魏氏梭菌毒素酶聯(lián)免疫分析

1、魏氏梭菌毒素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96t使用目的：木試劑盒用于測定相關(guān)樣木屮魏氏梭菌毒素表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魏氏梭菌毒素表達(dá)。用純化的魏氏梭菌毒素抗體包被 微孔板，制成固相抗體，可與樣品屮魏氏梭菌毒素相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他 成分后再與hrp標(biāo)記的魏氏梭菌毒索抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗休復(fù)合物，經(jīng)過徹 底洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酣的催化卜轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用卜轉(zhuǎn)化成 最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（od值），與cutoff值相比較，從而 判定標(biāo)本中魏氏梭菌毒素的存在否。試劑盒組成130倍濃

2、縮洗滌液20ml x 1 瓶7終止液6mlxl 瓶2酶標(biāo)試劑6ml x 1 瓶8陽性對(duì)照0.5ml xi 瓶3酶標(biāo)包被板12孔x8條9陰性對(duì)照0.5ml xi 瓶4樣品稀釋液6ml x 1 瓶10說明書1份5顯色劑a液6mlxl 瓶11封板膜2張6顯色劑b液6inlx 1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行捉取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20°c保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2. 不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。操作步驟1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔

3、、空白對(duì)照1 孑l （空口對(duì)照孔不加樣詁及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔屮加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50m1o然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液40卩1,然后再加待測樣品10plo加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3. 溫育：用封板膜封板后k37°c溫育30分鐘。4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸憎水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50pl,空口孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑

4、a50pl,再加入顯色劑b50yl,輕輕震蕩混勻，37°c避光顯色 15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩1，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37°c反應(yīng)30分鐘計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值d.oo；陰性對(duì)照平均值s0.10 臨界值（cutoff）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品0。值 臨界值（cutoff）者為魏氏梭菌毒素陰性 陽性判定:樣品od值彳臨界值（cutoff）者為魏氏梭菌毒素陽性o注意事項(xiàng)1. 操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)紐分不得混川。2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)品析岀，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5. 底物請(qǐng)避光保存。6. 試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm7. 所有樣品，洗滌