蛋白質(zhì)化學(xué)PPT課件

1、單純蛋白質(zhì)：組蛋白單純蛋白質(zhì)：組蛋白綴合蛋白質(zhì)：糖蛋白、脂蛋白、核蛋白綴合蛋白質(zhì)：糖蛋白、脂蛋白、核蛋白組成細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)成分：膠原蛋白、膜蛋白進行生化催化：酶進行生物防御：免疫球蛋白、凝血酶進行生物識別：膜蛋白、一些糖蛋白組成生物體的營養(yǎng)物質(zhì)： 卵清蛋白收縮和運動功能： 肌動蛋白進行生物營養(yǎng)物質(zhì)的運輸：血紅蛋白調(diào)節(jié)功能： 胰島素、促生長素調(diào)控信息傳遞和基因表達(dá)：dna復(fù)制和rna轉(zhuǎn) 錄中的一系列蛋白質(zhì)因子氧化供能的測定的測定(測定氮的經(jīng)典方法)l 100克樣品中蛋白質(zhì)的含量克樣品中蛋白質(zhì)的含量 ( g % )= 每克樣品含氮每克樣品含氮克數(shù)克數(shù) 6.25100 優(yōu)點：對原料無選擇性，儀器簡單

2、,方法也簡單； 缺點：易將無機氮(如核酸中的氮)都?xì)w入蛋白質(zhì)中,不精確。1.氨基酸的結(jié)構(gòu)氨基酸的結(jié)構(gòu) h rc ch2h ch r hc r 1.據(jù)據(jù)r基團化學(xué)結(jié)構(gòu)或者基團化學(xué)結(jié)構(gòu)或者r基團的極性進行分類基團的極性進行分類 二、基本氨基酸的分類二、基本氨基酸的分類 h rc2.根據(jù)氨基酸的酸堿性根據(jù)氨基酸的酸堿性質(zhì)分類質(zhì)分類3.根據(jù)氨基酸的營養(yǎng)價根據(jù)氨基酸的營養(yǎng)價值分類值分類4.根據(jù)氨基酸的代謝途根據(jù)氨基酸的代謝途徑分類徑分類甘氨酸甘氨酸 glycine gly g 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine ala a 6.00纈氨酸纈氨酸 valine val v 5.96亮氨酸亮氨酸 leuc

3、ine leu l 5.98 異亮氨酸異亮氨酸 isoleucine ile i 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine phe f 5.48脯氨酸脯氨酸 proline pro p 6.301. 非極性側(cè)鏈氨基酸非極性側(cè)鏈氨基酸目目 錄錄色氨酸色氨酸 tryptophan try w 5.89絲氨酸絲氨酸 serine ser s 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine try y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine cys c 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine met m 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine asn n 5.41 谷氨酰胺谷

4、氨酰胺 glutamine gln q 5.65 蘇氨酸蘇氨酸 threonine thr t 5.602. 非電離極性側(cè)鏈氨基酸非電離極性側(cè)鏈氨基酸目目 錄錄天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid asp d 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid glu e 3.22賴氨酸賴氨酸 lysine lys k 9.74精氨酸精氨酸 arginine arg r 10.76組氨酸組氨酸 histidine his h 7.593. 酸性氨基酸酸性氨基酸4. 堿性氨基酸堿性氨基酸目目 錄錄l必需氨基酸必需氨基酸 ： 比如4-羥基脯氨酸、5-羥基賴氨酸、n-甲基賴氨酸等，常常行使重要

5、的生理功能。(1)溶解性：溶解性：各種在水中的溶解度差別很大，并能溶解于稀酸或稀堿中，但不能溶解于有機溶劑，比如酒精。 (2) 熔點：熔點：氨基酸的熔點極高，一般在200以上。(3) 味感：味感：其味隨不同氨基酸有所不同，有的無味、有的味甜、有的味苦，谷氨酸谷氨酸的單鈉鹽有鮮味，是味精的主要成分。(4)旋光性：旋光性：能使偏振光平面向左或向右旋轉(zhuǎn)，左旋者通常用（-）表示，右旋者用（+）表示。(5)光吸收：光吸收：構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種氨基酸在遠(yuǎn)紫外區(qū)(220nm)均有光吸收。在近紫外區(qū)(220-300nm)只有酪氨酸酪氨酸、苯丙氨酸和、苯丙氨酸和色色氨酸氨酸有吸收光的能力。coohchh3n+r-

6、pk1+h+h+c o o-chh3n+rh+h+p k2-c o o-chh2nrph 1 7 10凈電荷 +1 0 -1 正離子 兩性離子 負(fù)離子 等電點等電點pi當(dāng)溶液濃度為某一ph值時，氨基酸分子中所含的-nh3+和-coo-數(shù)目正好相等，凈電荷為0。這一ph值即為氨基酸的等電點氨基酸的等電點，簡稱pi。在等電點時，氨基酸既不向正極也不向負(fù)極移動。 思考題：請用aa的解離性質(zhì)推測蛋白質(zhì)在溶液中是否解離？ 4.氨基酸的化學(xué)性質(zhì)氨基酸的化學(xué)性質(zhì)(1)與茚三酮的反應(yīng)（顏色反應(yīng)）與茚三酮的反應(yīng)（顏色反應(yīng)）aa與茚三酮，生成的藍(lán)紫色化合物，* 以肽鍵相連接以肽鍵相連接,肽鍵肽鍵(peptide

7、bond)是是由一個氨基酸的由一個氨基酸的 -羧基上的羥基羧基上的羥基與另與另一個氨基酸的一個氨基酸的 -氨基上的氫原子氨基上的氫原子脫水脫水縮合而形成的化學(xué)鍵縮合而形成的化學(xué)鍵,如圖示如圖示:四四. 氨基酸在蛋白氨基酸在蛋白質(zhì)中的連接方式質(zhì)中的連接方式nh2-ch-chooh甘甘氨氨酸酸nh2-ch-chooh甘甘氨氨酸酸nh-ch-choho oh甘甘氨氨酸酸+-hoh甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽鍵nh2-ch-c-n-ch-coohhhhonh2-ch-c-n-ch-coohhhho * * 肽肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。* *由十個以內(nèi)氨

8、基酸相連而成的肽為由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽為寡肽寡肽，兩分子氨基酸縮合形兩分子氨基酸縮合形成成二肽二肽，三分子氨基酸縮合則形成，三分子氨基酸縮合則形成三肽三肽* * 由更多的氨基酸相連形成的肽稱由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽多肽。* * 肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基氨基酸殘基。酸殘基。n 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有自由氨基自由氨基的一端的一端c 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有自由羧基自由羧基的一端的一端多肽鏈書寫方向為多肽鏈書寫方向為n端到端到c端端思考題：思考題：dna的書寫方向是什么？的書寫方向是什么？

9、多肽鏈有兩端多肽鏈有兩端* 多肽鏈多肽鏈?zhǔn)侵冈S多氨基酸之間以肽鍵連接是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。而成的一種結(jié)構(gòu)。 幾種生物活性肽幾種生物活性肽 1. 谷胱甘肽谷胱甘肽( gsh )gsh過氧過氧化物酶化物酶h2o2 2gsh 2h2o gssg gsh還原酶還原酶nadph+h+ nadp+ 谷胱甘肽(gsh)與維生素c ,維生素e構(gòu)成抗氧化系統(tǒng),保護許多含巰基的蛋白質(zhì)和酶以及生物膜等免于氧化而喪失正常的生化功能。 體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽2. 多肽類激素及活性肽多肽類激素及活性肽抗利尿素與催產(chǎn)素抗利尿素與催產(chǎn)素(9肽肽)、胰高血糖素、胰高血糖素（29肽

10、）、肽）、腦啡肽腦啡肽（5肽）、肽）、降鈣素降鈣素（32肽）、肽）、 acth（39肽）、肽）、胰島素胰島素（51肽）肽）肌肽肌肽（2肽）、肽）、p物質(zhì)（物質(zhì)（10肽、屬神經(jīng)肽類）、肽、屬神經(jīng)肽類）、（31肽）肽） 第第 二二 節(jié)節(jié)蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)的的主主要要層層次次一級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu) -折疊片折疊片 -螺旋體螺旋體 松散肽段松散肽段亞基亞基三級結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)分分子子的的構(gòu)構(gòu)象象示示意意圖圖概念：概念：蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。順序。一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)一、蛋白質(zhì)

11、的一級結(jié)構(gòu)主要的化學(xué)鍵主要的化學(xué)鍵(主鍵主鍵)肽鍵肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。 或 一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。一級結(jié)構(gòu)由遺傳密碼決定一級結(jié)構(gòu)由遺傳密碼決定, ,其上有酶切位點其上有酶切位點, ,一級結(jié)構(gòu)可一級結(jié)構(gòu)可被測定被測定, , 不同種屬間同一蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)具有同源性。不同種屬間同一蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)具有同源性。目目 錄錄第一：蛋白質(zhì)分子一級結(jié)構(gòu)的多樣性：假如一個多肽由20個aa組成，則其可能的多肽鏈多肽鏈組成 : 2020=2*1018種第二：蛋白質(zhì)可有一條或多條肽鏈組成，比如說是由4條肽鏈

12、組成，則蛋白質(zhì)的多肽鏈可能組成為4*3*2* 2020=48*1018第三：蛋白質(zhì)具有不同的空間結(jié)構(gòu)，在不同的環(huán)境影響下空間結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化思考題：dna結(jié)構(gòu)的多樣性？一級結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)一級結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ) 牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)二二硫硫鍵鍵二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)指蛋白質(zhì)分子空間的三維結(jié)構(gòu)指蛋白質(zhì)分子空間的三維結(jié)構(gòu), ,即立體即立體, ,空間的構(gòu)象，在蛋白質(zhì)分子中各元素圍繞空間的構(gòu)象，在蛋白質(zhì)分子中各元素圍繞某些化學(xué)鍵進行旋轉(zhuǎn)某些化學(xué)鍵進行旋轉(zhuǎn), ,從而形成各種空間排從而形成各種空間排布及相互關(guān)系。布及相互關(guān)系。2.2.二級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)a.a.概

13、念概念: :一條多肽鏈中一條多肽鏈中局部原子局部原子的空間排布的空間排布b.b.二級結(jié)構(gòu)的基本形式二級結(jié)構(gòu)的基本形式（1 1） - -螺旋螺旋（2 2） - -折疊折疊 （3 3） - -轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)角 （4 4）不規(guī)則卷曲不規(guī)則卷曲 - -螺旋螺旋目目 錄錄 - -折疊折疊ncnn: - -轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)角氨基酸殘基的側(cè)鏈對二級結(jié)構(gòu)形成的影響氨基酸殘基的側(cè)鏈對二級結(jié)構(gòu)形成的影響一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成成 - -螺旋或螺旋或-折疊或其他二級結(jié)構(gòu)，它就折疊或其他二級結(jié)構(gòu)，它就會出現(xiàn)相應(yīng)的二級結(jié)構(gòu)。會出現(xiàn)相應(yīng)的二級結(jié)構(gòu)。 所以，所以，蛋白質(zhì)二蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是以一級結(jié)構(gòu)為

14、基礎(chǔ)的。級結(jié)構(gòu)是以一級結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。(二二)、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)一條多肽鏈中全部氨基酸殘基一條多肽鏈中全部氨基酸殘基(全部元素全部元素)的的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。包括排布位置。包括主鏈，側(cè)鏈主鏈，側(cè)鏈的全部內(nèi)容。的全部內(nèi)容。1. 概念概念 酵母己糖激酶的三級結(jié)構(gòu)2. 2.維系力維系力 亞基之間的結(jié)合力有亞基之間的結(jié)合力有疏水作用，疏水作用， 范德華力范德華力以及氫鍵和離子鍵以及氫鍵和離子鍵, ,還有二硫鍵。還有二硫鍵。（三）蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)（三）蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)1. 1.概念概念 有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多

15、條多有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結(jié)構(gòu)，稱肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。而每條多肽鏈被稱為為蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。而每條多肽鏈被稱為亞亞基基。一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血n-val his leu thr pro glu glu c(146) hbs 肽鏈肽鏈hba 肽肽 鏈鏈n-val his leu thr pro val glu c(146) 鐮刀形紅細(xì)胞貧血是鐮刀形紅細(xì)胞貧血是由蛋白質(zhì)由蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生發(fā)生變異而導(dǎo)致的疾病，故被稱為變異而導(dǎo)致的疾病，故被稱為“分子病分

16、子病”。s s s s s s 胰島素胰島素2. 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定的意義蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定的意義l是推測蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)的分子依據(jù)是推測蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)的分子依據(jù)l是理解蛋白質(zhì)生理功能的分子基礎(chǔ)是理解蛋白質(zhì)生理功能的分子基礎(chǔ)l是闡明遺傳疾病發(fā)生機理的分子手段是闡明遺傳疾病發(fā)生機理的分子手段l是研究生物進化的分子佐證是研究生物進化的分子佐證生物生物 與人不同的與人不同的aaaa數(shù)目數(shù)目黑猩猩黑猩猩 0恒河猴恒河猴 1兔兔 9袋鼠袋鼠 10牛、豬、羊、狗牛、豬、羊、狗 11馬馬 12雞、火雞雞、火雞 13響尾蛇響尾蛇 14海龜海龜 15金槍魚金槍魚 21角餃角餃 23小蠅小蠅 25蛾蛾 31小麥小麥

17、 35粗早鏈孢霉粗早鏈孢霉 43酵母酵母 44 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病 若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構(gòu)若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時可導(dǎo)致疾病發(fā)生。能，嚴(yán)重時可導(dǎo)致疾病發(fā)生。這類疾病包括這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。

18、癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白瘋牛病是由朊病毒蛋白( prp)引起的一組人引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。和動物神經(jīng)退行性病變。正常的正常的prp富含富含-螺旋，稱為螺旋，稱為prpc。prpc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為為-折疊的折疊的prpsc，從而致病。，從而致病。prpc-螺旋螺旋prpsc-折疊折疊正常正常瘋牛病瘋牛病第三節(jié)第三節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團，在一定的

19、溶液氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團，在一定的溶液phph條條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團。件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團。 * 蛋白質(zhì)的等電點蛋白質(zhì)的等電點( pi) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一ph時，蛋白質(zhì)解離時，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的電荷為零，此時溶液的ph稱為稱為蛋白質(zhì)的等電點。蛋白質(zhì)的等電點。一、蛋白質(zhì)兩性解離和等電點一、蛋白質(zhì)兩性解離和等電點二二. .蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至萬至100

20、萬之巨，其分子的直徑可達(dá)萬之巨，其分子的直徑可達(dá)1100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。，為膠粒范圍之內(nèi)。 * * 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素：蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素：顆粒表面電荷顆粒表面電荷水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質(zhì)的聚合沉淀溶液中蛋白質(zhì)的聚合沉淀* * 蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)的沉淀在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會在一定條件

21、下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。中性鹽沉淀（比如硫酸銨）中性鹽沉淀（比如硫酸銨）有機溶劑沉淀：乙醇法沉淀蛋白質(zhì)有機溶劑沉淀：乙醇法沉淀蛋白質(zhì) 生物堿試劑：藥檢（三氯醋酸）生物堿試劑：藥檢（三氯醋酸）蛋白質(zhì)膠體分子大小不能通過半透膜，可以蛋白質(zhì)膠體分子大小不能通過半透膜，可以用透析法來分離純化。用透析法來分離純化。三三. .蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的變性* 蛋白質(zhì)的變性：蛋白質(zhì)的變性：在某些理化因素作用下，蛋在某些理化因素作用下，蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)白質(zhì)特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空

22、間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變變、生物活性的喪失。生物活性的喪失。若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為能，稱為復(fù)性復(fù)性 。 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性 引起變性的因素引起變性的因素: :理化或生物學(xué)因素理化或生物學(xué)因素 如如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及

23、生物堿試劑等金屬離子及生物堿試劑等 。 變性的本質(zhì)變性的本質(zhì) 破壞非共價鍵破壞非共價鍵（次級鍵）（次級鍵）和二硫鍵，和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。 應(yīng)用舉例應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。蛋白質(zhì)變性，多種用途，比如制作豆腐。蛋白質(zhì)變性，多種用途，比如制作豆腐。此外此外, , 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。（如疫苗等）的必要條件。 四、蛋白質(zhì)的紫外吸收四、蛋白質(zhì)的紫外吸收由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和

24、色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的峰。蛋白質(zhì)的od280與其與其濃度呈正比關(guān)系，因濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測定。此可作蛋白質(zhì)定量測定。思考題：該法測定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點和缺思考題：該法測定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點和缺點是？點是？紫外吸收核酸應(yīng)在多少紫外吸收核酸應(yīng)在多少nm波長處測定？波長處測定？五、五、 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸可發(fā)生茚三蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。酮反應(yīng)。 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅

25、色，此反應(yīng)稱為色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。（一）、（一）、*有機溶劑沉淀：有機溶劑沉淀：使用丙酮使用丙酮、乙醇、異丙醇等、乙醇、異丙醇等有機溶劑有機溶劑沉淀蛋白質(zhì)時，必須在低溫下進行，沉淀蛋白質(zhì)時，必須在低溫下進行，試劑用量一般試劑用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積，沉淀倍于蛋白質(zhì)溶液體積，沉淀后，應(yīng)立即分離出蛋白質(zhì)。后，應(yīng)立即分離出蛋白質(zhì)。 *鹽析鹽析:是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)

26、致蛋白質(zhì)沉淀?；け黄茐?，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。 等電點沉淀等電點沉淀 利用各種蛋白質(zhì)在等電點時，溶解度最小這一性質(zhì)，可以通利用各種蛋白質(zhì)在等電點時，溶解度最小這一性質(zhì)，可以通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的ph值值 ，將不同的蛋白質(zhì)分開。，將不同的蛋白質(zhì)分開。人工人工ph梯度梯度二、根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小差別的分離方法二、根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小差別的分離方法* 透析透析利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。物分開的方法。* * 超濾超濾使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。&.透析透析透析與超過濾簡易裝置透析與超過濾簡易裝置離離心心機機結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)示示意意圖圖轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)頭腔轉(zhuǎn)頭腔沉降樣品沉降樣品驅(qū)動馬達(dá)驅(qū)動馬達(dá)真空真空冷凍冷凍超速離心超速離心目目 錄錄