乙肝治療性疫苗探究現(xiàn)狀

1、乙肝治療性疫苗探究現(xiàn)狀【關(guān)鍵詞】治療性疫苗；乙肝；免疫應(yīng)答治療性疫苗是近年發(fā)展起來的免疫治療新概念，旨在打破 機(jī)體的免疫耐受，提高機(jī)體特異性免疫應(yīng)答，清除病原體或 異常細(xì)胞，使疾病得以治愈。治療性疫苗主要應(yīng)用于病毒感 染、腫瘤等疾病的治療。治療性乙肝疫苗的應(yīng)用針對慢性乙 肝患者或hbv攜帶者，可由高純度和高含量的抗原和免疫佐 劑組成增強(qiáng)其免疫原性，并通過不同途徑呈遞乙肝抗原，打 破機(jī)體的免疫耐受，有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，達(dá)到清除乙肝病毒 的目的。乙肝治療性疫苗是治療慢性乙肝的重要措施，本文 就其研究進(jìn)展作一綜述。1治療性疫苗的研制1.1蛋白疫苗蛋白質(zhì)抗原是最重要的一類抗原，hbv 中多以衣殼蛋白和h

2、bc抗原設(shè)計(jì)為主；其中前s蛋白有很高 的免疫原性，可以強(qiáng)化同存的s蛋白。1. 1. 1基因工程蛋白疫苗 包括hbsag或hbsag、 pre si、pre s2、s蛋白任一組合構(gòu)成的亞單位疫苗。研 究表明14),分別應(yīng)用商業(yè)化的pre s2/s疫苗(genhevac bro, pasteur merieux)或 s 疫苗(recombivaxro, merck) 對chb病人進(jìn)行治療，證實(shí)亞單位疫苗能夠減低hbv的復(fù)制, 但療效仍有限。pasteur merieux的gen hevacb疫苗（含 hbsag和pre s2蛋白）曾被單用或者和干擾素序貫用于治療 慢性乙型肝炎，患者血清hbv dn

3、a明顯下降者和陰轉(zhuǎn)者共 達(dá)44%50%。但genhevac b接種不能有效降低免疫耐受兒 童血清中病毒dna拷貝數(shù)5，且無清除或降低肝細(xì)胞內(nèi) cccdna含量的證據(jù)，因此，genhevac b的治療效果仍不確 定。此外，增加pres成分的新型疫苗hepacare雖提高了應(yīng) 答率和增強(qiáng)了預(yù)防效果，仍不是理想的治療性疫苗。1. 1. 2 免疫原性復(fù)合物（immunogenic complex, ic） 疫苗對hbsag的免疫耐受是引起chb發(fā)病的重要原因，多 數(shù)疫苗通過提高其抗原的免疫原性而使機(jī)體易于發(fā)生免疫 應(yīng)答，發(fā)揮其治療作用。聞?dòng)衩返?）驗(yàn)質(zhì)的免疫復(fù)合物 型疫苗是通過改變對hbsag的呈遞方

4、式來誘生有效的免疫應(yīng) 答，消除免疫耐受性。應(yīng)用足量hbsag和高效價(jià)抗人hbig 復(fù)合物對慢性乙型肝炎患者進(jìn)行治療，效果滿意，但能否有 效降低、清除肝細(xì)胞內(nèi)cccdna,達(dá)到徹底清除肝細(xì)胞內(nèi)病毒 的目的尚待證實(shí)。此類疫苗也存在不足，即對細(xì)胞免疫應(yīng)答 的激發(fā)遠(yuǎn)高于對體液免疫應(yīng)答的激發(fā)，因此需要進(jìn)一步優(yōu) 化。1. 1.3表位疫苗由于蛋白質(zhì)抗原不是通過完整的分 子發(fā)揮作用的，抗原分子表位的研究是近年來新的研究趨勢 有效的保護(hù)取決于一組表位的組合與搭配。通過對蛋白 質(zhì)抗原的b細(xì)胞表位、th細(xì)胞表位、ctl細(xì)胞表位、nk細(xì)胞 表位及mhc限制位等有利于免疫識(shí)別表位的深入研究，為設(shè) 計(jì)新一代高效、高特異性

5、疫苗奠定了基礎(chǔ)。針對ctl表位的 脂肽疫苗：此種疫苗的理論基礎(chǔ)是基于抗原分子表位水平的 研究。由于蛋白質(zhì)抗原通過表位來體現(xiàn)其免疫特異性，有效 的保護(hù)性免疫有賴于一組表位的搭配與組合。已知hbcag中 的多肽18 27是hla a2組織相容性抗原，可被ctl識(shí)別 而產(chǎn)生免疫應(yīng)答。將其和th細(xì)胞多肽表位（破傷風(fēng)類毒素的 t細(xì)胞表位肽，tt830 843）以及脂質(zhì)分子共價(jià)結(jié)合后制成了 theradign hbv疫苗，提高了 ctl多肽的免疫原性，誘導(dǎo)產(chǎn) 生特異性ctl而有清除hbv的作用。有報(bào)道（7采用cy21899 t細(xì)胞表位疫苗治療慢性乙肝患者，發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)產(chǎn)生的ctl 應(yīng)答明顯低于急性hbv感染

6、者所測得的結(jié)果，這種低水平的 ctl應(yīng)答是不能清除病毒的。此外，這種疫苗不僅裂解內(nèi)源 性抗原肽，同時(shí)也裂解感染的肝細(xì)胞，若應(yīng)答過強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致肝 功能惡化，且它具有嚴(yán)格的hla a2限制性，應(yīng)用范圍有限。 多表位疫苗：由于mhc限制性及毒株間抗原性差異，單表位 疫苗的保護(hù)作用和應(yīng)答人群均十分有限，多表位疫苗，尤其 是高度保守、免疫原性強(qiáng)、人群應(yīng)答范圍廣的，含有多個(gè)結(jié) 構(gòu)蛋白或病原體表位的多特異性表位疫苗可能是具有實(shí)用 價(jià)值的短肽疫苗研究關(guān)鍵dshioka等（8）研究發(fā)現(xiàn),hbv/hiv 多表位基因疫苗能同時(shí)激活各表位特異性ctl應(yīng)答，并增強(qiáng) 部分表位免疫原性，顯示了多表位疫苗研究的可行性。1.2核酸

7、疫苗dna疫苗是20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的新的 疫苗形式，是一種含抗原基因的表達(dá)質(zhì)粒，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng) 答為主的免疫應(yīng)答，尤其是tcl應(yīng)答，在治療性疫苗研究中 占重要位置。一般認(rèn)為，dna疫苗在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)抗原并反 復(fù)刺激免疫活性細(xì)胞，是其誘導(dǎo)強(qiáng)烈免疫應(yīng)答的關(guān)鍵，細(xì)胞 內(nèi)、尤其局部apcs細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的抗原通過mhc i類途徑提 呈后誘導(dǎo)thl應(yīng)答，激發(fā)ctl應(yīng)答為主的細(xì)胞應(yīng)答。研究表 明（8）, dna疫苗可誘發(fā)以igg2a型抗體為主的體液應(yīng)答 （iggl/igg2a&lt；0. 3）和ctl應(yīng)答,呈thl型應(yīng)答，抗體滴 度高，維持時(shí)間長。此外，dna疫苗構(gòu)建簡單、制備方便， 且可采用多種方

8、式接種，如肌注、口服和黏膜免疫等，并均 能誘導(dǎo)thl極化，如口服接種prc/cmv hbs也能打破hbsag 轉(zhuǎn)基因小鼠耐受狀態(tài)，激發(fā)thl型應(yīng)答，誘導(dǎo)高活性ctls和 高滴度igg2抗體，降低肝組織hbsag mrna及hbsag水平, 表現(xiàn)出抑制肝細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制和清除病毒cccdna作用9, 10）。因此，dna疫苗是治療性疫苗研究重點(diǎn)之一。dna疫苗 的制備包括：（1）編碼某種蛋白質(zhì)抗原的基因片段的擴(kuò)增， 包括hbsag、hbcag和hbeag等基因均可作為目的基因；（2） 插入真核細(xì)胞表達(dá)載體以構(gòu)建重組質(zhì)粒，可供插入目的基因 的載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體和純化的裸dna載 體。

9、機(jī)體接種疫苗后，宿主細(xì)胞攝取質(zhì)粒并表達(dá)抗原蛋白， 誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。1.2. 1單價(jià)核酸疫苗治療性疫苗是通過激活特異性 ctl應(yīng)答來清除chb患者體內(nèi)的hbv,所以目前研究主要集 中在與激發(fā)ctl活性相關(guān)的hbs、presl. pres2和hbc基因 上。davis等(11在小鼠中應(yīng)用含編碼hbsag和pres s 基因和真核細(xì)胞啟動(dòng)子的重組質(zhì)粒dna(裸dna疫苗)免疫后, 可誘導(dǎo)ctl和抗hbs的產(chǎn)生，效果較理想。如hbc/hbe dna 疫苗，用這兩種質(zhì)粒dna免疫小鼠，可有效地產(chǎn)生特異性抗 體，重要的是產(chǎn)生非常強(qiáng)烈的主要組織相容性復(fù)合物(mhc) 類限制性ctl

10、應(yīng)答，但對chb患者的治療還需要進(jìn)行深入的 研究。美國馬里蘭大學(xué)醫(yī)學(xué)院疫苗發(fā)展中心(1999)采用基 因槍轟擊皮膚方法接種編碼hbsag的dna疫苗，劑量0. 25 mg/次，共2次，6位志愿者中1人在接種一次以后血液中即 出現(xiàn)高滴度抗hbs抗體，在其余5人未檢測到hbs,抗體 陽轉(zhuǎn)的志愿者以前曾有hbv接觸史，說明hbsag的dna疫苗 能在人體誘生回憶性免疫反應(yīng)，但低劑量不能誘生初級 (primary)免疫應(yīng)答。2000年美國powerject疫苗公司(12), 用基因槍轟擊皮膚方法接種編碼hbsag的dna疫苗，劑量1、 2或4 mg/次，共3次，每劑量組4位志愿者，結(jié)果每位志 愿者均產(chǎn)

11、生了保護(hù)水平的抗體(至少10 miu/m 1)和cd+4、 cd+8t細(xì)胞免疫應(yīng)答，且t細(xì)胞免疫應(yīng)答主要表現(xiàn)為thl型, 尤其在hla a2陽性志愿者能誘生強(qiáng)的表位（hbsag 335 343）特異性ctl反應(yīng)，說明dna疫苗具有可靠的安全 性，被接種者能較好耐受。但是dna疫苗應(yīng)用于較大體重的 動(dòng)物時(shí)，要求質(zhì)粒的有效劑量也越大，而且，抗體持續(xù)時(shí)間 短暫，可見dna疫苗對大型動(dòng)物的免疫效果尚不理想。1.2.2多價(jià)核酸疫苗 無論是同種多價(jià)核酸疫苗 （如hbv hcv dna疫苗13）還是異種多價(jià)核酸疫苗（如 hbv hiv dna疫苗（14）都能在大動(dòng)物水平上產(chǎn)生針對不 同病毒的較高滴度抗體，但

12、效價(jià)不如蛋白疫苗高（15l同 時(shí)還可誘導(dǎo)以ctl為主、thl為輔的細(xì)胞免疫，這對擴(kuò)大免 疫范圍，減少免疫次數(shù)，發(fā)展多價(jià)dna疫苗，具有良好的研 究和應(yīng)用前景。由于質(zhì)粒dna可在體內(nèi)長期穩(wěn)定地表達(dá)抗原 蛋白，所以用這種將多病毒抗原構(gòu)建在一個(gè)質(zhì)粒中的嵌合載 體技術(shù)來研制多效價(jià)疫苗有著巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。但它 也有不足，由于dna疫苗的實(shí)驗(yàn)多來自動(dòng)物，用于人體的安 全性（疫苗的dna可與宿主基因組整合而誘發(fā)抑制癌基因的 滅活和原癌基因的活化，注射疫苗后機(jī)體可產(chǎn)生抗dna抗體 和自身抗體，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異的免疫耐受和潛在對感染肝 細(xì)胞強(qiáng)烈的細(xì)胞毒反應(yīng)）和有效性需要進(jìn)一步深入研究。此 外，dna免疫經(jīng)

13、肌肉注射所需的dna量大，免疫注射技術(shù)要 求嚴(yán)格。1.3其他利用病毒載體如牛痘活腺病毒表達(dá)iibsag 接種黑猩猩的實(shí)驗(yàn)提示，其誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體效價(jià)明顯低于亞 單位疫苗。vical公司使用帶有hbcag基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病 毒注入hbv持續(xù)感染的黑猩猩體內(nèi)，能在肝細(xì)胞表面表達(dá) hbcag并誘導(dǎo)產(chǎn)生hbcag特異的ctl,但同時(shí)并未發(fā)生hbv 標(biāo)志的變化。2免疫途徑接種方式包括皮內(nèi)注射和肌肉注射兩種途徑。dna疫 苗應(yīng)用時(shí)使用的基因槍，是種無針頭的皮膚粉末推注器。在 氮?dú)鉀_擊下，可將hbv dna疫苗無痛注入皮內(nèi)。黏附在顯微 金粉顆粒上的hbv dna質(zhì)粒在表皮細(xì)胞內(nèi)和金粉分離，表達(dá) 目的抗原。此法

14、可大大節(jié)省dna疫苗的接種劑量，而且皮內(nèi) 注射的免疫途徑能誘生更強(qiáng)的hbv特異性免疫應(yīng)答。這是由 于樹突狀細(xì)胞在皮膚組織中分布密度高，更有利于抗原的攝 取和呈遞。但存在需特殊設(shè)備、難于推廣等缺陷。raz等（16 報(bào)道，直接給小鼠經(jīng)皮內(nèi)注射編碼流感病毒核蛋白基因的質(zhì) 粒dna,可誘生能持續(xù)大于6870 w的抗核蛋白特異性抗體 和ctl。而皮上劃痕法效果較差，可能與操作中dna量不易 控制有關(guān)。如能進(jìn)一步證實(shí)皮內(nèi)直接接種可誘發(fā)持久有效的 保護(hù)性免疫應(yīng)答，則有可能通過皮內(nèi)或皮下注射等常規(guī)途徑 進(jìn)行dna疫苗接種，使dna疫苗更易于被接受和推廣。3結(jié)語乙型肝炎是由乙肝病毒引起的疾病，主要危害在于感 染

15、后變?yōu)槁愿窝谆虿《緮y帶者，對此類患者目前尚缺乏有 效的治療方法，故常導(dǎo)致患者病情遷延不愈，部分患者發(fā)展 為肝硬化甚至肝癌(hcc) 17)。乙肝治療性疫苗具有費(fèi)用 低、安全、療效好等的特點(diǎn)，從發(fā)展趨勢來看，乙肝治療性 疫苗將成為本世紀(jì)對慢性hbv攜帶者治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。 但是這些新型乙肝疫苗大多處于研究階段，雖各有優(yōu)點(diǎn)，但 也存在一些問題。如dna疫苗能誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞和體液免疫 應(yīng)答，可打破特異性ctl耐受，但其安全性和標(biāo)準(zhǔn)化問題尚 待深入研究。多表位基因疫苗或多表位短肽疫苗為多價(jià)疫苗 研究提供了新的途徑，并以獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)成為疫苗研究新的熱 點(diǎn)，可能有新的突破點(diǎn)，但在表位選擇、疫苗設(shè)計(jì)等領(lǐng)域尚

16、 處于探索階段，無成熟的理論，且需克服表位疫苗固有的免 疫原性弱的缺陷?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 pol s, nalpas b, driss f, et al. efficacy and limitations of a specific immunotherapy in chronic hepatitis b (jj hepatol,2001；34:91721.2 dikici b, bosnak m, ucmak h, et al. failure of therapeutic vaccination using hepatitis b surface anti gen vaccine in th

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