慢性乙型肝炎患者淋巴細(xì)胞亞群變化及意義

1、慢性乙型肝炎患者淋巴細(xì)胞亞群變化及意【摘要】目的：通過觀察慢性乙型肝炎病人與正常人外周 血中淋巴細(xì)胞亞群的變化，研究乙肝的發(fā)病機(jī)制與宿主細(xì)胞 免疫功能的關(guān)系。方法：收集2009年10月至2010年3月 在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的慢性乙肝病人32 例和健康人20例的外周血，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞 亞群并分析其差異及臨床意義。結(jié)果：慢性乙肝患者與正常 對(duì)照組比較，cd3+、cd44+及cd3+細(xì)胞數(shù)均減少（p<0. 05）； 與正常對(duì)照相比外周血nk細(xì)胞減低（p0. 05）；與正常對(duì) 照相比外周血b淋巴細(xì)胞升高（p0. 05）o結(jié)論：慢性乙肝 患者血中細(xì)胞免疫功能紊亂，t淋巴細(xì)

2、胞亞群失衡等可能與 乙肝病毒感染后慢性化有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】慢性乙型肝炎；t細(xì)胞亞群；nk細(xì)胞；b淋 巴細(xì)胞【中圖分類號(hào)】r512. 6+2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章 編號(hào)】1007-8517 （2012） 10-0074-02乙型肝炎病毒（hbv）感染人數(shù)眾多，我國hbv感染率 為60%,乙肝表面抗原陽性率約10%,是導(dǎo)致慢性肝病最 常見的原因。hbv感染可以引起肝細(xì)胞的免疫性損害，其病 理過程涉及到t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk、nkt等細(xì)胞。本文通過 分析慢性乙肝病人與健康人免疫細(xì)胞的差異，來探討乙型肝 炎發(fā)病機(jī)制與宿主細(xì)胞免疫功能的關(guān)系。1材料和方法2009年10月至2010年3月在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬

3、- 第一醫(yī)院就診的慢性乙型肝炎病人32例和健康人20例，診 斷符合肝病學(xué)會(huì)聯(lián)合修訂的病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。乙肝患 者中男23例、女9例，年齡18-63歲，平均年齡34±13歲， 血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶均超過正常2倍以上。所有病人均未接受 過任何與肝病相關(guān)的治療。健康對(duì)照組20例，男14例、女 6例，年齡1861歲，平均年齡34±9歲。1. 1儀器與試劑 使用美國bd公司facsculiber流式 細(xì)胞儀測(cè)定樣本中的淋巴細(xì)胞亞群，試劑均由該公司提供。1. 2檢測(cè)方法標(biāo)本制備：(1)用k2-edta抗凝管收集外 周靜脈血2ml混勻，2ml用于流式細(xì)胞儀測(cè)定，室溫下送檢。(2)抗體標(biāo)記

4、：取2支檢測(cè)管，分別加入如下抗體組合， 每種抗體20 u 1。cd4、cd8.cd3細(xì)胞亞群抗體；cd16+56. c嘰9抗體；(3)上述管中加入50卩1全血，混勻避光室溫孵 育20分鐘；(4)加入500 u 1ofhlysec溶血素，混勻避光 26°c水浴溶血10分鐘；(5)加入2mlpbs洗液，振蕩混勻， 1500r/min,離心5rain,棄上清；(6)重復(fù)步驟(5)； (7) 每管加入0. 5mlpbs洗液，混勻避光放置，2h內(nèi)完成上機(jī)檢 測(cè)。儀器檢查達(dá)標(biāo)準(zhǔn)后開始檢測(cè)。每管讀取細(xì)胞5000個(gè)， 將流式細(xì)胞儀檢測(cè)的各亞群占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比與血 常規(guī)結(jié)果中淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)值相乘，

5、得到各亞群細(xì)胞的數(shù)。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用土s表示。采用spss統(tǒng)計(jì) 軟件進(jìn)行分析。多組比較采用方差分析，組間兩兩比較采用 q檢驗(yàn)。p<0. 05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果每組之間淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞及白細(xì)胞總數(shù)進(jìn)行比 較：病人組淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于對(duì)照組。淋巴細(xì) 胞亞群中b細(xì)胞計(jì)數(shù)、nk細(xì)胞計(jì)數(shù)低于對(duì)照組（見表1）; 外周血cd4+t、cd8+細(xì)胞低于對(duì)照組（見表2）。3討論hbv主要是通過引起宿主自身的免疫反應(yīng)而造成肝細(xì)胞 的損傷。國內(nèi)外初步研究顯示，慢性乙型肝炎病人體內(nèi)存在 著細(xì)胞免疫功能的紊亂，t淋巴細(xì)胞亞群失衡，使機(jī)體不能 有效清除入侵的乙肝病毒，導(dǎo)致疾病的慢性化。我

6、們通過檢 測(cè)慢性乙肝病人和正常人的淋巴細(xì)胞亞群的變化，來了解是 否存在淋巴細(xì)胞亞群免疫功能紊亂。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常 對(duì)照相比，慢性乙肝患者cd4+、cd8+t細(xì)胞計(jì)數(shù)減少。cim+t 為輔助性t細(xì)胞，能促進(jìn)b細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞的增殖和分 化，調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫；cd8+t細(xì)胞由細(xì)胞毒性t淋 巴細(xì)胞和抑制性t細(xì)胞組成。國內(nèi)外研究顯示在急性乙肝患 者體內(nèi)存在著針對(duì)乙型肝炎病毒強(qiáng)烈多克隆cim+t細(xì)胞反應(yīng) 和細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞（ctl）反應(yīng)，而在慢性乙肝患者中 這種反應(yīng)很弱或檢測(cè)不到。這就提示乙型肝炎病毒感染后 hbv特異性cd4+t細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞反應(yīng)對(duì)病毒的清除和疾 病的轉(zhuǎn)歸起重要的作

7、用。cim+t細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞計(jì)數(shù)的減 少，可能導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能降低，乙肝病毒感染后不易 被清除，與疾病慢性轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，但是，cd8+t細(xì)胞數(shù)量 改變不能完全反映其功能上的變化，并且外周血中cd8+t細(xì) 胞數(shù)量并不能完全反映肝細(xì)胞的情況。因此，尚需完善t細(xì) 胞功能方面的檢測(cè)及進(jìn)行肝組織活檢來進(jìn)一步分析ctl與乙 肝臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。慢性乙肝患者nk細(xì)胞計(jì)數(shù)低于正常對(duì)照。nk細(xì)胞是機(jī) 體自然免疫的主要承擔(dān)者，也是獲得性細(xì)胞免疫的核心細(xì) 胞。研究發(fā)現(xiàn)nk細(xì)胞缺陷的病人易發(fā)生多種危及生命的病 毒感染，這可能與nk細(xì)胞缺乏導(dǎo)致的ctl功能喪失有關(guān)。 在對(duì)乙肝病毒的細(xì)胞免疫中hbv特異性的ctl反應(yīng)對(duì)疾病的 轉(zhuǎn)歸起著決定性作用。因此nk細(xì)胞減少可能與hbv感染后 慢性轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。與正常對(duì)照相比，慢性乙肝患者外周血 b淋巴細(xì)胞亞群比例升高。b淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生抗體、清除、 提呈抗原、分泌細(xì)胞因子參與自身免疫等作用，b細(xì)胞通過 分泌抗體中和游離的病毒顆粒，阻止病毒進(jìn)入肝細(xì)胞和阻止 細(xì)胞間的病毒傳播?；罨痓細(xì)胞是一類抗原呈遞細(xì)胞，能夠 產(chǎn)生大量參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及造血過程的細(xì)胞