常見化學發(fā)光體系簡述

1、連海燕2015-11-25目錄目錄化學發(fā)光免疫分析基本原理化學發(fā)光免疫分析基本原理常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系化學發(fā)光免疫分析法分類化學發(fā)光免疫分析法分類常用進口發(fā)光免疫分析產(chǎn)品常用進口發(fā)光免疫分析產(chǎn)品化學發(fā)光免疫分析基本原理化學發(fā)光免疫分析基本原理化學發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學發(fā)光分析2個系統(tǒng)免疫分析系統(tǒng)免疫分析系統(tǒng)是將化學發(fā)光物質(zhì)或酶作為標記物,直接標記在抗原或抗體上,經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復合物?；瘜W發(fā)光分析系統(tǒng)化學發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后,形成一個處于激發(fā)態(tài)的中間體,會發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定基態(tài)

2、,發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測，根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系,可利用標準曲線計算出被測物的含量。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience魯米諾化學發(fā)光體系魯米諾化學發(fā)光體系 魯米諾（luminol）、異魯米諾（isoluminol）及其衍生物的發(fā)光為氧化反應(yīng)發(fā)光，它們在堿性條件下通過辣根過氧化物酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發(fā)態(tài)中間體，當其回到基態(tài)時發(fā)出光子。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體

3、系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience魯米諾化學發(fā)光體系魯米諾化學發(fā)光體系魯米諾及其衍生物的增敏化學發(fā)光機制魯米諾及其衍生物的增敏化學發(fā)光機制常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience吖啶酯化學發(fā)光吖啶酯化學發(fā)光體系體系 光澤精是第一個被發(fā)現(xiàn)有化學發(fā)光性質(zhì)的吖啶類化合物，也是應(yīng)用最廣泛的一種吖啶酯類發(fā)光試劑。 吖

4、啶類化合物的發(fā)光效率高，量子產(chǎn)率可達0.05，作為標記物用于免疫分析，其發(fā)光體系簡單、快速，不需要加入催化劑，也不需要增強劑，從而降低了背景發(fā)光，提高了信噪比，干擾作用少。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience吖啶酯化學發(fā)光吖啶酯化學發(fā)光體系體系吖啶酯化學發(fā)光機制吖啶酯化學發(fā)光機制常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content desig

5、n, 10 years experienceAMPPD化學發(fā)光體系化學發(fā)光體系 （金剛烷）-1,2-二氧環(huán)乙烷及其衍生物的發(fā)光體系是目前最重要、最靈敏的一類發(fā)光體系，主要代表：ALP-AMPPD發(fā)光體系。 該體系中溶液的pH增高會增強發(fā)光強度,實驗證明最佳pH為9.0，在該體系中加入水溶性的大分子物質(zhì)牛血清白蛋白(BSA)或十四烷酰氨基熒光素與十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)構(gòu)成的水溶性膠粒,可使發(fā)光強度增強400倍。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years

6、 experienceAMPPD化學發(fā)光體系化學發(fā)光體系 3-（2-螺旋金剛烷）-4-（3-磷氧酰）苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷（AMPPD）。 AMPPD是一種超敏感的AP底物,它首先在AP的特異催化下迅速脫磷酸基生成AMPD-陰離子中間體(半衰期230 min), 此不穩(wěn)定的中間體經(jīng)分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移裂解為一分子的金鋼烷酮和一分子處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子，當回到基態(tài)時發(fā)出發(fā)出 max為477 nm的光，并可持續(xù)幾十分鐘。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 ye

7、ars experienceAMPPD化學發(fā)光體系化學發(fā)光體系A(chǔ)MPPD及其衍生物化學發(fā)光機制及其衍生物化學發(fā)光機制常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience電化學發(fā)光體系電化學發(fā)光體系 電化學發(fā)光的反應(yīng)在電極表面進行,發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕Ru(byp) 32+,三丙胺(TPA)用來激發(fā)光反應(yīng) 在陽極表面,兩種物質(zhì)同時失去電子。在電極板上Ru(byp)32+被氧化成Ru(byp)33+ TPA也被氧化成陽離子自由(TPA+*), TPA+

8、*自發(fā)地釋放一個質(zhì)子而變成非穩(wěn)定分子(TPA*), 將一個電子遞Ru(byp)33+, 形成激發(fā)態(tài)的Ru(byp)32+ *。 Ru(byp)32+在衰減的同時發(fā)射一個波長為620 nm的光子,重新回到基態(tài)Ru(byp)32+常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience電化學發(fā)光體系電化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content

9、design, 10 years experience高錳酸鉀化學發(fā)光體系高錳酸鉀化學發(fā)光體系 反應(yīng)機理：化學反應(yīng)誘導的激發(fā)態(tài)Mn()的磷光，類似于固態(tài)Mn ()4T16A1的轉(zhuǎn)換。 高錳酸鉀發(fā)光反應(yīng)分為兩類：（1）直接與高錳酸鉀反應(yīng)產(chǎn)生化學發(fā)光；（2）利用增敏劑增強高錳酸鉀化學發(fā)光。 目前提出的高錳酸鉀化學發(fā)光機理中發(fā)光體主要有兩類：激發(fā)態(tài)的錳或錳的配合物；單線態(tài)氧的二分子復合物。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience生物發(fā)光體系生

10、物發(fā)光體系 北美熒火蟲體內(nèi)的熒光素/熒光素酶是著名的生物化學發(fā)光體系,它由蟲熒光素酶、蟲熒光素D-(-)-2-6-羧基-2苯并噻唑-2-噻唑啉-4-羧酸、ATP、Mg2+及O2所組成。 蟲熒光素酶在催化時,首先與蟲熒光素酰腺苷酸(由Mg2+-ATP與蟲熒光素復合而成)生成復合物,然后該復合物放出質(zhì)子,酶變構(gòu)導致蟲熒光素氧化脫羧并發(fā)射光子。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience生物發(fā)光體系生物發(fā)光體系另一生物發(fā)光體系是水母發(fā)光蛋白,它不

11、需要加入熒光素酶,只需加入Ca2+或Se2+便能通過分子內(nèi)反應(yīng)而發(fā)出 max為470 nm的藍光。生物發(fā)光體系的特點是發(fā)光效率、靈敏度、選擇性均非常高。常見的化學發(fā)光體系常見的化學發(fā)光體系231 N-溴代琥珀亞酰胺發(fā)光體系 高碘酸鉀化學發(fā)光體系 Ce（IV）化學發(fā)光體系 過氧化草酸化學發(fā)光體系 鐵氰化鉀發(fā)光體系 羅丹明族化合物化學發(fā)光體系其他化學發(fā)光其他化學發(fā)光體系體系化學發(fā)光免疫分析法分類化學發(fā)光免疫分析法分類直接化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析電化學發(fā)光免疫分析電化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光免疫分析用吖啶酯直接標記抗體(抗原)，與

12、待測標本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-吖啶酯標記抗體復合物，這時只需加入氧化劑（H2O2）和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正比可從標準曲線上計算出待測抗原的含量。直接化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光的機制直接化學發(fā)光的機制化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析用參與催化某一化學發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶(ALP)來標記抗原或抗體，在與待測標本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-

13、酶標記抗體復合物，經(jīng)洗滌后，加入底物(發(fā)光劑)，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯螅侔阉鼈儌魉椭劣嬎銠C數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度。Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析采用辣根過氧化物酶（HRP）標記抗體(或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測標本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶（HRP）標記抗體復合物，這時加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學發(fā)光增強劑使產(chǎn)生化學發(fā)光。化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析堿性磷酸酶標記的化學發(fā)光免疫分析堿性磷酸酶標記的化學發(fā)光免疫分析以堿性磷酸酶 標記抗體(或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測標本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，這時加入AMPPD發(fā)光劑，堿性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團而發(fā)光?；瘜W發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析堿性磷酸酶標