西貢蕉枯萎病生防木霉菌株gz_2的鑒定及生物學(xué)特性研究

1、1533西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)southv est ch ha jouma i of agriru 111 nd sc ibices文章編號(hào)：1001-4829(2010) 05-1533 - 07西貢蕉枯萎病生防木霉菌株g2 的鑒定及生物學(xué)特性研究柯仿鋼；黃思良丁，付崗3,汪茜、張欣)黎起秦(1.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣西南寧530005 2南陽前范學(xué)院河南南陽47306k&廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所，廣西南寧51x)07； 4中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所，海南脩州571737)摘 要：拮抗西貢蕉枯萎病菌的木霉菌株.2是|株具有生防潛力的拮抗菌,依據(jù)其形態(tài)特征和hs序列將其鑒定為啥茨木森(

2、trichodemi a harzumimir ifai)./2菌株的生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果表明，該菌株最適宜在馬鈴普蔗糖瓊脂(psa )培養(yǎng)基上生長(zhǎng)：蔗 糖、醉母膏分別為最佳碳氮源；窗絲艇生長(zhǎng)溫度范用為2830c；最適由5 0 6 q不同光照條件對(duì)該菌產(chǎn)皰影響明顯.對(duì)西 貢猿枯葵病的盆栽昉治試齡結(jié)果表明，肝2菌株對(duì)西貢蕉枯萎病具有|定的防效，其中每隔7d施1次 中2固體苜劑於理的防治 效果最好,在傷根接種60 d后,平均防效達(dá)到74.4%。關(guān)誠(chéng)詞：西貢焦；枯萎?。荒久咕阦萬2生物學(xué)特性；防治效果中圖分類號(hào)：s68& i文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：aidentification and biobgica

3、lcharacteristics of trichodenna stran gz-2,a b tocontrol agoit against saigcm banana fusarim w iltke fan畜gan/ huang srliing2* , fv g an鼠wangqiml z1iang x liqrqh1(1. agricu kuraklolkt guangxi u n iversl,、anil hg cuan”i530005 ch 2 n aiiyaiig n oni al u n k ersik. n anyang 11 enan 47306 l ch im 3 1 i(r

4、uli)bgy r(、eaidi instlule guaiigxi.x(uuliny of.xgricuiuralschices naimhgguai|；xi 530007, ch iia 4. envin)nn tut and plant protect inn inst ch hese a carlany of tmpiail ascience damhou h ahan 571737 ch ha)a listracttrichodetnastiah gr2 s a potml ill bixxwitrol agent again、fuuriin wilof saga】banana th

5、e slraii w as ideiitigril astrr (lumlerna harziimsnriiibam、l inoqiholjg i al 4iam kiisli s aii of the iitrmal liaiimtiinl中acrr ivg ixi of llie rr bomial dna ( its). the bbhgicalchamctermicsof strain gr2wriv studied. the rrsuis lowed iiat tiegmwth mteand conrlbnunber of ii e i)icxonlr) stmiw eiv gist

6、er aiul m orv ii psame(l iin iianthose h oil er n e(l h sugidwand yeast extract we rvheopthnm cahxn mri nt* and n itnigefimminv fr vegetative gnm th and spomlatbn respec live k theoplinun imipeiutli iv form ycvliun gnviand il ial grm bullionwas 28- 30 c. and iir optinun |il vn kita w iis 5. 0-6 0 lh

7、l mui itions had obvuihihu rncvs oil sponihtioiis of the 1)ir contn 1 slm h the irni its of pol experm ent of slm h gr2 igahst saon banana fusariin w ik indirated that the wln)l effect tkey words sa poti banana eusaimn iv ilttruhmastm h / 2 b i l)g r,a i chamcterm is conlin i effects病害是影響西貢蕉生產(chǎn)的主要因素之

8、一。 由香 蕉萎;卷尖鐮他菌古巴?；土?。 oxyononf spcubeiise(e.esmith) snyderet h aiisen 1號(hào)生 理小種引起的枯萎病是一種毀滅性土傳病害-i。 近年來在廣西大部分西貢蕉怩中發(fā)現(xiàn)枯萎病株，并 有逐步蔓延的趨勢(shì)雖然實(shí)行輪作能在一定程 度上遏制枯萎病病情笠延，但輪作對(duì)r人多耕地少收稿日期：2010- 10- 12基金項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部南亞熱作專項(xiàng)(091143)作者簡(jiǎn)介：柯仿鋼(1983-),男.湖北大冶人，碩士研究生,研究 的香蕉種植戶來說還不易推廣。在化學(xué)防治方面. 除苯并喋二晚有一定防效光尚無更有效的防治藥 劑， 且過多使用化學(xué)農(nóng)藥也容易造成環(huán)境污染

9、或 引發(fā)病原菌的抗藥2010年23卷5期方向?yàn)槠渚韵浜Ψ乐蝚為通訊作者.c 1994-2011 china academic journal electronic publis油g sjuse.ah nghfs reseda ntp:?/1534西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)23卷性。 利用生物防治的方法控制土 傳病害是一項(xiàng)很有發(fā)展前景的環(huán)境友好型技術(shù)。h前,我國(guó)對(duì)西貢蕉枯萎病的生物防治研究較少.一些 對(duì)香蕉枯萎病菌具有拈抗作用的生防菌雖被成功分 離，但真正應(yīng)用于生產(chǎn)的較少也。筆者從甘蔗根際 分離篩選出1株生長(zhǎng)速度快、 產(chǎn)泡量大的木霉菌株gz2經(jīng)研究證實(shí)其對(duì)西貢蕉枯萎病菌有較好的防1534西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)23卷生

10、物學(xué)特性及盆栽防治試驗(yàn)進(jìn)行初步研究， 旨在為 進(jìn)一步將該菌應(yīng)用于生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。1材料與方法1. 1供試生防菌株供試生防菌株為木霉菌株g2采用虎紅培養(yǎng) 基稀釋分離法網(wǎng)從甘蔗根際土壤中分離獲得，4 c保存丁馬鈴薯蔗糖晾脂(psa)培養(yǎng)基中。1. 2供試病原菌和培養(yǎng)基西貢蕉枯萎病菌由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究 所分離、純化、鑒定并保存。供試培養(yǎng)基有1力、馬 鈴薯葡萄糖瓊脂(pda)培養(yǎng)基、麥芽糖培養(yǎng)基、查 彼培養(yǎng)基、玉米粉葡萄糖培養(yǎng)基、燕麥培養(yǎng)基。13木霉菌株gz2的鑒定l 3 1形態(tài)鑒定 將純化的木霉菌株在psa平板上28 c黑暗培養(yǎng)，每天觀察菌落的形態(tài)特征 和顏色變化，并廣顯微鏡下觀察分牛劑子梗分

11、枝方 式和他子形態(tài)， 測(cè)量其大小。依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)1刈，進(jìn) 行形態(tài)學(xué)鑒定。l 3 2基因組dna的提取收集pda平板上的 菌絲體，采用劉少華等川的方法提取木霉菌株gz2的基因組dnao操作方法:取0 1 g新鮮菌絲體，在 液氮中研磨成粉末，迅速轉(zhuǎn)入l 5 ml的離心管中， 加入75()u1提取緩沖液,置65 c水浴30 m h室溫 下12 000 ran in離心10 m h取上清液，加入1/10的3 mol/l ka c冰浴2() m in室溫下12 (xx) ran in離心10 m h取上清液,加入等體積的異內(nèi)醇,冰浴20 m in 12 000 r/m in離心1020 m in棄上清;加

12、入400口1肛。及5 u1 rna asq 37 c水浴1 h加入 等體積的酚瓶仿(1：1)顛倒混勻40次;室溫下12 00() r/m h離心10m in取上清液,再加入1 /10 ka q冰浴20m h重復(fù)1次;用2倍體積無水乙醇沉淀20 m in 12 000 r/m h離心10 m in用-20 預(yù)冷的75%乙靜洗滌沉淀3次，室溫干燥510 mi】后加入te溶液溶解沉淀。l3 3 pcr擴(kuò)增及純化測(cè)序 以木霉菌株 附2基 因組dna為模板，擴(kuò)增irs區(qū)的引物，參照周利 等 g 的設(shè)計(jì)，選用ds1 (5-tccgtaggtgaacctgc(ig3)和ns4(5tcctccg (：ttat

13、tgatat(；c3)通用引物。pcr擴(kuò)增體系為20口j其中含10 x p(b buffer 2 pl(ntp 0 5 pj its1 0 6pj its4 0 6 u無菌超純水15 1山模板dna iuitvq前0 2 “ l反應(yīng)程序?yàn)椋?c預(yù)變性3 in h 94變性55 s 56 c退火50 72 c延伸im in 32個(gè)循環(huán);72 延伸7in ho擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳,以num碎外叫000作為分子用標(biāo)準(zhǔn),稗咤1 1994-20 llcnina acaaernicjoumalelectronic下電泳30m k電泳結(jié)果用紫外檢測(cè)儀觀察，置于 圖像必理儀中處理并保存。目的片段用und

14、10柱式膠回收試劑盒回收純化純化樣品送上海生工 生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測(cè)序。l 3 4數(shù)據(jù)分析 序列經(jīng)bhedii軟件分析和手工 校正后,用ncbi的blast程序?qū)y(cè)得序列與gen-bank中已有菌株的ets序列進(jìn)行同源性比對(duì)。14生物學(xué)特性測(cè)定l 4 1不同培養(yǎng)基對(duì)菌株gz-2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的 影響 用打孔器打取菌株 呼2菌碟(點(diǎn)徑8 mm)置 丁psa、pda、玉米粉培養(yǎng)基、麥芽糖培養(yǎng)基、查彼培 養(yǎng)基、燕麥培養(yǎng)基平板中央,在28 c下恒溫培養(yǎng)，分 別于培養(yǎng)24 48 h后采用十字交叉法測(cè)定菌落交 徑，72 h后在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10ml無菌水，用毛 筆將他子刷下，紗布過濾后用血球計(jì)數(shù)板

15、計(jì)算產(chǎn)他 量，每處理重復(fù)3次。l 4 2不同碳源對(duì)菌株gk2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的影 響以杳彼培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別以等屬麥芽 糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、廿露糖、阿拉伯糖、淀粉、木 糖醉、葡萄糖等9種碳源代替基本培養(yǎng)基中的蔗祖 以無碳源的做對(duì)照， 配制成含不同碳源的培養(yǎng)基，培 養(yǎng)條件、菌絲生長(zhǎng)量和產(chǎn)泡量測(cè)定方法同上。l 4 3不同乳源對(duì)菌株gk菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的影 響以查彼培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別以等量蛋白 豚、胱氨酸、硫酸筱、天冬酸、尿索、硝酸鉀、氯化筱、 酵母膏、谷笈酸、硝酸筱等1()種頷源代替基本培養(yǎng) 基中的硝酸鉀，以無氮源的做對(duì)照,培養(yǎng)條件、菌絲 生長(zhǎng)量和產(chǎn)泡量測(cè)定方法同上。l 4 4不同碳來

16、比對(duì)菌株gz-2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的 影響 以查彼培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，分別按碳：氮 (蔗糖：酵母膏質(zhì)量比)為4：1、4：24：朵4：& 4：1“ 4：12的比例配制培養(yǎng)基， 培養(yǎng)條件、 菌絲生長(zhǎng)量和 產(chǎn)泡量測(cè)定方法同上。l 4 5不同溫度對(duì)菌株gk菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的影 響 分別設(shè)置工1(1 6 2。2、2&3。3z3140 溫度梯度處理， 以psa作培養(yǎng)基，菌絲生長(zhǎng)量和產(chǎn) 施量測(cè)定方法同上。l 4 6不同ph對(duì)菌株8才2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)抱的影 響 用lmol/l的hc1和1 mol/l的nd)h分別調(diào) 節(jié)is培養(yǎng)基初始ph為4 a 5 (1 6 (1 7. (1 8 (19 (x 1。i

17、l q共8個(gè)處理,培養(yǎng)條件、菌絲生長(zhǎng)量和 產(chǎn)胞量測(cè)定方法同上。l 4 7不同光照對(duì)菌株g2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)花的影 響 用直徑為8 mm的打孔器打取培養(yǎng)3 d的菌株gz-2菌碟置于psa培養(yǎng)基平板中央，分別設(shè)置黑bublis嘛圈蟒照州航耳翻籬.1前楞意培不出盛5期柯仿鋼等：西貢焦枯菱病生防木衍菌株冒萬2的鑒定及生物學(xué)特性研究1535m】）和12 h黑暗交替、全光照共3個(gè)處理。培養(yǎng)條 件、菌絲生長(zhǎng)量和產(chǎn)他量測(cè)定方法同上。l 4 8不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)木霉菌株gir2產(chǎn)花的影響用宜徑為8mm的打孔器打取培養(yǎng)3 d的菌株gz-2菌碟置于psx平板中央,從培養(yǎng)第24 h起每隔24 h測(cè)量產(chǎn)泡星，測(cè)至第8天。產(chǎn)劑量

18、測(cè)定方法同上。15木霉菌株gv的盆栽防治試驗(yàn)l 5 1木霉菌株叼2及西貢蕉枯萎病菌匏子懸浮 液的制備將西貢蕉枯萎病菌和生防用株長(zhǎng)才2分 別接種psa平板,培養(yǎng)滿皿后，用打孔器（8 mm）沿 菌落邊緣打孔.接種到裝有200ml培養(yǎng)液的5（x） ml三角瓶中，28c靜止培養(yǎng)7 d后,分別以無菌水 稀釋，得濃度為io,個(gè)抱子/n】l的胞子懸浮液.放入4c冰箱中備用。l 5 2木霉菌固體菌劑的制作 木售渣和水按定 量比例（1：2）混合，充分混勻，裝入布袋121c高壓 滅菌1h自然冷卻后用作培養(yǎng)料。將抱子含量為d個(gè)/g的木霉菌抱子懸浮液接種于培養(yǎng)料中，蓋 塑料膜室溫培養(yǎng)7 d制備成泡子含量107個(gè)/g的

19、木 霉菌固體制劑。l 5 3盆栽試驗(yàn)設(shè)計(jì)傷根后在西貢蕉苗根圍 施gr2木霉菌劑200鳥共1次；傷根后在西貢蕉 苗根圍施gz2木霉菌劑200 g每隔7 d再接種gz-2木霉菌劑200 g共3次。西貢蕉苗先于濃度為106/ml的木霉菌株gz2泡子懸浮液中浸根10 m in然后定植，再傷根接種病菌濃度為io,扁l的 泡子懸浮液灌根30ml 0西貢蕉苗先于木霉菌株gz2抱子懸浮液中浸根loniil每隔7 d再接種木 霉菌株泡子懸浮液灌根30 ml共3次?？莆髫?蕉苗，傷根后用病菌泡子懸浮液灌根30 ml每隔7ck西貢蕉苗傷根后用病菌抱懸浮液灌根30nlckl西貢蕉苗施200 g木薯培養(yǎng)料，定植傷根后

20、用病菌他子懸浮液灌根30 ml本試驗(yàn)在廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所玻璃網(wǎng)u光溫室內(nèi)進(jìn)行。塑料盆高22嘰直徑20嘰fl然土。移栽的西貢蕉苗選擇葉片數(shù)為5 6片、長(zhǎng)勢(shì) 一致的營(yíng)養(yǎng)杯蕉苗，每隔23 d淋水1次。所有處 理均設(shè)3次重復(fù)，每重:復(fù)5株蕉苗。當(dāng)對(duì)照西貢蕉 定植第3（） d后進(jìn)行第1次調(diào)查（2009年8月14 ii）,以后每隔15 d調(diào)杳1次。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)： 外觀無可見癥狀;1級(jí)：植株下部25%以下葉片黃 萎下垂；3級(jí)：植株下部26%50%以下葉片黃萎 下垂；5級(jí):植株下部51% 75%以下葉片黃萎下 垂;7級(jí):植株下部75%以上葉片黃萎下垂;9級(jí):植 株全部總?cè)~片黃萎下垂，枯萎死亡。防

21、效計(jì)算公式為：垢檔護(hù)和_2（病級(jí)株數(shù) x 代表數(shù)值） 河門力國(guó)一株數(shù)總和 x 最高級(jí)代表值 相對(duì)防效（ ）=對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù)v lm對(duì)照區(qū)病情照數(shù) ”不1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用dps 6 55軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。2結(jié)果與分析2 1木霉菌株gz2的形態(tài)特征菌株g丁2在psa平板上生長(zhǎng)快.產(chǎn)他量大，菌 落初期白色,老熟時(shí)暗綠色， 產(chǎn)胞區(qū)呈環(huán)狀,逐漸由 淺綠色變成暗綠色.發(fā)達(dá)的白色菌絲體突起成簇。 菌落背面黃色，有略微土腥氣味。分生他子梗從菌 絲的側(cè)枝上長(zhǎng)出,主分枝呈樹狀,次級(jí)分枝多，常2布go由thdddaebpbaxbknnj伊sbdtm

22、rmptei(xb57sq9q脈加由ttbdntaefdqm刊-tricmrn petefsnthcfix切mpsubee供圓四9,如n由na/saxtmng/什39?可,.w ith the rehted fmgus (lerk wl fim g eiiltank database1敗仞削飛?卅髓academic journal electronic publishing house. all rights reserved, http: /ki.nel圖1哈茨木零g2菌株rdna its pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖fig 1 e lectn|)hoivt()gniii ofp(j pniduct

23、sof jjna fisof truh a!erkgookm苗5皿2s勒ttmsmapaun(gu98313g2(gu1ssz9jmrsmhriarunfafiwiit3cd91536西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)23卷 1994-2011 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved, http:/圖2基于rrs序列同源性的酎2菌株系統(tǒng)發(fā)育樹f g 2 hiykigenetir tire basrl on ts secjience hm okigy of si in h gr21536西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)23卷 1994

24、-2011 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved, http:/4枝1組，呈宜角伸出，整個(gè)分枝系統(tǒng)呈金字塔 狀。瓶頸短,基部變細(xì)， 中間膨大,以直角伸出， 終極 瓶頸長(zhǎng)而細(xì)，粒頸近似輪狀排列。分生泡子球形、近 球形或卵圓形，大小為2 63 5（ 3 3） pm x 2 23 2（ 2 6） mmo2.21rs序列分析及種類鑒定木霉菌株gz-2的基因組dna經(jīng)pcr擴(kuò)增，電 泳檢測(cè)結(jié)果得到大小約500所的目的條帶（圖1）。 通過序列分析得知，該菌株的n、s序列長(zhǎng)度為592!）p（genban

25、k登錄號(hào):gu 196282）,在genbank中與 已有的相關(guān)菌株的its序列進(jìn)行同源性比較，結(jié)果 表明菌株 的2序列與trich（iin a harziiiniunr ifai的its序列具有99%的最大同源性。用軟件mega4 0將菌株gz-2與來自genbank的13株真菌一起構(gòu) 建基丁n、s序列的系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示gh2菌株 與t. harzianion（genbank登錄 號(hào)：af194011）出現(xiàn) 在同一最小分支（圖2）,表明gz2菌株與t. harzia-的親緣關(guān)系最近。結(jié)合該菌株的形態(tài)特征，將gz2菌株鑒定為哈茨木霉（t. h arzianim）。表1不同培養(yǎng)基對(duì)菌株23不

26、同培養(yǎng)基對(duì)菌株gz-2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影 響從表1可知，菌株/2在psa、pda上菌落也 徑無差異，但在1na上產(chǎn)他量最多；在查彼培養(yǎng)基 上雖然菌絲生k較psa、pda快，但產(chǎn)抱量:較少；在 玉米培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較燕麥培養(yǎng)基快但菌絲稀 疏;在麥芽糖培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最慢且稀疏?？梢?，6種培養(yǎng)基中以p&最適合附2的生長(zhǎng)和產(chǎn)他而 麥芽糖、玉米、燕麥培養(yǎng)基不利丁gz2的培養(yǎng)。24不同碳源對(duì)菌株 陽2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響菌株g/2在9種碳源中均能正常生長(zhǎng)（表2）,其中以葡萄糖為碳源時(shí)菌絲生長(zhǎng)最快.最適合gz-2的生長(zhǎng):蔗糖和葡萄糖為碳源時(shí)最適產(chǎn)胞;木糖醇為 碳源時(shí)生長(zhǎng)速度最慢且產(chǎn)的量較少。2 5

27、不同氮源對(duì)菌株弘2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響菌株 呼2在10種氮源中均能生長(zhǎng) （表3） ,其中 在以酵母膏、蛋白陳、胱雙酸為頷源的培養(yǎng)基i-.,菌 株gz2的生長(zhǎng)速度最快,而酵母膏最適產(chǎn)他,以胱 如酸為氮源時(shí)產(chǎn)他量:與在蛋白陳上培養(yǎng)的無差異。臀2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響培養(yǎng)基m ed ini菌落宜徑(n ) cohny dimieter產(chǎn)胞員(x l廳個(gè)hil) n oofb27 3dcd碳源_caiiiuti sxiive菌落直徑(on) cobny d bneter_產(chǎn)抱量(x 16個(gè)al )no of (xxi il ii pnmluced2ah48 h麥芽橋m altose1 5aba5 8ab

28、mabc% 5b “ibc-sucrosel 8ala6 4alib為.7m孔弗lactose2 0a6 3alabm 3abc海藻和f t ivhidw1. 611a5 3mbe2z o(r11露和？m annil”l 8ali6 2al)inoel 7ali5. 6b(xl bc29. 3i)b淀粉stnn-h1. 6；ilvs 6alxtlai：27. sixbc木糖醇xylitd1 8ali5 0(ic15. 7d命萄糖glucosc1 8 al a6 6a37. 3m無碳源caiiioirfn-el 7ala6 oalxa bc7. 4fr：table 1 eflecte of di

29、flmen t cu 111 nil m e(l u on mycelium gmvlh and spotulation of stnii) gr2注:表中同列數(shù)據(jù)后不同大、小寫字母分別衰示在羯水平下的差異顯著惶下同。note i he(i|)itd and snail letis ii the sanekinn ii13)ifi-aiit(iifleirnce at (1 ()1 and () (15 level the sane as ilh s表2不同碳源對(duì)菌株gk菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響tab卜2 efpcts of cl ifferent caibon sources on m jvel

30、im gmw， and om lition of straii gr25期柯仿鋼等：西貢蕉枯萎病生防木標(biāo)菌株g萬2的鑒定及生物學(xué)特性研究15371994-2011 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved, http:/2. 6不同碳氮比對(duì)菌株g丁2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響菌株gz-2在6種不同碳氮比的營(yíng)養(yǎng)條件下均 能生長(zhǎng)(表4),其中以碳氮比為4：1時(shí)菌絲生長(zhǎng)速 度最快且產(chǎn)的量最大，最適合gz-2的生長(zhǎng);其他5表4不同碳氮比對(duì)菌株g2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)抱的影響table 4 effects of ca

31、iix)nonitn)gen mtio onmyadlm growth and s|mnihti(ni ofstrah pr 2碳氮比(-arf)()ir n ilroprn - rati)菌落直徑(m ) colony dianeter產(chǎn)抱量(x 1五個(gè)anl)no ofcon il it piimliketl24 h48 hw 14 5m9 0a151 6aaw 24 oia9 0a59. 8i)b4 44 0(bc4： 102 5ijj5 9cc31 icbc4： 122 4ib5. 7dd2k 3cc表5不同溫度對(duì)菌株酎2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響種不同碳氮比均不及4 1時(shí)的菌絲生長(zhǎng)速度和產(chǎn)

32、泡j=l甲,。27不同培養(yǎng)溫度對(duì)菌株gv菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的 影響由表5可知，菌株gk的菌絲生長(zhǎng)和胞子產(chǎn)生 的溫度范圍為1535 c,最適溫度為2830 c,在 溫度低于10 或高于4() c下菌絲均不能生長(zhǎng)。2 8不同出值對(duì)菌株g丁2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)抱的影響由表6可知， 菌株gz-2在psa培養(yǎng)基上， 出4 01l0范圍內(nèi)均能生長(zhǎng),其中以ph 5 0- 6 0最 適合gh2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)他,在偏酸條件下菌絲生長(zhǎng) 較快,產(chǎn)他量較多。 當(dāng)出5。時(shí)，48h菌落自徑為9 0 g.3 d產(chǎn)泡達(dá)208 oxm個(gè)/mb2 9不同光照條件對(duì)菌株內(nèi)h2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)抱的 影響菌株g丁2菌絲生長(zhǎng)對(duì)不同光照表現(xiàn)不一致。表6不

33、同ph值對(duì)菌株酎2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響表3不同氮源對(duì)菌株g=2菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)胞的影響tal)le 3 e fleets of n itmgen 7iire onmycelian gnw th in(l sponi lat irm of straii gr2氟源n itmgen smi rw菌落直徑(m) cohiy dunricr產(chǎn)抱量(x 106個(gè)anl)n o of con rlkip nmhiced24 h48 h氯化能anmi miiin hritk-x 2,mc7 oimb1. ohc谷氨酸g kitrni ir acid1tgf5 6(b)24 4ale硫酸.amm on iinhi

34、ifalc1 51)b6 7(4k：15. 9(iw酵母浸仔y east extract4. oaa9 on49. la硝酸飯aim on km n irate2 7(1(cde6 91mb5. oghfg天冬酸a spa it r acirl2 7dm：d7 obcb25 lalc尿素u ma2 2四,6 8ab9 on% 3i)b蛋白陳peplai4. 2aa9 ()a3& 1i)b硝酸鉀potass iin n itmle2 6d：de7 4i)b27 8cc無械源x irogeirfive2 5e8)e6l2(ld9 6fgeklitioti of stnih gr2tal.t

35、 6effects of different|4i vakies on m y(xkliingnu th aiul溫度(c )菌落直徑(ni ) coun dianeter產(chǎn)泡量(x l伊個(gè)anl)xni hlmiof stmiigr2產(chǎn)抱量個(gè)/ml)ttin penifti iv124 h48 hno of c()n il ii p bmhiml出值菌 落 直 徑(an：)(:。hmv i im eter(*111 i v hlanqof50(u)oeeofim i v 12ah48 hconilia pnxlu100 9(l)l oke()&4. 04 41)( ab9. oaa9

36、1 oh：152 1(c4. &1d10. le5. 04 9ax9. oaa208 ()a202 4(c5. 21d17 4 ide6 04 7alab9. oaa195 ()a254 4157 5b(bc2a 3(c7. 04 4cb9. oaa155 8i)b2a5 dibr 2 jab61 aim& 02 6dc7. 5bb71. 5(d)306 2ia9 0a89 a9. 02 6dc7. 4bb53 5ee322 6(6 6c20 id)iq 0l 44)4. 2c47 9ee35402 7c0(u)4. (kidoee1. 5 fof11. 01 id)2 4q)

37、5 6ftable 5 efleets of different tenpemunes on mycelinn gnv th and1538西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)23卷1994-2011 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved. http:/圖3不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株 酎2產(chǎn)胞量的影響fg 3 effects of hcubalitf) line 2菌株對(duì) 西貢蕉枯萎病的防治效果達(dá)到74 4%;處理1在傷 根接種30d后防效達(dá)到67 8%,但60 d后幾乎沒 有防效；處理& 4在傷根接種30d后均

38、具有一定效 果，至60 d后失去防效。3結(jié)論與討論經(jīng)對(duì)生防菌株g2的形態(tài)及rrs idna序列分 析，將該菌株鑒定為哈茨木霉(trithixlain a harzitr mon) o th aiigave l等”報(bào)道哈茨木毒對(duì)4號(hào)生理 小種引起的香蕉枯萎病的防效為48% 51 %,前 人研究哈茨木霉防治香蕉枯萎病效果明顯。生物學(xué)特性研究表明，菌株長(zhǎng)才2在6種培養(yǎng)基 上均能生長(zhǎng)并產(chǎn)他，其中以在psa培養(yǎng)基上菌絲生 長(zhǎng)較快、產(chǎn)他量最多，與前人研究結(jié)果基本一致?川，pda培養(yǎng)基次之。利用適合的碳氮比組合培養(yǎng)基 更有利哈茨木客商絲生長(zhǎng)和抱子產(chǎn)生。因此通 過對(duì)菌株生物學(xué)特性的研究,可以掌握適合該 菌株生

39、長(zhǎng)和產(chǎn)泡的最佳條件， 以獲得足夠的繁殖體 來進(jìn)行西貢蕉枯萎病防治。本試驗(yàn)結(jié)果表明，蔗糖和葡萄糖可以被菌株 的2很好地利用，這與其他研究結(jié)果不一致i*。不 同的雙源時(shí)曲絲生長(zhǎng)和他子產(chǎn)生的影響表現(xiàn)也不 同。 以酵母膏為氮源最適合g冠的生長(zhǎng),且產(chǎn)他最 最大;在以蛋白豚為氮源的培養(yǎng)基上，菌株&萬2生 長(zhǎng)速度快、產(chǎn)抱量大，這與其他多數(shù)研究結(jié)果一 致斯2菌株對(duì)不同碳舞源的利用有差異，說 明該的株對(duì)；:v養(yǎng)有一定的選擇性,同時(shí)也表明不i-i菌株之間時(shí)甘養(yǎng)的選擇有差異,這為該菌株與其他 菌株混合使用提供了理論基礎(chǔ)io菌株gz2以碳氮比為4：1時(shí)最適合其生長(zhǎng)且 產(chǎn)泡量最大；菌落生長(zhǎng)和他子產(chǎn)生的適宜溫度為

40、15 35 c最適溫度為28 30 c這與紀(jì)明山等?叫 的研究結(jié)果基本一致：當(dāng)溫度超出最適范限時(shí).溫度 變化對(duì)菌株g萬2生長(zhǎng)fppouse/q占ix國(guó)更世tabb 7 elects of d iflerent 1 jph t cmd i ion s on m ycelun gnwiand sponihtion of strain gr2光照條件_l rht amdihon菌落fl徑(ni) cobnyeasp hlex平均防效(% )a venigr con im 1effect10 29ed67. 8bbq 63bb32hb0 93 (1. 5bb20 (mh95 9a(1 16(83 2a

41、tt 24u)74. 4a3(1 69 d：21 1(：d(1 87aa9 9 cbel 0040 6kl：31 4cc：(1 90aa7 6h：ft 97bb50 78bb11 2b 8 cem lnl effects d straii彩2 a即13 ku sarun x ill of sanofi banana5期柯仿鋼等：西貢焦枯萎病生防木行菌株42的鑒定及生物學(xué)特性研究1539 1994-2011 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved, http:/影響明顯。因此，在利用菌株gz2

42、防治西貢蕉枯萎病時(shí)，必須考慮生態(tài)環(huán)境與該 菌生長(zhǎng)溫度的適應(yīng)性， 以期更好地發(fā)揮作用。菌株gir2在 出5 0 6 0時(shí)產(chǎn)他量最大且菌落生長(zhǎng)快。前人研究報(bào)道在偏酸條件下木霉菌菌落生長(zhǎng)較快，產(chǎn)他量較多關(guān)于光照可以促使許多木霉菌株 的產(chǎn)胞量增大已有很多研究，本研究結(jié)果也證 實(shí)了前人的報(bào)道,持續(xù)光照處理中,該菌株的他子產(chǎn) 量:比黑暗處理高3倍多，而3種光照處理菌落生長(zhǎng) 速度無明顯差異。土壤中含有豐富的微生物資源，近年來許多學(xué) 者成功地從土壤中分離到一些對(duì)香蕉枯萎病具有拮 抗作用的真菌.、細(xì)菌,包括哈茨木霉、鏈霉偏.、熒光假 單抱菌、枯草芽泡桿菌、綠膿桿菌等,而且取得一定 的效果|劉。本研究從甘蔗根際分

43、離的菌株.采 用每隔7 d施1次該固體菌劑處理對(duì)西貢蕉枯萎病 的防治效果最佳，在傷根接種60 d后，平均防效達(dá) 到74 4%,說明木霉防治西貢蕉枯萎病具有廣闊應(yīng) 用前景,本試驗(yàn)對(duì)木霉菌株g萬2的生物學(xué)特性進(jìn)行了 初步研究.為進(jìn)一步深入研究該菌株的發(fā)酵工藝、貯 運(yùn)條件、劑型改進(jìn)及提高防治效果提供理論依據(jù)。試驗(yàn)選擇的兒種碳氮源菌絲均能夠正常生長(zhǎng)，且產(chǎn) 他帚大，但如果能找到有利于菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)泡量更 大的匚農(nóng)、 業(yè)廢棄物作為碳氮源培養(yǎng)材料.將更利廣 該防治技術(shù)在生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用。目前,西貢蕉生 產(chǎn)已經(jīng)進(jìn)入快速擴(kuò)展階段.病害使西貢蕉生產(chǎn)面臨 巨大威帆在當(dāng)前沒有有效化學(xué)藥劑防治的情況下，加強(qiáng)生物防治勢(shì)在必

44、行。 土壤是多種微生物的共生 場(chǎng)聽選擇能共生并對(duì)病原菌具有拮抗作用的微生 物.或?qū)⑸谰c抗病品種相結(jié)合用了防治西貢蕉 枯萎病12”,應(yīng)用前景將更為廣闊。參考文獻(xiàn)：i”王水均,h勇輝.梁賽英.香蕉抗枯萎病育種研究進(jìn)展j.中國(guó) 熱帶農(nóng)業(yè)，2007( 1): 26- 27.(2應(yīng)曉敏.陳 弟.鄭服從.尖鐮抱枯菱病生物防治研究進(jìn)展j.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008 39(2): 172- 1783莫賤友,郭堂勛.李焜華.廣西燕類枯菱病發(fā)生及為害情況調(diào)查 初報(bào)i j.中國(guó)南方果樹.2006 35(3): 53- 54.4吳代東，李小泉,韋華芳，等.粉蕉兩年兩造高效底培及其枯萎病 防控技術(shù)研究jl廣西農(nóng)業(yè)科學(xué).2(x)9. 40( 8): 1051-1054.5鄒 瑜.林貴美.牟海瓦等.廣西粉蕉生產(chǎn)存在