常見化學(xué)發(fā)光體系簡(jiǎn)述

1、連海燕2015-11-25目錄目錄化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系化學(xué)發(fā)光免疫分析法分類化學(xué)發(fā)光免疫分析法分類常用進(jìn)口發(fā)光免疫分析產(chǎn)品常用進(jìn)口發(fā)光免疫分析產(chǎn)品化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理化學(xué)發(fā)光免疫分析基本原理化學(xué)發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析2個(gè)系統(tǒng)免疫分析系統(tǒng)免疫分析系統(tǒng)是將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶作為標(biāo)記物,直接標(biāo)記在抗原或抗體上,經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復(fù)合物?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后,形成一個(gè)處于激發(fā)態(tài)的中間體,會(huì)發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定基態(tài)

2、,發(fā)光強(qiáng)度可以利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)物的含量。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience魯米諾化學(xué)發(fā)光體系魯米諾化學(xué)發(fā)光體系 魯米諾（luminol）、異魯米諾（isoluminol）及其衍生物的發(fā)光為氧化反應(yīng)發(fā)光，它們?cè)趬A性條件下通過辣根過氧化物酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時(shí)發(fā)出光子。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體

3、系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience魯米諾化學(xué)發(fā)光體系魯米諾化學(xué)發(fā)光體系魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光機(jī)制魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光機(jī)制常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience吖啶酯化學(xué)發(fā)光吖啶酯化學(xué)發(fā)光體系體系 光澤精是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光性質(zhì)的吖啶類化合物，也是應(yīng)用最廣泛的一種吖啶酯類發(fā)光試劑。 吖

4、啶類化合物的發(fā)光效率高，量子產(chǎn)率可達(dá)0.05，作為標(biāo)記物用于免疫分析，其發(fā)光體系簡(jiǎn)單、快速，不需要加入催化劑，也不需要增強(qiáng)劑，從而降低了背景發(fā)光，提高了信噪比，干擾作用少。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience吖啶酯化學(xué)發(fā)光吖啶酯化學(xué)發(fā)光體系體系吖啶酯化學(xué)發(fā)光機(jī)制吖啶酯化學(xué)發(fā)光機(jī)制常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content desig

5、n, 10 years experienceAMPPD化學(xué)發(fā)光體系化學(xué)發(fā)光體系 （金剛烷）-1,2-二氧環(huán)乙烷及其衍生物的發(fā)光體系是目前最重要、最靈敏的一類發(fā)光體系，主要代表：ALP-AMPPD發(fā)光體系。 該體系中溶液的pH增高會(huì)增強(qiáng)發(fā)光強(qiáng)度,實(shí)驗(yàn)證明最佳pH為9.0，在該體系中加入水溶性的大分子物質(zhì)牛血清白蛋白(BSA)或十四烷酰氨基熒光素與十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)構(gòu)成的水溶性膠粒,可使發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)400倍。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years

6、 experienceAMPPD化學(xué)發(fā)光體系化學(xué)發(fā)光體系 3-（2-螺旋金剛烷）-4-（3-磷氧酰）苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷（AMPPD）。 AMPPD是一種超敏感的AP底物,它首先在AP的特異催化下迅速脫磷酸基生成AMPD-陰離子中間體(半衰期230 min), 此不穩(wěn)定的中間體經(jīng)分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移裂解為一分子的金鋼烷酮和一分子處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子，當(dāng)回到基態(tài)時(shí)發(fā)出發(fā)出 max為477 nm的光，并可持續(xù)幾十分鐘。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 ye

7、ars experienceAMPPD化學(xué)發(fā)光體系化學(xué)發(fā)光體系A(chǔ)MPPD及其衍生物化學(xué)發(fā)光機(jī)制及其衍生物化學(xué)發(fā)光機(jī)制常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience電化學(xué)發(fā)光體系電化學(xué)發(fā)光體系 電化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)在電極表面進(jìn)行,發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕Ru(byp) 32+,三丙胺(TPA)用來激發(fā)光反應(yīng) 在陽(yáng)極表面,兩種物質(zhì)同時(shí)失去電子。在電極板上Ru(byp)32+被氧化成Ru(byp)33+ TPA也被氧化成陽(yáng)離子自由(TPA+*), TPA+

8、*自發(fā)地釋放一個(gè)質(zhì)子而變成非穩(wěn)定分子(TPA*), 將一個(gè)電子遞Ru(byp)33+, 形成激發(fā)態(tài)的Ru(byp)32+ *。 Ru(byp)32+在衰減的同時(shí)發(fā)射一個(gè)波長(zhǎng)為620 nm的光子,重新回到基態(tài)Ru(byp)32+常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience電化學(xué)發(fā)光體系電化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content

9、design, 10 years experience高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光體系高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光體系 反應(yīng)機(jī)理：化學(xué)反應(yīng)誘導(dǎo)的激發(fā)態(tài)Mn()的磷光，類似于固態(tài)Mn ()4T16A1的轉(zhuǎn)換。 高錳酸鉀發(fā)光反應(yīng)分為兩類：（1）直接與高錳酸鉀反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光；（2）利用增敏劑增強(qiáng)高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光。 目前提出的高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光機(jī)理中發(fā)光體主要有兩類：激發(fā)態(tài)的錳或錳的配合物；單線態(tài)氧的二分子復(fù)合物。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience生物發(fā)光體系生

10、物發(fā)光體系 北美熒火蟲體內(nèi)的熒光素/熒光素酶是著名的生物化學(xué)發(fā)光體系,它由蟲熒光素酶、蟲熒光素D-(-)-2-6-羧基-2苯并噻唑-2-噻唑啉-4-羧酸、ATP、Mg2+及O2所組成。 蟲熒光素酶在催化時(shí),首先與蟲熒光素酰腺苷酸(由Mg2+-ATP與蟲熒光素復(fù)合而成)生成復(fù)合物,然后該復(fù)合物放出質(zhì)子,酶變構(gòu)導(dǎo)致蟲熒光素氧化脫羧并發(fā)射光子。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience生物發(fā)光體系生物發(fā)光體系另一生物發(fā)光體系是水母發(fā)光蛋白,它不

11、需要加入熒光素酶,只需加入Ca2+或Se2+便能通過分子內(nèi)反應(yīng)而發(fā)出 max為470 nm的藍(lán)光。生物發(fā)光體系的特點(diǎn)是發(fā)光效率、靈敏度、選擇性均非常高。常見的化學(xué)發(fā)光體系常見的化學(xué)發(fā)光體系231 N-溴代琥珀亞酰胺發(fā)光體系 高碘酸鉀化學(xué)發(fā)光體系 Ce（IV）化學(xué)發(fā)光體系 過氧化草酸化學(xué)發(fā)光體系 鐵氰化鉀發(fā)光體系 羅丹明族化合物化學(xué)發(fā)光體系其他化學(xué)發(fā)光其他化學(xué)發(fā)光體系體系化學(xué)發(fā)光免疫分析法分類化學(xué)發(fā)光免疫分析法分類直接化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光免疫分析用吖啶酯直接標(biāo)記抗體(抗原)，與

12、待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測(cè)抗原-吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)只需加入氧化劑（H2O2）和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測(cè)抗原的量成正比可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原的含量。直接化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)制直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)制化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶(ALP)來標(biāo)記抗原或抗體，在與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測(cè)抗原-

13、酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入底物(發(fā)光劑)，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并加以放大，再把它們傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出測(cè)定物的濃度。Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析辣根過氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析辣根過氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析采用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體(或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測(cè)抗原-酶（HRP）標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑使產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析辣根過氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析辣根過氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析以堿性磷酸酶 標(biāo)記抗體(或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測(cè)抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)加入AMPPD發(fā)光劑，堿性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團(tuán)而發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析堿性磷酸酶標(biāo)