醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)畢業(yè)論文

1、南通體臣衛(wèi)校南通體臣衛(wèi)校畢業(yè)論文畢業(yè)論文題目題目三種肺炎支原體檢測(cè)法三種肺炎支原體檢測(cè)法的臨床應(yīng)用分析的臨床應(yīng)用分析地地 市市: 南通市南通市 學(xué)學(xué) 校校: 體臣衛(wèi)校體臣衛(wèi)校 準(zhǔn)考證號(hào)準(zhǔn)考證號(hào): 考生姓名考生姓名: 陸施燕陸施燕 指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師: 2015 年年 5 月月 24 日日- 2 - 三種肺炎支原體檢測(cè)法的臨床應(yīng)用分析三種肺炎支原體檢測(cè)法的臨床應(yīng)用分析摘摘 要要 目的目的 探討肺炎支原體（探討肺炎支原體（MPMP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)（應(yīng)（PCRPCR）法和血清）法和血清 MPMP 被動(dòng)凝集法（被動(dòng)凝集法（MP-AbMP-

2、Ab）等方法在兒童）等方法在兒童 MPMP 感染診斷治療過感染診斷治療過程中的敏感性方法程中的敏感性方法 采用采用 3MP3MP 檢測(cè)法對(duì)檢測(cè)法對(duì) 362362 例臨床擬診呼吸道（非細(xì)菌性）感染例臨床擬診呼吸道（非細(xì)菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進(jìn)行配對(duì)研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和的患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進(jìn)行配對(duì)研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCRPCR，同時(shí)取血清做，同時(shí)取血清做 MP-AbMP-Ab 檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)，對(duì) 3 3 種方法的檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷治療病例進(jìn)種方法的檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷治療病例進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果行回顧性分析。結(jié)果 回顧臨床病例診斷回顧臨床病例診斷 MPMP 感

3、染患兒感染患兒 152152 例。例。MPMP 快速培養(yǎng)法檢快速培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性出陽(yáng)性 7878 例，陽(yáng)性率為例，陽(yáng)性率為 51.3%51.3%，病程為（，病程為（4.52.64.52.6）天；）天；PCRPCR 法檢測(cè)出陽(yáng)性法檢測(cè)出陽(yáng)性103103 例，陽(yáng)性率為例，陽(yáng)性率為 67.8%67.8%，病程為（，病程為（6.23.56.23.5）天；）天；MP-AbMP-Ab 法檢測(cè)出陽(yáng)性法檢測(cè)出陽(yáng)性 127127 例，例，陽(yáng)性率陽(yáng)性率 83.5%83.5%，病程（，病程（8.14.58.14.5）天。結(jié)論）天。結(jié)論 3 3 種種 MPMP 檢測(cè)法的敏感性與病程有相檢測(cè)法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床

4、醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患兒病程選取檢測(cè)方法，以提高陽(yáng)性檢出率和敏感性。關(guān)性，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患兒病程選取檢測(cè)方法，以提高陽(yáng)性檢出率和敏感性。 關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞 肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)，血清抗體，配對(duì)肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)，血清抗體，配對(duì)研究研究- 3 - 目目 錄錄前前 言言.5第一章第一章 文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述.61.1 肺炎支原體的定義.61.2 肺炎支原體的發(fā)病機(jī)制.61.3 肺炎支原體的分類.61.4 肺炎支原體的臨床表現(xiàn).61.5 肺炎支原體的臨床診斷.71.6 肺炎支原體的實(shí)驗(yàn)室檢查.7第二章第二章 材料和方法材料和方法.82.1 樣本.82.2 方法概述.82.

5、3 臨床診斷 MP 感染的診斷標(biāo)準(zhǔn).82.4 實(shí)驗(yàn)方法.92.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法.9第三章第三章 結(jié)果結(jié)果.10第四章第四章 討論討論.11- 4 - 結(jié)結(jié) 論論.12參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn).12致致 謝謝.13附錄附錄.14。- 5 - 前前 言言肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之，臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約 3%10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由 MP 或病毒、細(xì)菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用 3 種 MP 檢測(cè)法對(duì) 362 例臨床擬診為呼吸道（非細(xì)菌性）感染患兒的咽拭子

6、和血清標(biāo)本進(jìn)行配對(duì)研究，通過病例回顧來探索對(duì)支原體肺炎敏感的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，以協(xié)助臨床準(zhǔn)確做出診治。- 6 - 第一章第一章 文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述1.1 肺炎支原體的定義小兒肺炎支原體肺炎多見于 515 歲兒童，嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細(xì)支氣管炎。多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。X 線改變明顯，多為單側(cè)病變，也可見雙側(cè)病變，以下葉為多見，有時(shí)病灶呈游走性，少數(shù)呈大葉性陰影；病程 23 周不等，X 線陰影完全消失比癥狀消退更延長(zhǎng) 23 周之久，偶有延長(zhǎng)至 6 周者。 1.2 肺炎支原體的發(fā)病機(jī)制肺炎支原體肺炎（Mycoplasma Pneumo

7、niae Pneumonia，MPP）的發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP 直接侵入和免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制等學(xué)說，其中免疫調(diào)節(jié)異常在 MPP 的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用 1.3 肺炎支原體的臨床表現(xiàn)1. 多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。2. 可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害，皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見非特異性肌痛和游走性關(guān)節(jié)痛；也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)損害、血尿及溶血性貧血等。3. 全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低及少許干濕羅音者 1.4 肺炎支原體的臨床診斷病原學(xué)診斷 肺炎支原體快

8、速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于被動(dòng)凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期可提供重要的依據(jù)，可做為臨床診斷 MP 感染的優(yōu)先試驗(yàn)8；氣管肺泡灌洗液MP-DNA 測(cè)定不僅能診斷 MP 感染,且支氣管肺泡灌洗術(shù)可促進(jìn)呼吸道癥狀的改善及體征恢復(fù)，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液 MP-DNA，痰液 MP-DNA及血清 MP 抗體檢測(cè)陽(yáng)性率沒有差異。CRP 的檢測(cè)是肺炎病原體的輔助診斷方法，一定程度可區(qū)分細(xì)菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測(cè) MP 具有可靠、特異性高的特點(diǎn)，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。1.5 肺炎支原體的實(shí)驗(yàn)室檢查- 7 - 急性期 MPP 患兒血清 hs-CRP、C3、CA、

9、IgM、IgG 明顯升高，IgA 明顯降低；而恢復(fù)期 hs-CR、IgG 仍然較高，而 IgM 和 IgA 均沒有明顯變化，補(bǔ)體 C3、C4 在恢復(fù)期內(nèi)也沒有明顯變化，因此血清 C-反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白和血清補(bǔ)體的監(jiān)測(cè)對(duì)診斷急性期或恢復(fù)期 MPP 有重要意義。MP-IgM 和冷凝集試驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)可提高小兒支原體肺炎實(shí)驗(yàn)診斷的準(zhǔn)確率；支原體肺炎患兒外周血白細(xì)胞大多正常占 80%，中性粒細(xì)胞增高占 61%；65.6%患兒 C-反應(yīng)蛋白增高；53.6%患兒血沉增快；58.4%患兒心肌酶譜增高；24.0%患兒肝酶增高；16.8%患兒尿酸增高。5流行病學(xué)特點(diǎn)及進(jìn)展 MP 肺炎發(fā)生率約為 22.3%，912

10、 歲感染率最低,36 歲最高,1012 月是發(fā)病高峰月,小兒支原休肺炎發(fā)病率有所上升,發(fā)病年齡有趨小傾向,秋冬季發(fā)病率高,肺炎支原體只要通過呼吸道進(jìn)行傳播，尤其發(fā)病率較高的地區(qū)，局部區(qū)域每隔 3-5 年可發(fā)生一次肺炎支原體感染，每 2-6 年可發(fā)生一次大范圍的肺炎支原體感染，每次感染的時(shí)間都持續(xù)較長(zhǎng)，有的感染可持續(xù)一年左右，因此，有關(guān)部門一定要采取相應(yīng)的預(yù)防措施，切斷呼吸道飛沫傳播途徑對(duì)控制疾病發(fā)生和流行具有重大意義。控制支原體感染的發(fā)生和流行。第二章第二章 材料和方法材料和方法2.1 樣本 收集黃河中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在兒科就診住院患兒病例，有呼吸道感染

11、癥狀，已經(jīng)初診為非細(xì)菌性感染的患兒 362 例作為研究對(duì)象，其中男 175 例，女 187 例；年齡為 2 個(gè)月12 歲，病程為 190 天。2.2 方法 具體方法有：（1）用 MP 快速培養(yǎng)法、PCR 法和 MP-Ab 法等 3 種 MP 檢測(cè)法對(duì) 362 例研究對(duì)象同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，記錄結(jié)果。 （2）通過研究對(duì)象病歷回顧統(tǒng)計(jì)MP 感染的例數(shù)，并按年齡、病程和 3 種 MP 檢測(cè)法結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.3 臨床診斷 MP 感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)- 8 - 按文獻(xiàn)1 、臨床癥狀、體征標(biāo)準(zhǔn)，包括回顧性診斷即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實(shí)驗(yàn)室檢查 3 種檢測(cè)法至少有一種陽(yáng)性。病

12、程計(jì)算方法：以病歷本記錄為準(zhǔn)，即在患兒開始有癥狀或體征時(shí)開始計(jì)算，到患兒來就診檢測(cè)時(shí)為止進(jìn)行計(jì)算。2.4 MP 快速培養(yǎng)法 支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術(shù)有限公司提供。清晨患兒未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預(yù)溫的培養(yǎng)基中，37 培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時(shí)，瓶底有藍(lán)色顆粒或物質(zhì)沉淀為陽(yáng)性，5 天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍(lán)色顆?；蛭镔|(zhì)沉淀為陰性。 PCR 法：試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。應(yīng)用PCR法檢測(cè) MP-DNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，以在紫外燈下出現(xiàn)180 bp 擴(kuò)增帶結(jié)果判為陽(yáng)性。

13、每次試驗(yàn)均設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照（陽(yáng)性對(duì)照為MP質(zhì)粒，陰性對(duì)照為無菌生理鹽水），由專人進(jìn)行操作，質(zhì)量控制。MP-Ab 法：試劑為日本瑞必歐株式會(huì)社MP-Ab 檢測(cè)試劑 SERODIA-MYCO凝集試驗(yàn)試劑盒，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3 ml，采用明膠顆粒被動(dòng)凝集法，用血清檢測(cè)，結(jié)果以140 判斷為陽(yáng)性。每次試驗(yàn)均設(shè)未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽(yáng)性、陰性血清進(jìn)行測(cè)定。2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（xs）表示，各年齡組與 3 種檢測(cè)方法結(jié)果比較用 Spearman 檢驗(yàn)；各年齡組間確診病例的陽(yáng)性率比較用 2 檢驗(yàn)；3 種檢測(cè)方- 9 - 法陽(yáng)性結(jié)果與病程之間的比較用 q 檢驗(yàn)

14、。第三章第三章 結(jié)果結(jié)果3.1 陽(yáng)性樣本 經(jīng)過回顧性診斷，在配對(duì)研究組 362 例研究對(duì)象中有 152 例符合 MP 感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即有 152 例確診病例，其中肺炎 45 例，支氣管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支氣管哮喘 2 例。MP 快速培養(yǎng)法檢測(cè)出 78 例陽(yáng)性，PCR 法檢測(cè)出103 例陽(yáng)性，MP-Ab 法檢測(cè)出 127 例陽(yáng)性。3.2 結(jié)果分析 各確診病例的年齡分布，見表 1。表 1 顯示兒童 MP 感染的年齡以 34歲年齡段的病例最多，為 46 例，陽(yáng)性率最高，為 70.77%，與其余年齡組段比較 P0.05。不同病程患兒 3 種檢測(cè)法的檢測(cè)結(jié)果，見表 2，表 2顯示 M

15、P 快速培養(yǎng)法為陽(yáng)性的患兒病程均值較短為（4.52.6）天，PCR 法為陽(yáng)性的患兒病程均值為（6.23.5）天，MP-Ab 法為陽(yáng)性的患兒病程均值較長(zhǎng)為（8.14.5）天。3 組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05） 。表 1 不同年齡組 MP 感染確診病例和 3 種檢測(cè)方法結(jié)果對(duì)比分析注：代表與年齡組34 歲組段比較結(jié)果表 2 不同病程患兒 3 種檢測(cè)方法陽(yáng)性結(jié)果對(duì)比分析注：代表三組之間的兩兩比較第四章第四章 討論討論 MP 感染的臨床表現(xiàn)常無特異性，臨床的實(shí)際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀：（1）發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰，偶帶血絲。 （2

16、）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。 （4）WBC 正常或升高。 （5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有效。 （6）實(shí)驗(yàn)室 MP 檢驗(yàn)有 1 項(xiàng)或 1 項(xiàng)以上陽(yáng)性具備以上 2 個(gè)條件或以上者可初步診斷為 MP 感染。多時(shí)候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)- 10 - 患兒的癥狀、體征和病史做 MP 感染的診斷性治療，但應(yīng)與肺結(jié)核相互鑒別。2 2 近年來由于診斷技術(shù)的提高，MP 感染報(bào)道日漸增多，一般認(rèn)為 MP 感染以年長(zhǎng)兒發(fā)病較多，本文表 1 資料顯示，28 歲年齡段是發(fā)病的高峰期2 。占同

17、期呼吸免疫科住院患兒的 9.3%，比有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的 10%20%低。說明 MP 感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不典型。3 3臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) MP 的方法很多，過去所用的冷凝集試驗(yàn)法診斷 MP 感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響3 。本文采用配對(duì)資料研究，對(duì)疑為MP 感染的患兒進(jìn)行 3 種 MP 檢測(cè)法，以探討 MP 快速培養(yǎng)法、PCR 法和 MP-Ab 法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病程選取不同的檢測(cè)方法，以提高實(shí)驗(yàn)室的陽(yáng)性檢出率。4 4 MP 快速培養(yǎng)法是利用 MP 生長(zhǎng)代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中指示劑

18、顏色發(fā)生改變來判斷 MP 生長(zhǎng)；標(biāo)本中的其他支原體和細(xì)菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽(yáng)性結(jié)果可 48 h 檢出。結(jié)果顯示，培養(yǎng)法陽(yáng)性率為51.3%（78/152） ，低于另外兩種方法的陽(yáng)性率?？赡芘c在檢測(cè)前患兒已經(jīng)用了MP 敏感藥物有關(guān)。表 2 結(jié)果顯示，該法陽(yáng)性病例病程最短。提示病程時(shí)間較短的患兒選擇此方法對(duì)檢測(cè)的陽(yáng)性率較高。MP 培養(yǎng)是診斷 MP 的金標(biāo)準(zhǔn)4 。5 5 咽拭子 PCR 法檢測(cè)質(zhì)粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術(shù)可從患兒痰中檢測(cè) MP-DNA。由于此方法相當(dāng)敏感，易受污染，故實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)應(yīng)特別小心。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，該法的陽(yáng)性率為 67.76%（103/152） ，高于快培法。此法彌補(bǔ)了極微量的和被藥物殺死的 MP 不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表 2 結(jié)果顯示，該法陽(yáng)性病例，病程為（6.23.5）天。詳細(xì)資料顯示，有病程在 30 天以上的患兒經(jīng)抗 MP 治療，該法仍可為陽(yáng)性，說明 MP 的生存力相當(dāng)強(qiáng)，要系統(tǒng)化治療。 血清 MP-Ab 法陽(yáng)性率是 3 種檢測(cè)方法中最高的，