生物選修一生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)總結(jié)

1、生物選修一<生物技術(shù)實(shí)踐 >知識(shí)點(diǎn)總結(jié)專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用*幾種常用發(fā)酵菌種的比較菌種項(xiàng)目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物學(xué)分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生產(chǎn)應(yīng)用釀酒釀醋制作腐乳制作泡菜發(fā)酵條件前期需氧，后期不需氧一直需氧一直需氧不需氧最適溫度182530351518常溫時(shí)間控制1012天78天腌制8天左右腌制10天左右其他條件封閉充氣口適時(shí)充氣控制鹽酒用量控制鹽水比例課題一 果酒和果醋的制作1、在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。 c6h12o66o26co26h2o在

2、無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。 c6h12o62c2h5oh6co22、在發(fā)酵過程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧 呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。3、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌.，當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?。c2h5oho2ch3coohh2o4、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵 ¯ ¯ 果酒 果醋 7、酒精檢驗(yàn)：在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。8. 實(shí)驗(yàn)裝置充氣口是在醋酸

3、發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。課題二 腐乳的制作1、多種微生物參與了發(fā)酵，起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。生殖方式是孢子生殖。2、原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。3、實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制4、所用豆腐的含水量為70左右，水分過多則腐乳不易成

4、形。*5.毛霉的生長(zhǎng)條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的控制在1518，并保持一定的溫度。來源：1.來自空氣中的毛霉孢子，2. 直接接種優(yōu)良毛霉菌種. 時(shí)間：5天6.加鹽腌制：將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽腌制的時(shí)間約為8天左右。注意：控制鹽的用量，豆腐塊與鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為51.鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味7.食鹽的作用：抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì);析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛;調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味.8.配制鹵湯：鹵湯是由

5、酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。·酒的作用：1.防止雜菌污染以防腐2.賦予腐乳以特殊風(fēng)味3.酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系，酒精含量越高，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過低，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗。·香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并促進(jìn)發(fā)酵過程10.防止雜菌污染：用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。課題三 制作泡菜1.制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧 型。在無

6、氧條件下，將糖分解為乳酸 。反應(yīng)式為：c6h12o62c3h6o3+能量 2.亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。亞硝酸鹽含量發(fā)酵時(shí)間（d）膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康，亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜ph 、溫度 和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā) 生重氮化反應(yīng)后，與 n-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中酸硝鹽含量。 試驗(yàn)流程4.測(cè)定亞硝酸鹽的一般流程：配制溶液制備標(biāo)準(zhǔn)

7、顯色液制備樣品處理液比色計(jì)算專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。按照成分可分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水 、 無機(jī)鹽 、 碳源 、 氮源等。2.無菌技術(shù)·獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵.·消毒

8、與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法，化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。*滅菌方法：接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法； 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱 ； 培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋 。3.制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作的步驟：了解

9、將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約1020ml）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置。4.純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。（3）平板劃線法操作步驟：了解將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)

10、，并打開棉塞。將試管口通過火焰。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。將試管通過火焰，并塞上棉塞。左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第 一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最 后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（6）涂布平板操作的步驟：了解將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。5.菌種的保存（1）對(duì)于

11、頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。6.確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天，無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的課題二 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.尿素：尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?.篩選菌株（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、ph等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（2）配制選擇培養(yǎng)基的

12、依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目（1）測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有活菌計(jì)數(shù)法（稀釋涂布平板法）和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置35個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。4.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（1）土壤

13、取樣：從富含有機(jī)物、潮濕、ph7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約38cm的土壤層取樣。（2）樣品的稀釋：（3）微生物的培養(yǎng)與觀察 觀察微生物的菌落特征：形狀、大小、隆起程度、顏色5.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)每克樣品中的菌落數(shù)=（c/v）*m 其中，c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，v代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），m代表稀釋倍數(shù)課題三 分解纖維素的微生物的分離1.纖維素與纖維素酶（1）纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物（2）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即c1酶、cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分

14、解成葡萄糖。2.纖維素分解菌的篩選（1）篩選方法：剛果紅染色法。（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。3.分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生

15、透明圈的菌落（1）土壤采集 選擇富含纖維素的環(huán)境。（2）剛果紅染色法種類一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。4.課題延伸：了解對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定。專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 課題一 菊花的組織培養(yǎng)1.植物組織培養(yǎng)的基本過程由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可

16、以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。2.植物細(xì)胞工程的原理：細(xì)胞的全能性。3.植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物新品種等。4.影響植物組織培養(yǎng)的條件材料：植物的種類、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料（嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化）。營(yíng)養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是ms培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是n、p、s、k、ca、mg，微量元素是fe、mn、b、zn、cu、mo、i、co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、

17、蔗糖等。激素：植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在培養(yǎng)基中植物激素的濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高生長(zhǎng)素 細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化，抑芽形成比值低時(shí)促芽分化，抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)環(huán)境條件：ph、溫度、光等環(huán)境條件。 4、 操作流程配制ms固體培養(yǎng)基外植體的消毒（酒精氯化汞）接種培養(yǎng)移栽栽培 注意：對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。栽前應(yīng)先其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日。然后將幼苗

18、移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。外植體在培養(yǎng)過程中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染等。專題二 月季的花藥培養(yǎng)1. 被子植物的花粉發(fā)育 花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。 被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期（單核居中期單核靠邊期）和雙核期等階段。 同一生殖細(xì)胞形成的兩個(gè)精子，其基因組成完全相同。2.產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑：一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對(duì)的界限，主要取決于培

19、養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。3.影響花藥培養(yǎng)的因素：其中材料的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素選擇月季的初花期，完全未開放的花蕾。一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高·材料的選取：選擇花藥時(shí)，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色4.為防止出現(xiàn)染色體倍性還需要對(duì)培養(yǎng)出來的植株做進(jìn)一步的鑒定和篩選。專題四 酶的研究與應(yīng)用課題1 果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用1基礎(chǔ)知識(shí)11果膠是 植物細(xì)胞壁和胞間層 的主要組成

20、成分之一。12在果汁加工中，果膠的存在易導(dǎo)致 果汁出汁率低，果汁渾濁 。13果膠酶分解果膠的作用是：瓦解 植物的細(xì)胞壁及胞間層 ，使榨取果汁更容易，把果膠分解為 可溶性的半乳糖醛酸 ，使渾濁的果汁變得澄清14果膠酶是一類酶的總稱，包括： 多聚半乳糖醛酸 酶、 果膠分解 酶和 果膠酯 酶。15酶的活性是指：酶催化 一定化學(xué)反應(yīng) 的能力。16酶的活性高低可用一定條件下的酶促 反應(yīng)速度 來表示，即單位時(shí)間、單位體積內(nèi) 反應(yīng)物消耗量 或 產(chǎn)物生成量 來表示。17影響酶活性的因素有： 溫度 、 ph 、 激活劑 和 抑制劑 等。2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)21實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?定量測(cè)定溫度或ph對(duì)果膠酶活性的影響 。22原理：

21、果膠酶瓦解細(xì)胞壁和胞間層增大果汁產(chǎn)量；果膠酶催化分解果膠增大果汁澄清度。23變量設(shè)計(jì)與控制：實(shí)驗(yàn)的自變量是 溫度（或ph）實(shí)驗(yàn)的因變量是 酶的活性 ，檢測(cè)因變量的方法是測(cè)定 果汁的產(chǎn)出量或澄清度 。課題2 探討加酶洗衣粉的洗劑效果一、實(shí)驗(yàn)原理1加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶，其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。2酶的專一性：如堿性蛋白酶將蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽二、注意事項(xiàng)變量的分析和控制：確保單一變量影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料、大小及浸泡時(shí)間和洗滌的時(shí)間

22、等。課題3酵母細(xì)胞的固定化一、實(shí)驗(yàn)原理1使用固定化酶技術(shù)，將這種酶固定在一種顆粒狀的載體上，再將這些酶顆粒裝到一個(gè)反應(yīng)柱內(nèi)，柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無法通過篩板的小孔，而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過程中，將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過反應(yīng)柱，與固定化葡萄糖異構(gòu)酶接觸，轉(zhuǎn)化成果糖，從反應(yīng)柱的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。2固定化方法：包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而酶分子很小；個(gè)大的難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從

23、包埋材料中漏出。固定化酶優(yōu)點(diǎn)：既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，還可以被反復(fù)利用。固定化細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：成本更低，操作更容易，可以催化一系列的化學(xué)反應(yīng)。二、實(shí)驗(yàn)步驟1。細(xì)胞的活化活化：讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)2。配制物質(zhì)的量濃度為0.05mo1/l的cacl2溶液 3。配制海藻酸鈉溶液 加熱時(shí)要用小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止。 4。海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合 將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加人已活化的醉母細(xì)胞 5。固定化酵母細(xì)胞以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的cacl2溶液中，觀察液滴在cacl2溶液中形成凝膠珠的情形。 【注】cacl2

24、溶液的作用：使膠體聚沉6 使用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵 專題五 和蛋白質(zhì)技術(shù)課題一的粗提取與鑒定1.提取dna的溶解性原理包括dna在不同濃度nacl溶液中溶解度不同；dna不溶于酒精，但細(xì)胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。在0.14mol/l時(shí)溶解度最小；較高濃度（2mol/l）可使dna溶解；0.14mol/l可使dna析出。2. 利用dna對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理：蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)dna沒有影洗滌劑將細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細(xì)胞膜。溫度值為6080，蛋白質(zhì)變性沉淀，而dna不會(huì)變性。3.鑒定dna：在沸水浴條件下，dna遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。4.實(shí)驗(yàn)材料的選取本實(shí)驗(yàn)用雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料有兩個(gè)

25、原因。一是因?yàn)殡u血細(xì)胞核的dna含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破.5.實(shí)驗(yàn)操作制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放dna 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)dna 加入nacl至2mol/l，同一方向緩慢攪拌dna析出 加蒸餾水至0.14mol/l，過濾，在溶解到2mol/l溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。dna初步純化 與等體積95冷卻酒精混合，析出白色絲狀物除去核蛋白、rna、多糖等。dna鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色6.注意事項(xiàng)：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；使用塑料燒杯；使用尼龍布過濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細(xì)

26、胞破裂快速攪拌）；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。課題3 血紅蛋白的提取和分離一、實(shí)驗(yàn)原理1凝膠色譜法：（1）依據(jù)：蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大?。?）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。2緩沖溶液（1）組成：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成（如h2co3nahco3， nah2po4/na2hpo4等），調(diào)節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同ph的緩沖液。（2）作用：抵制外界酸、堿對(duì)溶液ph的干擾而保持ph穩(wěn)定。3電泳法：（1）原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場(chǎng)中受到的作用

27、力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。（2）分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。（3）聚丙烯酰胺凝膠電泳：在加入帶負(fù)電荷多的sds，形成“蛋白質(zhì)sds復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。二、實(shí)驗(yàn)步驟1樣品處理 紅細(xì)胞的洗滌洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，采集的血樣要及時(shí)采用低速短時(shí)間離心分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。血紅蛋白的釋放 在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放

28、出血紅蛋白。2粗分離分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。透析 透析可以去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)3純化：凝膠色譜法分離4.純度鑒定-sds聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）三、注意事項(xiàng)如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出. 專題六植物有效成分的提取課題一植物芳香油的提取1.天然香料的來源：植物、動(dòng)物，真菌2.芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng);難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑;成分復(fù)雜，以萜類化合物及衍生物為主。3.芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取等。水蒸氣蒸餾法：原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。方法：水中蒸餾：水上蒸餾：水汽蒸餾。不足：有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。