2022年菌落總數(shù)檢測操作規(guī)程摘要

1、1 山西梁汾醋業(yè)有限公司文件類別及編號：lf-gc-01 版次共頁第頁菌落總數(shù)測定標準操作規(guī)程制訂年份：年制訂人：審核人：批準人：制訂日期：審核日期：批準日期：頒發(fā)部門：分發(fā)部門：生效日期：菌落總數(shù)測定的標準操作規(guī)程1. 目的規(guī)范山西老陳醋菌落總數(shù)測定的操作規(guī)程，保證山西老陳醋產品的質量。2. 適用范圍釀造食醋和配制食醋菌落總數(shù)的測定。3. 儀器設備恒溫培養(yǎng)箱，冰箱，恒溫水浴箱，天平（0.1g）,均質器，振蕩器；無菌吸管1ml(0.01 刻度)、 10ml(0.1ml 刻度)或微量移液器及吸頭；無菌錐型瓶，250ml/500ml; 無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm；ph 計或精密 ph 試紙；放大鏡或

2、菌落計數(shù)器4.培養(yǎng)基和試劑4.1 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，成分：胰蛋白胨5.0g 酵母浸膏2.5g 葡萄糖1.0g 瓊脂15.0g 蒸餾水1000ml ph7.00.2 制法：將上述加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節(jié)ph 。分裝試管或錐型瓶， 121高壓滅菌 15min。4.2 磷酸鹽緩沖液精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 1 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 1 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -2 成分：磷酸二氫鉀（ k

3、h2po4） 34.0g 蒸餾水500ml ph 7.2 制法：貯存液：稱取 34.0g 磷酸二氫鉀溶于500ml 蒸餾水中，用大約175ml 的 1mol/l氫氧化鈉溶液調節(jié)ph,蒸餾水稀釋至 1000ml 存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25ml,用蒸餾水稀釋至1000ml,分裝于適宜容器中， 121 攝氏度高壓滅菌 15 分鐘。4.3 無菌生理鹽水成分：氯化鈉8.5g 蒸餾水1000ml 制法： 8.5 克氯化鈉溶于 100ml 蒸餾水中 121 攝氏度高壓滅菌 15 分鐘。5 檢驗程序精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 2 頁，共

4、7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 2 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -3 6 操作步驟6.1 樣品的稀釋6.1.1 固體和半固體樣品： 稱取 25 g樣品置盛有 225ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min10000 r/min 均質 1min2min，或放入盛有 225 ml 稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml 樣品置盛有225 ml 磷酸鹽緩沖液

5、或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）報告計數(shù)各平板菌落數(shù)計算菌落總數(shù)培養(yǎng)每皿中加入 15ml-20ml 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻檢樣25 g(ml)樣品+225 ml 稀釋液，均質10倍系列稀釋選擇 2-3 個適宜稀釋度的樣品均液，各取 1ml 分別加入無菌培養(yǎng)皿內精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 3 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 3 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -4 中，充分混勻，制成1

6、:10 的樣品勻液。6.1.3 用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液 1ml，沿管壁緩慢注于盛有 9 ml 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。6.1.4 按 1.4.1.3操作程序， 制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。 每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 ml 無菌吸管或吸頭。6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計， 選擇 2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液） ，在進行 10 倍遞增稀釋時，吸取1 ml樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取

7、1ml 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。6.1.6 及時將 15 ml20ml 冷卻至 46的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 （可放置于 46 1恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。6.2 培養(yǎng)6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉， 361培養(yǎng) 48 h2 h。水產品301培養(yǎng) 72 h3 h。6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約 4 ml） ，凝固后翻轉平板，按 1.4.2.1條件進行培養(yǎng)。6.3 菌落計數(shù)可用肉眼觀察， 必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應精品學習資料 可選擇p d f - - -

8、 - - - - - - - - - - - 第 4 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 4 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -5 的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，cfu）表示。6.3.1 選取菌落數(shù)在 30cfu300cfu 之間、 無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30cfu 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300cfu 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。6.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時

9、，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻， 即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。6.3.3 當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。7 結果與報告7.1 菌落總數(shù)的計算方法7.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結果。7.1.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內時，按公式（1）計算：n =c/(n1 +0.1n2 )d （1）式中：n樣品中菌落數(shù)；c平板（含適

10、宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 5 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 5 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -6 n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度） 。示例：n =c/(n1 +0.1n2 )d =(232+244+33+35)/2+(0.12)10-2=544/0.022=24727 上述數(shù)據按 1.6.2 數(shù)字修約

11、后，表示為25000或 2.5104。7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300 cfu，則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)， 其他平板可記錄為多不可計， 結果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。7.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30 cfu， 則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.1.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算。7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 cfu300 cfu 之間，其中一部分小于 30 cfu 或大于 300 cfu 時，則以最接近30 cfu 或300 cfu 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計

12、算。7.2 菌落總數(shù)的報告7.2.1 菌落數(shù)小于100 cfu 時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。7.2.2 菌落數(shù)大于或等于100 cfu 時，第 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)；也可用10 的指數(shù)精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 6 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -精品學習資料 可選擇p d f - - - - - - - - - - - - - - 第 6 頁，共 7 頁 - - - - - - - - -7 形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。7.2.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測