標，對提取 溫度（a）、提取次數(shù)（b）、溶劑倍量（c）及提取時間（d） 4因素進行考察，選用l9 （34）正交表進行試驗，正交試驗 設(shè)計見表1,正交試驗結(jié)果見表2