魏氏梭菌毒素酶聯(lián)免疫分析

1、魏氏梭菌毒素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96t使用目的：木試劑盒用于測定相關樣木屮魏氏梭菌毒素表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魏氏梭菌毒素表達。用純化的魏氏梭菌毒素抗體包被 微孔板，制成固相抗體，可與樣品屮魏氏梭菌毒素相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他 成分后再與hrp標記的魏氏梭菌毒索抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標抗休復合物，經(jīng)過徹 底洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酣的催化卜轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用卜轉(zhuǎn)化成 最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），與cutoff值相比較，從而 判定標本中魏氏梭菌毒素的存在否。試劑盒組成130倍濃

2、縮洗滌液20ml x 1 瓶7終止液6mlxl 瓶2酶標試劑6ml x 1 瓶8陽性對照0.5ml xi 瓶3酶標包被板12孔x8條9陰性對照0.5ml xi 瓶4樣品稀釋液6ml x 1 瓶10說明書1份5顯色劑a液6mlxl 瓶11封板膜2張6顯色劑b液6inlx 1/瓶12密封袋1個標本要求1. 標本采集后盡早進行捉取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于20°c保存，但應避免反復凍融2. 不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。操作步驟1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔

3、、空白對照1 孑l （空口對照孔不加樣詁及酶標試劑，其余各步操作相同）2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔屮加入陰性對照、陽性對照50m1o然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液40卩1,然后再加待測樣品10plo加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3. 溫育：用封板膜封板后k37°c溫育30分鐘。4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸憎水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50pl,空口孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑

4、a50pl,再加入顯色劑b50yl,輕輕震蕩混勻，37°c避光顯色 15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩1，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):準備試劑，樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品，37°c反應30分鐘計算和結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值d.oo；陰性對照平均值s0.10 臨界值（cutoff）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品0。值 臨界值（cutoff）者為魏氏梭菌毒素陰性 陽性判定:樣品od值彳臨界值（cutoff）者為魏氏梭菌毒素陽性o注意事項1. 操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號紐分不得混川。2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。3. 濃洗滌液可能會有結(jié)品析岀，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5. 底物請避光保存。6. 試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm7. 所有樣品，洗滌