實(shí)驗(yàn)七、細(xì)胞器的分級分離ppt課件

1、細(xì)胞器的分級分別細(xì)胞器的分級分別高等植物葉綠體制備動物細(xì)胞線粒體的分別實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 目目 的的學(xué)習(xí)分別細(xì)胞器的普通原理及方法實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)胞內(nèi)不同細(xì)胞器的比重和大小都不一樣，在均勻密度介質(zhì)中不同離心力下沉降的細(xì)胞器組成不同或在梯度介質(zhì)中離心后分布于不同密度層，根據(jù)這一原理，差速離心法或密度梯度離心法就可將細(xì)胞內(nèi)各種組分分別出來。分別流程： 破碎組織勻漿或研磨差速離心或密度梯度離心分別細(xì)胞器結(jié)果檢驗(yàn)分析勻漿勻漿HomogenizationHomogenization低溫條件下，將組織放在勻漿器中，參與等滲勻漿介質(zhì)(即0.25molL蔗糖一0.003molL氯化鈣)進(jìn)展破碎細(xì)胞使之成為各種細(xì)胞

2、器及其包含物的勻漿。各種勻漿、研磨器各種勻漿、研磨器差速離心分級分別差速離心分級分別(Fractionation)(Fractionation)由低速到高速離心逐漸沉降細(xì)胞器。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉(zhuǎn)速將上清液中的小顆粒沉淀下來。 Differential centrifugationHigh speedLow speed密度梯度離心密度梯度離心density gradient density gradient centrifugation method centrifugation method 亦稱平衡密度梯度離心法。用超速離心機(jī)對小分子物質(zhì)溶液，長時(shí)間加一個(gè)離心力場到達(dá)沉降

3、平衡，在沉降池內(nèi)從液面究竟部出現(xiàn)一定的密度梯度。假設(shè)在該溶液里參與少量大分子溶液，那么溶液內(nèi)比溶劑密度大的部分就產(chǎn)生大分子沉降，比溶劑密度小的部分就會上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚構(gòu)成大分子帶狀物。 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation分析分析分級分別得到的組分，可用細(xì)胞化學(xué)和生化方法進(jìn)展形狀和功能鑒定。一實(shí)一實(shí) 驗(yàn)資料驗(yàn)資料多葉綠菜實(shí)實(shí) 驗(yàn)試劑驗(yàn)試劑0.4M蔗糖0.35M氯化鈉每升19.856g氯化鈉實(shí)實(shí) 驗(yàn)用品驗(yàn)用品1、普通臺式離心機(jī)：4臺2、研缽：30個(gè)3、40ml小燒杯:30個(gè)4、紗布：5包5、離心管60支6、載玻片及蓋玻

4、片見指點(diǎn)。一、葉綠體的分別一、葉綠體的分別細(xì)胞中及勻漿中的葉綠體細(xì)胞中及勻漿中的葉綠體葉綠體的分別步驟葉綠體的分別步驟1、采樣、洗滌、去葉脈：最好在晴天上午10時(shí)左右選取生長正常的菠菜葉子菜心、白菜、豌豆也可洗干凈，用吸水紙擦干，去柄及粗脈2、預(yù)冷：放入4冰箱預(yù)冷1h；3、研磨勻漿：稱2克葉子在玻璃研缽中剪碎，先加12m1制備液，快速磨成勻漿，然后再加8m1制備液，磨勻；4、過濾：把勻漿液倒在6層沙布上過濾入小燒杯；5、離心去完好細(xì)胞、細(xì)胞核等：上述濾液轉(zhuǎn)入10ml離心管，平衡后在約500rpm每分鐘的轉(zhuǎn)速離心2分鐘，上清轉(zhuǎn)入另一離心管；6、離心搜集葉綠體：上清液在2600rpm離心5分鐘，棄上清液，沉淀即是葉綠體。7、懸浮葉綠體：沉淀中參與制備液適量，用吸管吹打懸浮、混勻：8、鏡檢分別效果9、葉綠體被膜完好度的測定 ：鐵氰化鉀光復(fù)原的Hill反響